朱蓉,李欣,曹俊涵
(成都市食品藥品檢測(cè)中心,四川 成都610045)
頂空毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定異丙托溴銨中7種殘留有機(jī)溶劑
朱蓉*,李欣,曹俊涵
(成都市食品藥品檢測(cè)中心,四川 成都610045)
目的:建立頂空毛細(xì)管氣相色譜法,測(cè)定異丙托溴銨中甲醇?丙酮?異丙醇?二氯甲烷?乙酸乙酯?三氯甲烷?甲苯等7種有機(jī)溶劑殘留量。方法:色譜柱:DM-624(聚乙二醇PEG-20M)毛細(xì)管柱(30.0m×0.53mm,3.00μm);載氣:氮?dú)?流速為2.0mL·min-1;柱溫:程序升溫,初始溫度為40℃,保持5min,然后以6℃·min-1升溫到150℃,再以50℃·min-1升溫到230℃,保持3min;檢測(cè)器:氫火焰離子化檢測(cè)器,溫度為250℃;進(jìn)樣口溫度:240℃;頂空進(jìn)樣量:1.0mL。結(jié)果:甲醇?丙酮?異丙醇?二氯甲烷?乙酸乙酯?三氯甲烷和甲苯分別在15.02~900.92mg·L-1(r=0.9999)、21.03~1262.00mg·L-1(r=0.9999)、21.30~1278.16mg·L-1(r=0.9999)、7.80~468.25mg·L-1(r=0.9998)、22.22~1332.97mg·L-1(r=0.9999)、0.31~18.79mg·L-1(r=0.9992)和3.48~209.02mg·L-1(r=0.9998)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,平均回收率分別為98.1%(RSD=0.19%)、100.1%(RSD=1.08%)、101.4%(RSD=1.03%)、98.1%(RSD=0.40%)、98.1%(RSD=1.55%)、98.9%(RSD=3.08%)和101.8%(RSD=2.12%)。結(jié)論:該方法簡(jiǎn)便?靈敏?重復(fù)性好,結(jié)果準(zhǔn)確,適用于異丙托溴銨中殘留有機(jī)溶劑的檢測(cè)。
頂空毛細(xì)管氣相色譜法;異丙托溴銨;殘留有機(jī)溶劑
異丙托溴銨系對(duì)支氣管平滑肌有較高選擇性的強(qiáng)效抗膽堿藥,化學(xué)名為3-(3-羥基-1-氧代-2-苯基丙氧基)-8-甲基-8-(1-甲基乙基)-8-氮雜雙環(huán)辛烷溴化物。其在合成過程中使用的甲醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷、甲苯等有機(jī)溶劑,往往還會(huì)殘留在最終產(chǎn)品中,未能完全除去,且它們均屬于二、三類溶劑,對(duì)人體和環(huán)境有潛在危害,人用藥物注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)(ICH)頒布的《殘留溶劑指導(dǎo)原則》[1]和2010版《中國(guó)藥典》[2]對(duì)異丙托溴銨產(chǎn)品中所涉及的這7種有機(jī)溶劑均規(guī)定了殘留限度。本文參照文獻(xiàn)[3],采用頂空毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定異丙托溴銨中這7種溶劑的殘留量,所建立的測(cè)定方法簡(jiǎn)便、靈敏、重復(fù)性好,結(jié)果準(zhǔn)確,適用于異丙托溴銨中殘留有機(jī)溶劑的檢測(cè)。
Agilent 6890N 氣相色譜儀;頂空進(jìn)樣器(PerkinElmer公司)。甲醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷、甲苯、二甲基亞砜(DMSO)均為色譜純。異丙托溴銨樣品(含量100.5%,Aarti Industries有限公司,批號(hào):IB-10002、IB-11001、IB-11002)。
2.1 色譜條件
色譜柱:DM-624毛細(xì)管柱(30.0m×0.53mm,3.00μm);載氣:氮?dú)猓魉贋?.0 mL·min-1;柱溫:程序升溫,初始溫度為40℃,保持5min,然后以6℃·min-1升溫到150℃,再以50℃·min-1升溫到230℃,保持3min;檢測(cè)器:氫火焰離子化檢測(cè)器(FID),溫度為250℃;進(jìn)樣口溫度:240℃;頂空條件:頂空瓶平衡溫度為100℃,平衡時(shí)間為15min,定量環(huán)為1.0mL,定量環(huán)溫度為110℃,傳輸管溫度為115℃。
2.2 溶液制備
2.2.1 供試品溶液 稱取異丙托溴銨樣品約0.5g,置于頂空進(jìn)樣瓶中,精密加入DMSO 5mL,用鋁隔膜封好瓶口,超聲處理,使樣品溶解,搖勻,即得。
2.2.2 對(duì)照品溶液 精確稱取甲醇1.5g、丙酮2.5g、異丙醇2.5g、二氯甲烷0.3g、乙酸乙酯2.5g、三氯甲烷0.03g和甲苯0.45g,置于同一裝有100mL DMSO的250mL量瓶中,混合均勻,用DMSO稀釋至刻度,搖勻,得儲(chǔ)備液;精密量取儲(chǔ)備液5mL置于100mL量瓶中用DMSO稀釋至刻度,搖勻,即得。
2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
取DMSO空白溶液和對(duì)照品溶液適量,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件,分別進(jìn)樣檢測(cè),記錄色譜圖(見圖1)。
圖1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜圖
