景臨林，范小飛，2，馬慧萍，樊鵬程，賈正平＊

（1.蘭州軍區(qū) 蘭州總醫(yī)院藥劑科，甘肅 蘭州730050； 2.蘭州大學 藥學院，甘肅 蘭州730000）

鷹嘴豆芽素A（biochanin A，4′－甲氧基－5，7－二羥基異黃酮）屬于天然異黃酮家族，在豆類植物和紅三葉草中含量豐富.它能競爭性的與雌激素受體結合，發(fā)揮與雌激素一樣的作用，是一種重要的植物雌激素［1］.經(jīng)常食用鷹嘴豆芽素A，對人和動物的健康是有益的，可用于骨質疏松癥和更年期綜合癥等疾病的預防和治療［2］.近年來的許多研究表明，鷹嘴豆芽素A還具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗骨質疏松、降血糖、抑制黑色素生成和神經(jīng)保護等多種生物活性［3－9］，但是其溶解性差，在體內代謝和清除速率快，生物利用度很低.

1，2，3－三氮唑是多種抗真菌、抗細菌、抗結核、抗癌藥物中關鍵的功能團分子［10］，主要通過Cu催化的“Click chemistry”得到.將糖基引入到三氮唑類分子中可增強其親水性和導向性，改變藥代動力學性能，增強其生物活性［11］，已經(jīng)成為設計合成結構新穎、活性優(yōu)異的新化合物的重要手段之一.

為了提高鷹嘴豆芽素A的藥理活性、增加其代謝穩(wěn)定性和生物利用度，本文作者以D－木糖，炔丙基溴和鷹嘴豆芽素A為原料，根據(jù)藥物拼合原理，將糖基化三氮唑分子與鷹嘴豆芽素A結合，合成得到三氮唑木糖苷化鷹嘴豆芽素A，產(chǎn)物結構經(jīng)1H NMR、紅外光譜、質譜和元素分析確認.目標化合物合成路線見圖1和圖2.

圖1 β－D－三乙酰木糖疊氮化物的合成路線Fig.1 Synthesis ofβ－D－O－acetyl－xylopyranosyl azide

圖2 木糖苷三氮唑鷹嘴豆芽素A的合成路線Fig.2 Synthesis of xylosyltriazole biochanin A derivative

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

X－4B型顯微熔點儀（溫度計未校正），上海精科實業(yè)有限公司；NEXUS 670型傅立葉變換紅外光譜儀，KBr壓片，美國尼高力分子光譜儀器公司；Vario EL cube型元素分析儀，德國艾力蒙塔公司；Brucker AVANCE III 400型核磁共振波譜儀，瑞士Brucker Biospin公司；API 3200型LC／MS／MS質譜儀，美國應用生物系統(tǒng)公司.

鷹嘴豆芽素A（純度98%），陜西慈緣生物技術有限公司；732陽離子樹酯，阿拉丁試劑公司；柱層析硅膠（200～300目）和 GF254高效薄層硅膠板（10×20cm），青島海洋化工廠分廠；CDCl3和 DMSO－d6，內標TMS，sigma公司，其他試劑均為市售分析純.無水的溶劑經(jīng)脫水干燥處理.

1.2 三乙酰木糖疊氮化物參考文獻［12］方法制備

1.3 4′－甲氧基－5－羥基－7－炔丙氧基異黃酮（1）

將2.84g（10mmol）鷹嘴豆芽素 A、3.36g（20mmol）K2CO3和100mL無水丙酮加入單口瓶中，劇烈攪拌下緩慢加入2mL溴丙炔，回流反應3h.TLC監(jiān)測反應完全后，體系降至室溫，加入100mL水，45℃減壓除去丙酮，過濾，濾餅依次用200mL蒸餾水、100mL 1mol／L鹽酸溶液和200mL蒸餾水洗滌，真空干燥后得到3.09g淺黃色固體，產(chǎn)率96%.m.p.：152.1～154.7℃；1H NMR（CDCl3，400MHz）δ：12.88（1H，s，C5－OH），7.89（1H，s，C2－H），7.46（2H，d，J＝8.4Hz，C2′－H，C6′－H），6.99（2H，d，J＝8.8 Hz，C3′－H，C5′－H），6.50（1H，d，J＝2.0Hz，C6－H），6.46（1H，d，J＝2.0Hz，C8－H），4.76（2H，d，J＝2.0Hz，C11－H），3.85（3H，s，C4′－OCH3），2.59（1H，s，C13－H）；ESI－MS（m／z）：323［M＋H］＋.IR （KBr）：3 443，2 123，1 755，1 665，1 614，1 577，1 516，1 358，1 303，1 245，1 216，1 187，1 051，817.

