吳亞京，艾 辛，蔡雁平

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝園林學(xué)院，湖南 長沙410128；2.株洲縣農(nóng)業(yè)局，湖南 株洲412100）

雪蓮果(Smallanthus Sonchifolius(Poepp.End1.)H.Robinson)屬菊科多年生草本塊根作物，起源于從智利的中北部到秘魯、厄瓜多爾的南美洲安第斯山脈的中高原地帶[1]，2004年開始引入云南省嵩明縣栽培[2]。雪蓮果塊根形如甘薯，皮薄汁多，果肉如雪梨，晶瑩剔透，香甜脆爽，生熟可食，含有較高果寡糖(低聚糖)，這種糖在人體內(nèi)不能被代謝，因此，有可能以飲食療法預(yù)防和治療糖尿病[3-4]，是一種既可作水果、蔬菜食用，又具有藥用價(jià)值的保健植物。國內(nèi)有關(guān)雪蓮果的研究報(bào)道多集中于引種、栽培、營養(yǎng)成分及功能分析等方面[5-6]，關(guān)于雪蓮果種苗繁殖方面的研究較少。由于雪蓮果栽培上采用塊莖繁殖，因此易患病毒病和存在種性退化問題[7]。應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)可快速繁殖種苗，實(shí)現(xiàn)大面積栽培，同時(shí)通過莖尖分生組織培養(yǎng)可獲得脫毒苗，解決種性退化問題。曾慎等對雪蓮果離體快繁[8]、試管苗移栽成活因素[9]、組培脫毒[7]等進(jìn)行了初步研究。劉德江[10]等人研究了雪蓮果葉片愈傷組織的誘導(dǎo)，獲得了對莖段形成芽、對再生植株誘導(dǎo)成根效果較好的培養(yǎng)基配方，但對愈傷組織的再分化成芽沒有獲得成功。馬杰，崔波[11]等人對雪蓮果幼嫩葉片和腋芽離體培養(yǎng)與植株再生過程進(jìn)行了研究，在短時(shí)間內(nèi)完成從誘導(dǎo)到再生植株形成的整個(gè)過程，實(shí)現(xiàn)了該植株再生體系的建立，該體系的建立大大加快了育苗進(jìn)程，對雪蓮果種苗快速繁殖和規(guī)?；a(chǎn)有著重要的指導(dǎo)意義。本試驗(yàn)在前人研究的基礎(chǔ)上，以雪蓮果帶腋芽的莖段為外植體材料探討激素（NAA、IBA和2，4-D）種類和濃度對雪蓮果快速繁殖的效果，為建立雪蓮果無毒種苗快繁技術(shù)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料為栽種于湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)智能溫室的雪蓮果苗。取生長健壯帶腋芽的莖段為試驗(yàn)材料。將外植體用洗衣粉水浸泡3～5min，再用清水(自來水)漂洗10～15min，然后在超凈工作臺無菌狀態(tài)下用75%酒精(V/V)表面滅菌30s，用無菌水漂洗3次，再用0.2%升汞溶液消毒5～7min，最后用無菌水漂洗4次。

1.2 培養(yǎng)基的配制

以MS為基本培養(yǎng)基，添加不同種類和濃度水平的生長素物質(zhì)（IBA、NAA、2，4-D如表1），培養(yǎng)基中附加蔗糖（30g·L-1）+瓊脂（6g·L-1），將培養(yǎng)基PH值調(diào)至

5.8～6 .0。

1.3 外植體培養(yǎng)

無菌條件下，將消毒后的雪蓮果切成長約1.0cm帶單腋芽的莖段，接種于不同濃度的培養(yǎng)基中（表1），每組處理接種20個(gè)三角瓶，每瓶豎立放4個(gè)帶腋芽莖段。接種好的外植體放置在溫度為（25±2）℃，光照為（白天光照16h，黑暗8h，光照強(qiáng)度約400μmol/(m2·s)）的條件下進(jìn)行培養(yǎng)。適時(shí)觀察各自的長根和長芽成苗的狀況。

取切割好的無菌帶腋芽莖段接種在MS+NAA0.1mg·L-1+蔗糖（30g·L-1）+瓊脂（6g·L-1）培養(yǎng)基，每瓶分別放5根、10根、15根。接種好的外植體放置在溫度為(25±2)℃，光照為（白天光照16h，黑暗8h，光照強(qiáng)度約400μmol/(m2·s)）的條件下進(jìn)行培養(yǎng)。適時(shí)觀察各自的長根和長芽成苗的狀況。

