楊智航 李 楠 張 量 郭 麗 王 晶 張 忠

(沈陽醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，遼寧 沈陽 110034)

胃黏膜的癌變過程是多因素共同作用的結(jié)果。蛙皮素(BN)是具有生長因子樣作用的腦腸肽，可以促進(jìn)各類細(xì)胞特別是腫瘤細(xì)胞的增殖。然而，關(guān)于蛙皮素在胃黏膜的癌變過程中的動態(tài)變化規(guī)律及意義尚不清楚。本研究擬分析蛙皮素在胃黏膜癌變過程中不同階段的變化規(guī)律。

1 材料與方法

1.1研究對象 收集沈陽醫(yī)學(xué)院奉天醫(yī)院2011年5月至2012年12月間內(nèi)窺鏡中心接受胃鏡檢查者和部分手術(shù)患者(術(shù)前均未進(jìn)行放、化療等特殊治療)的胃黏膜組織94例，其中癌旁基本正常胃黏膜10例(對照組)，淺表性胃炎28例，萎縮性胃炎21例，胃黏膜不典型增生17例，胃癌18例。上述組織樣品，均經(jīng)HE染色，病理學(xué)診斷。全部病例中，男49例，女45例，平均年齡50.40歲(21～79歲)，各組間在性別及年齡構(gòu)成差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2主要試劑與儀器 兔抗人BN抗體(Abcam公司)；PV超敏試劑盒和濃縮型DAB顯色試劑盒(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)；LeicaRM 2235切片機(Leicarm)。

1.3免疫組化染色 標(biāo)本置于10%中性甲醛液中固定，石蠟包埋后制成切片。BN為即用型兔抗人抗體，稀釋比1∶100，按PV超敏試劑盒程序染色，DAB顯色。以PBS替換一抗作為陰性對照，以已知陽性切片作為陽性對照。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS13.0軟件行單因素方差分析。

2 結(jié) 果

BN蛋白免疫反應(yīng)陽性顆粒為棕黃色，主要表達(dá)在細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞核無著色。在對照組、淺表性胃炎和萎縮性胃炎黏膜組織中，呈散在分布，著色淺，表達(dá)量低；在胃黏膜不典型增生組織和胃癌組織中，呈彌漫性或簇狀分布，著色深，表達(dá)量高(圖1)。各組平均光密度值分別為對照組(0.126±0.025，n=10)、淺表性胃炎組(0.132±0.037，n=28)，萎縮性胃炎組(0.111±0.019，n=21)，三組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，不典型增生組(0.339±0.047，n=17)和胃癌組(0.395±0.062，n=18)均高于前三者，且兩組差異顯著(P<0.05)。

圖1 胃黏膜組織BN的表達(dá)(DAB，×200)

3 討 論

探討胃癌發(fā)生發(fā)展規(guī)律，尋找新的胃癌早期篩查或診斷的標(biāo)志物，實現(xiàn)早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷和早期治療的目的，對胃癌的防治及生存率的提高尤為重要。胃癌的發(fā)生過程中內(nèi)分泌的變化起到不可忽視的作用。BN是與胃癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的重要的胃腸激素之一，能促進(jìn)人胃癌細(xì)胞株SIIA細(xì)胞生長〔1〕。在體內(nèi)，BN拮抗劑能抑制裸鼠的人胃癌細(xì)胞移植瘤生長〔2〕。在研究化學(xué)致癌劑N-甲基-N`-硝基-N亞硝基胍(MNNG)誘發(fā)人胃黏膜上皮永生細(xì)胞系GES-1癌變的過程中，BN可與MNNG協(xié)同作用，引起Cyclin D1過度表達(dá)，從而促進(jìn)正常上皮細(xì)胞癌變〔3〕。葉序卷等〔4〕研究認(rèn)為雖然蛙皮素在體內(nèi)外能刺激胃癌細(xì)胞增殖，但與抗癌藥絲裂霉素C聯(lián)合后，可促進(jìn)胃癌細(xì)胞的凋亡，提高抗癌藥的療效。徐秀英等〔5，6〕研究發(fā)現(xiàn)BN能促進(jìn)BGC 823胃癌細(xì)胞的生長，且有劑量依賴性，此作用可以被特異性BN受體拮抗劑抑制。上述研究表明，BN可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，對胃癌的發(fā)生發(fā)展起著重要的促進(jìn)作用。

本研究結(jié)果提示，在胃黏膜癌變的過程中，BN的表達(dá)水平呈現(xiàn)前期平穩(wěn)、后期明顯增高的變化趨勢，表明BN的確參與其中；BN表達(dá)水平的變化對于胃癌的診斷具有重要的意義。各組胃黏膜組織中BN表達(dá)水平發(fā)生上述變化的機制可能是生理狀態(tài)下BN可在胃腸道內(nèi)少量分泌。在淺表性胃炎、萎縮性胃炎等病理過程中，BN的分泌未受到明顯影響。當(dāng)胃黏膜上皮細(xì)胞發(fā)生不典型增生和發(fā)生癌變時，不僅細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)異常，而且細(xì)胞的功能和代謝也產(chǎn)生異常，結(jié)果導(dǎo)致BN分泌增多，并以自分泌方式促進(jìn)癌變細(xì)胞增殖。已有研究發(fā)現(xiàn)，即使在不含有BN的無血清培養(yǎng)基中，特異性BN受體拮抗劑也可以直接抑制人胃癌細(xì)胞SGC 7901生長〔7〕。這提示，特異性受體拮抗劑可能是通過阻斷BN在胃癌細(xì)胞的自分泌環(huán)路而抑制腫瘤細(xì)胞生長的，從而有力地證明了人胃癌細(xì)胞株具有通過自分泌作用產(chǎn)生BN的能力，并通過BN促進(jìn)自身分化和增殖。近來香港大學(xué)和美國NIH的研究人員提出，癌細(xì)胞中某些特別蛋白的高表達(dá)水平是評價某些腫瘤是否進(jìn)展的一個可靠指標(biāo)〔8〕。本實驗結(jié)果提示BN的監(jiān)測及胃癌的診斷具有重要意義，BN是一種較好的胃癌診斷的生物學(xué)標(biāo)志物。

4 參考文獻(xiàn)

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3李景南，陳元方，錢家鳴，等.蛙皮素在人胃黏膜上皮永生細(xì)胞系化學(xué)癌變過程中的作用〔J〕.胃腸病學(xué)，2004；9(3)：141-4.

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8Lee TK，Murthy SR，Cawley NX，etal.An N-terminal truncated carboxypeptidase E splice isoform induces tumor growth and is a biomarker for predicting future metastasis in human cancers〔J〕.J Clin Invest，2011；121(3)：880-92.