1.4 4′－甲氧基－7－（1－（（2′，3′，4′－三乙?；拢璂－木糖基）－1，2，3－三氮唑－4－基）甲氧基）－5－羥基異黃酮（2）

將3.23g（10mmol）化合物1分散于100mL叔丁醇和水（體積比1∶1）的混合溶劑中，攪拌下依次加入4.48g（12mmol）三乙酰木糖疊氮化物、0.2mmol抗壞血酸鈉和0.1mmol五水硫酸銅，55℃劇烈攪拌反應6h，將反應體系降至室溫，加入20mL 2mol／L HCl，用100mL CH2Cl2萃取一次，有機相用水洗滌（100 mL×2），無水硫酸鈉干燥12h，過濾，減壓除去溶劑后快速柱層析分離，濃縮干燥后得5.42g白色固體，產(chǎn)率83%.m.p.：217.6～218.8℃；1H NMR（CDCl3，400MHz）δ：12.86（1H，s，C5－OH），7.89（1H，s，C2－H），7.85（1H，s，C13－H），7.46（2H，d，J＝8.8Hz，C2′－H，C6′－H），6.98（2H，d，J＝8.8Hz，C3′－H，C5′－H），6.43（1H，d，J＝2.0Hz，C6－H），6.43（1H，d，J＝2.0Hz，C8－H），5.81（1H，d，J＝8.4Hz，C1″－H），5.46～5.35（2H，m，C2″－H，C4″－H ），5.27（2H，s，C11－OCH2），5.15（1H，m，C3″－H），4.31（1H，dd，J＝5.6，11.6Hz，C5″－H），3.85（3H，s，C4′－OCH3），3.60（1H，t，C5″－H），2.08（3H，s，COCH3），2.05（3H，s，COCH3），1.89（3H，s，COCH3）；ESI－MS （m／z）：624 ［M＋H］＋.IR（KBr）：3 440，1 752，1 658，1 612，1 579，1 516，1 371，1 249，1 224，1 181，1 047，835.A－nal.calcd.for C30H29N3O12：C 57.78，H 4.69，N 6.74；found C 57.81，H 4.72，N 6.63.

1.5 4′－甲氧基－7－（1－（（2′，3′，4′－三羥基－β－D－木糖基）－1，2，3－三氮唑－4－基）甲氧基）－5－羥基異黃酮（3）

將0.62g（1mmol）化合物2置于100mL三口燒瓶中，加入50mL甲醇，冷卻至0℃，氮氣保護下緩慢滴加1.2mL 1.0mol·L－1甲醇鈉的甲醇溶液，升溫至室溫繼續(xù)反應3～4h，利用TLC監(jiān)測反應完全后，用732陽離子樹酯調節(jié)體系至中性，有大量白色不溶物析出，冷卻后過濾，用冰甲醇洗滌濾餅數(shù)次，真空干燥后得0.46g白色固體，為目標化合物3.產(chǎn)率92%.m.p.：172.5～174.4℃；1H NMR（DMSO－d6，400MHz）δ：12.94（1H，s，C5－OH），8.51（1H，s，C2－H），8.48（1H，s，C13－H），7.53（2H，d，J＝8.4Hz，C2′－H，C6′－H），7.02（2H，d，J＝8.8Hz，C3′－H，C5′－H），6.85（1H，d，J＝1.6Hz，C6－H），6.54（1H，d，J＝1.6Hz，C8－H），5.52（1H，d，J＝9.2Hz，C1″－H），5.46（1H，d，J＝6.4Hz，C4″－OH），5.30（2H，s，C11－OCH2），5.20（1H，d，J＝4.8Hz，C2″－OH），3.84～3.81（3H，m，C3″－OH，C4″－H，C5″－H），3.80（3H，s，C4′－OCH3），3.76（1H，d，J＝9.2Hz，C2″－H），3.49（2H，m，C3″－H，C5″－H）；ESI－MS（m／z）：498［M＋H］＋.IR（KBr，cm－1）：3 397，1 653，1 610，1 578，1 515，1 450，1 252，1 179，1 152，1 050，835.Anal.calcd.for C24H23N3O9：C 57.95，H 4.66，N 8.45；found C 57.80，H 4.73，N 8.50.

2 結果與討論

2.1 合成方法

1，2，3－三氮唑及其衍生物在自然界至今尚未發(fā)現(xiàn)，只能通過有機合成的方法獲得.Cu（I）催化端基炔和疊氮化合物進行的“Click chemistry”反應是快速、高效、高立體選擇性獲得大量1，2，3－三氮唑衍生物的可靠方法［13］.文獻有關 “Click chemistry”反應條件的報道很多，通過對反應條件進行優(yōu)化，我們以叔丁醇∶水（體積比1∶1）體系為溶劑、五水硫酸銅／抗壞血酸鈉為催化劑、55℃條件下反應時間6h，最終以83%的產(chǎn)率得到了目標化合物2.在去除化合物2中的乙?；鶗r，為了避免糖苷鍵在酸性條件下水解，本文作者采取了堿性水解法，反應結束后用強酸性陽離子交換樹脂調節(jié)pH，經(jīng)過簡單過濾、洗滌即得目標化合物3，操作簡便，避免了柱色譜分離，產(chǎn)率較高.

2.2 結構表征

在化合物2和3的1H NMR譜中，鷹嘴豆芽素A分子中5－位羥基質子信號分別出現(xiàn)在12.86和12.94，7.85和8.51處的尖銳單峰為三氮唑結構中質子信號，－CH2－的質子信號分別出現(xiàn)在5.27和5.30處，證明三氮唑基團成功地引入到鷹嘴豆芽素A分子結構中.當化合物2水解完全后，2.00附近三個乙?；馁|子信號消失，化合物3在3.84～5.35出現(xiàn)羥基質子信號.

在化合物2和3的紅外譜圖中，3 440和3 397cm－1出現(xiàn)典型羥基吸收峰；1 650cm－1附近為異黃酮結構中羰基的特征吸收峰；1 750cm－1為乙?；恤驶奶卣魑辗?化合物3中1 750cm－1附近的吸收峰消失，證明分子結構中的乙?；煌耆?

3 結論

為了獲得代謝穩(wěn)定性更好、活性更強、生物利用度更高的新型鷹嘴豆芽素A衍生物，本文作者以D－木糖，炔丙基溴和鷹嘴豆芽素A為原料，將鷹嘴豆芽素A與木糖苷通過1，2，3－三氮唑結構相連，合成了一種新型木糖苷三氮唑鷹嘴豆芽素A衍生物.該合成路線短、操作簡單，反應條件溫和、產(chǎn)率較高，產(chǎn)物結構經(jīng)波譜分析與目標化合物一致，為鷹嘴豆芽素A的開發(fā)利用和生物活性研究奠定了基礎.

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