1.4 試管苗的移栽

試管苗完成生根后，將培養(yǎng)瓶放在通風(fēng)溫室內(nèi)，在自然光照條件下煉苗7～10d后，打開瓶蓋，再晾苗3d，然后用水洗去試管苗根部的固體培養(yǎng)基,最后將試管苗移栽到滅過菌的栽培基質(zhì)（腐質(zhì)土：珍珠巖=3：1）中。注意遮陰保濕，尤其是在移栽后10d內(nèi)要做到全天遮陰，晴天時(shí)注意噴水。待成活后揭去遮陽網(wǎng)，觀察苗的成活率。

2 結(jié)果與分析

2.1 生長物質(zhì)種類和濃度對腋芽莖段成苗的影響

雪蓮果莖段腋芽在沒有生長物質(zhì)的刺激的情況下雖然能夠成苗，但成苗率低，苗矮小。生長物質(zhì)都能誘導(dǎo)莖段腋芽萌發(fā)成苗，但它們在誘導(dǎo)成苗率、苗生長節(jié)數(shù)及成苗質(zhì)量上有差異（結(jié)果見圖1、表2）。2，4-D 0.15mg·L-1培養(yǎng)基對雪蓮果的帶腋芽的莖段成苗的效果最好，25d后成苗率達(dá)到了95%，平均苗高有6.2cm，平均苗節(jié)數(shù)有5節(jié)，節(jié)間長、粗壯，葉片肥厚且寬大（如圖1-1）。其次是NAA 0.1mg·L-1培養(yǎng)基(如圖1-2)，成苗率也達(dá)到了82.5%。而IBA對雪蓮果的成苗效果不明顯(如圖1-3)，成苗率不足50%，甚至低于對照。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，MS+2，4-D 0.15mg·L-1是最佳底色成苗培養(yǎng)基。所有的試管苗葉片都有不同程度的向下卷曲，尤以含2，4-D和NAA的培養(yǎng)基要嚴(yán)重一些，原因可能是與某些微量元素不足有關(guān)，有待進(jìn)一步試驗(yàn)。

表1 生長素類物質(zhì)種類和濃度

圖1 雪蓮果的莖段快繁苗

表2 生長物質(zhì)種類和濃度對雪蓮果帶腋芽莖段成苗的效果

2.2 生長物質(zhì)對雪蓮果莖段苗生根的影響

雪蓮果腋芽莖段分別接入培養(yǎng)基中的生根情況見圖2、表3。不管有無生長物質(zhì)，雪蓮果腋芽莖段外植體5～8天內(nèi)都開始長根，但不同外植體間的生根速度、根長和根數(shù)有差異。圖2為3種生長物質(zhì)最佳的濃度的生根情況。表3可知，接種20天后，MS+NAA 0.1mg·L-1和MA+2，4-D 0.15mg·L-1培養(yǎng)基生根率都達(dá)到了100%，而MS+IBA 0.1mg·L-1的生根率只達(dá)到了52.5%。MS+2，4-D 0.15mg·L-1培養(yǎng)基接種的外植體平均根長6.4cm，根系顏色呈墨綠色且粗壯，MS+NAA 0.1mg·L-1培養(yǎng)基接種的外植平均根長5.0，根系顏色呈黃褐色但細(xì)小。從總體的實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，MS+2，4-D 0.15mg·L-1培養(yǎng)基是最佳的生根培養(yǎng)基。

圖2 生長物質(zhì)對雪蓮果莖段快繁根系生長的影響

2.3 單瓶接種腋芽莖段數(shù)量對成苗的影響

MS+NAA0.1mg·L-1培養(yǎng)基接種的外植體，5d就開始長根，從長出第一條根開始10d內(nèi)根系生長較快，平均每天有6.2株長根，之后生根速度緩慢，基本趨于穩(wěn)定不變。由表4可知，一瓶內(nèi)接種5株外植體的成苗率最高，達(dá)到了80%。其次是一瓶內(nèi)接種10株，最后是一瓶內(nèi)接種15株。一瓶內(nèi)接種多株，形成的苗莖都很細(xì)小，葉片也小而薄。一瓶內(nèi)接種5株比接種10株和15株更有利于成苗，而且一瓶內(nèi)接種的株數(shù)越多，越容易形成玻璃苗，不利于苗的成活，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果與豐鋒[12]等的研究結(jié)果是一致的。

2.4 試管苗的移栽

試管苗完成生根后，將培養(yǎng)瓶放在通風(fēng)溫室內(nèi)，在自然光照條件下煉苗7～10d后，打開瓶蓋，在自然條件下晾苗3d，然后用溫水洗去試管苗根部的固體培養(yǎng)基，最后將試管苗移栽到滅過菌的栽培基質(zhì)(腐質(zhì)土∶珍珠巖=3∶1)中。注意遮陰保濕，尤其是在移栽后10d內(nèi)要做到全天遮陰，晴天時(shí)注意噴水。經(jīng)過20d后，移栽成活率達(dá)到了97%，而未煉苗的試管苗成活率只有78.35%。