由圖1可見,7種溶劑均能達(dá)到基線分離,DMSO不干擾各溶劑的測(cè)定;以甲醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷和甲苯峰計(jì)算的理論塔板數(shù)分別為28516、65168、86730、1152494、155837、327212、231278,均不低于5000;根據(jù)溶劑出峰順序,各相鄰溶劑峰之間的分離度分別為17.23、1.59、5.07、19.44、4.21、36.38,均大于1.5。
2.4 線性考察
精密稱取甲醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷和甲苯各適量,按表1用DMSO分別稀釋并配制這7種溶劑的線性儲(chǔ)備液各50mL。
精密量取各儲(chǔ)備液適量,分別用DMSO定量稀釋并配得不同的7個(gè)質(zhì)量濃度的各溶劑系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,進(jìn)樣檢測(cè),記錄色譜圖。以溶劑峰面積(A )對(duì)質(zhì)量濃度(C )進(jìn)行線性回歸,得回歸方程和線性范圍(見表2)。
表1 7種溶劑線性儲(chǔ)備液的配制Table 1 Preparation of the linear stock solutions of seven solvents
表2 7種溶劑的回歸方程和線性范圍Table 2 Regression equations and linear ranges of seven solvents
2.5 加樣回收率試驗(yàn)
精密稱取甲醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷和甲苯各適量,將2010版《中國(guó)藥典》二部附錄中殘留溶劑測(cè)定法所規(guī)定的各溶劑限度[2]視作其含量為100%,精密量取表1中7種溶劑儲(chǔ)備液2.0、2.5和3.0mL,分別置100mL量瓶中,用DMSO定容至刻度,搖勻,各精密量取5mL,加入異丙托溴銨樣品0.5g(經(jīng)測(cè)定,其中各殘留溶劑含量均低于檢出限),混勻,即配得各溶劑含量為80%、100%和120%的樣品溶液,每個(gè)溶劑含量的樣品溶液平行3份,進(jìn)樣檢測(cè),記錄色譜圖,并計(jì)算各溶劑的回收率,結(jié)果見表3。
表3 7種溶劑的回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 3 Results of recovery test for seven solvents
2.6 進(jìn)樣精密度試驗(yàn)
精密量取對(duì)照品溶液5mL,置于頂空進(jìn)樣瓶中,封瓶并超聲處理,連續(xù)進(jìn)樣6次,記錄色譜圖。結(jié)果,測(cè)得甲醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷和甲苯的峰面積RSD分別為3.55%、3.50%、3.53%、3.54%、3.57%、3.51%和3.59%(n=6)。
2.7 檢測(cè)限與定量限考察
精密量取按“2.3”項(xiàng)下方法配制的各溶劑儲(chǔ)備液適量,分別用DMSO定量稀釋,配得各溶劑不同質(zhì)量濃度的溶液,進(jìn)樣檢測(cè),以信噪比(S/N)為3∶1時(shí)測(cè)定各溶劑的檢測(cè)限,以S/N為10∶1時(shí)測(cè)定各溶劑的定量限,結(jié)果見表4。
表4 7種溶劑的檢測(cè)限和定量限Table 4 Limits of detection and limits of quantification for seven solvents
2.8 重復(fù)性試驗(yàn)
稱取同一批次異丙托溴銨樣品適量(即所含各溶劑殘留量約為藥典規(guī)定限度的樣品量),用DMSO配制供試溶液6份,進(jìn)樣檢測(cè)。結(jié)果,所測(cè)供試溶液中甲醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷和甲苯含量的RSD均小于3.6%(n=6)。
2.9 樣品測(cè)定
按“2.2.1”項(xiàng)下方法,配制3批次異丙托溴銨樣品(批號(hào):IB-10002、IB-11001、IB-11002)的供試品溶液,進(jìn)樣檢測(cè)。結(jié)果,3批次樣品中7種殘留溶劑含量均低于檢測(cè)限,其中一批次樣品色譜圖見圖2。
圖2 樣品色譜圖
3.1 進(jìn)樣方式的選擇
頂空進(jìn)樣具有選擇性好、基質(zhì)屏蔽作用強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),無論從方法的可操作性,還是從色譜儀的保護(hù)角度來看,其都是對(duì)樣品中殘留溶劑進(jìn)行毛細(xì)管氣相色譜分析時(shí)的首選進(jìn)樣方式。且異丙托溴銨中7種殘留有機(jī)溶劑的沸點(diǎn)均不超過100℃,適于頂空進(jìn)樣。本實(shí)驗(yàn)表明,在100℃的加熱平衡條件下,各溶劑加樣回收率達(dá)90%以上,且樣品穩(wěn)定,未發(fā)生熱分解,所采集的色譜圖基線穩(wěn)定,基本無基質(zhì)干擾。故選擇頂空進(jìn)樣法用于異丙托溴銨中殘留溶劑的毛細(xì)管氣相色譜檢測(cè)。
3.2 樣品溶劑的選擇
異丙托溴銨中7種殘留有機(jī)溶劑的極性跨度大,既有水溶性的,也有非水溶性的,但它們均能很好地溶解于DMSO。因此,選用DMSO作為樣品溶劑。
3.3 程序升溫的選擇