表3 生長物質(zhì)種類和濃度對雪蓮果帶腋芽莖段生根的效果

3 討論與小結(jié)

試驗(yàn)結(jié)果表明，雪蓮果帶腋芽的莖段在沒有生長物質(zhì)的培養(yǎng)基能夠萌發(fā)成苗，添加NAA、IBA和2，4-D對促進(jìn)成苗和生根有不同的效果。NAA，2，4-D有一定的促進(jìn)效果，主要體現(xiàn)在成苗率和根系的發(fā)育等方面，其中以2，4-D效果最好。2，4-D濃度為0.15mg·L-1的培養(yǎng)基成苗率也是所有培養(yǎng)基中最高的，25d后成苗率達(dá)到了95%。平均苗高有6.2cm，平均苗節(jié)數(shù)有5節(jié)，節(jié)間長、粗壯，葉片肥厚而且寬大，植株的整體長勢很平穩(wěn)，有利于植株的成活。其它培養(yǎng)基成苗率雖然達(dá)到了80%左右，但植株的總體生長的水平不如3號培養(yǎng)基（2，4-D 0.15mg·L-1）。添加NAA的培養(yǎng)基植株的根細(xì)長，添加2，4-D的培養(yǎng)基植株的根長且粗壯。2，4-D濃度為0.15mg·L-1培養(yǎng)基上植株最早開始生根，完成生根時(shí)間最短，生根率100%，且根的形態(tài)完好，植株成活率也很高。有些培養(yǎng)基生根率雖也達(dá)100%，但時(shí)間長于20d，或根細(xì)長不利于植株成活。IBA則對雪蓮果帶腋芽莖段的成苗效果不明顯，平均的成苗率低于了50%，低于不添加如何生長物質(zhì)的MS基本培養(yǎng)基的成苗率。綜合各項(xiàng)的數(shù)據(jù)來看，選用MS+2，4-D 0.15mg·L-1+蔗糖（30g·L-1）+瓊脂（6g·L-1）作為雪蓮果的試管快繁培養(yǎng)基，形成的植株根系完好，成苗率高，成活率高。接種不同數(shù)量帶腋芽的莖段的試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)接種的越多越不利于成苗，而且容易形成玻璃化苗。所以在培養(yǎng)過程中要注意接種的外植體不能過密，培養(yǎng)溫度也不能過高，高溫(30℃)會增加玻璃化的發(fā)生[12]，試管苗要能充分得到光照，同時(shí)注意提高容器內(nèi)的透氣性，這樣可有效控制玻璃苗的出現(xiàn)[13]。

表4 接種莖段數(shù)量對成苗的影響

[1]AsamiT，KubotaM，Minamisawa K，etal.Chemical composition ofyacon,a new root crop from Andaen highland[J].Jpn.J.Soil Sci.Plant Nutr.1989，60（2）：122-126.

[2]李競立.嵩明著力發(fā)展特色農(nóng)產(chǎn)品世界“神果”雪蓮果成為品牌[J].農(nóng)村實(shí)用技術(shù)，2007，1(2)：4-5.

[3]李卓亞.雪蓮果化學(xué)成分及其藥理作用的研究進(jìn)展[J].食品與藥品，2007，9(6)：41-43.

[4]錢林，丁長河，李里特，等.雪蓮果的化學(xué)組分及其功能特性[J].食品研究與開發(fā)，2006，27（6）：179-180，188.

[5]吳先英，韋廷才.雪蓮果的生物學(xué)特性及其栽培技術(shù)[J].農(nóng)技服務(wù)，2007，24（4）：101.

[6]饒之坤，封良燕，張雖栓，等.雪蓮果營養(yǎng)成分分析研究[J].云南化工，2007，34（1）：52-54.

[7]楊緒，姜維梅，丁炳揚(yáng).菊薯脫毒快繁的研究[J].浙江大學(xué)學(xué)報(bào)：農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版，2006，32（1）：51-55.

[8]曾慎.雅根的組織培養(yǎng)與快速繁殖[J].植物生理學(xué)通訊，2004，40（2）：212.

[9]李廣平.影響亞貢組培苗成活的幾個(gè)因素[J].林業(yè)實(shí)用技術(shù)，2005，（6）：26.

[10]劉德江，申健，李虎林，等.雪蓮果的組織培養(yǎng)[J].佳木斯大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，2009，（3）：21-27.

[11]馬杰，崔波，張仙云，等.雪蓮果離體培養(yǎng)及植株再生體系的建立[J].北方園藝，2008，（7）：210-212.

[12]豐鋒，李洪波，謝建英．蘆薈組織培養(yǎng)中試管苗玻璃化的發(fā)生與防止[J]．西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，23（5）：449-451.

[13]陸林，蔣亞蓮，黎霞，等．雪蓮果的組織培養(yǎng)研究[J]．西南師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2009，（6）：199-201.