2010版《中國(guó)藥典》中毛細(xì)管頂空進(jìn)樣方法所采用的程序升溫步驟[2]不適用于異丙托溴銨中殘留有機(jī)溶劑的測(cè)定,其中初始溫度維持時(shí)間過長(zhǎng)[3],可導(dǎo)致極性和沸點(diǎn)相差較大但色譜行為相似的丙酮與異丙醇的色譜峰無法達(dá)到基線分離;且升溫速率過快,可導(dǎo)致二氯甲烷、乙酸乙酯和三氯甲烷峰無法分離。所以,本實(shí)驗(yàn)中,為了保障各溶劑峰的分離度符合要求,將初始溫度的維持時(shí)間選定為5min,并先選擇6℃·min-1緩慢升溫,待乙酸乙酯峰和三氯甲烷分離出峰后,再以50℃·min-1快速升溫到230℃,保證甲苯等弱極性成分及早出峰,盡量縮短分析時(shí)間,使樣品中7種極性差異較大的殘留有機(jī)溶劑得到了較為滿意的分離檢測(cè)。
[1]人用藥物注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì).殘留溶劑指導(dǎo)原則[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2000:236.
[2]國(guó)家藥典委員會(huì).殘留溶劑測(cè)定法[M]//中華人民共和國(guó)藥典(二部).北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:附錄ⅧP.
[3]張億,朱蓉.頂空毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定西洛他唑中有機(jī)溶劑的殘留量[J].藥物分析雜志,2006,26(7):1026-1027.
Determination of Seven Residual Organic Solvents in Ipratropium Bromide by Headspace Capillary Gas Chromatography
ZHU Rong, LI Xin, CAO Junhan
(Chengdu Center of Food and Drug Control, Chengdu 610045, China)
Objective:To establish a headspace capillary gas chromatography method for the determination of seven organic solvent residues including methanol, acetone, isopropanol, methylene dichloride, ethyl acetate, chloroform and toluene, in ipratropium bromide. Methods:A DM-624(polyethylene glycol PEG-20M) capillary column (30.0m × 0.53mm, 3.00μm) was used with nitrogen as carrier gas at a flow rate of 2.0 mL·min-1, a hydrogen flame ionization detector (FID) at a temperature of 250℃, an inlet temperature of 240℃and a headspace sampling volume of 1.0 mL. The column oven was temperature-programmed as follows: the initial temperature was 40℃for 5 min and then the temperature increased to 150℃at 6℃·min-1and to 230℃at 50℃·min-1for 3 min. Results: The linear ranges of the seven solvents were 15.02-900.92 mg·L-1(r=0.999 9) for methanol, 21.03-1 262.00 mg·L-1(r=0.999 9) for acetone, 21.30-1 278.16 mg·L-1(r=0.999 9) for isopropanol, 7.80-468.25 mg·L-1(r=0.999 8) for methylene dichloride, 22.22-1 332.97 mg·L-1(r=0.999 9) for ethyl acetate, 0.31-18.79 mg·L-1(r=0.999 2) for chloroform and 3.48-209.02 mg·L-1(r=0.999 8) for toluene, respectively. Their average recoveries were 98.1% (RSD=0.19%) for methanol, 100.1% (RSD=1.08%) for acetone, 101.4% (RSD=1.03%) for isopropanol, 98.1% (RSD=0.40%) for methylene dichloride, 98.1% (RSD=1.55%) for ethyl acetate, 98.9% (RSD=3.08%) for chloroform and 101.8% (RSD=2.12%) for toluene, respectively. Conclusion: The method is simple, sensitive, reproducible and accurate. It is suitable for the determination of residual organic solvents in ipratropium bromide.
headspace capillary gas chromatography; ipratropium bromide; residual organic solvent
O657.71;R927.1
B
1001-5094(2014)02-0146-04
接受日期:2013-09-18
*通訊作者:朱蓉,副主任藥師,從事化學(xué)藥品分析工作;
Tel:028-85362213;E-mail:zhur63@126.com