盧玉標(biāo) 游翠紅 王樹(shù)啟 李遠(yuǎn)友

(汕頭大學(xué)海洋生物研究所, 廣東省海洋生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 汕頭515063)

魚(yú)類是低等脊椎動(dòng)物, 與高等脊椎動(dòng)物相比,魚(yú)類對(duì)生存環(huán)境的依賴性較強(qiáng), 但仍具有對(duì)環(huán)境脅迫產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)的能力。在自然條件下, 魚(yú)類可以通過(guò)應(yīng)激反應(yīng)來(lái)適應(yīng)環(huán)境的變化。然而, 在養(yǎng)殖生產(chǎn)中, 魚(yú)體不能逃避或克服人為的應(yīng)激脅迫。此時(shí),應(yīng)激反應(yīng)對(duì)魚(yú)體是有害的, 且應(yīng)激反應(yīng)越強(qiáng), 傷害越大。因此, 正確認(rèn)識(shí)魚(yú)類應(yīng)激并采取適當(dāng)措施減少應(yīng)激的危害, 在水產(chǎn)養(yǎng)殖中具有重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義。

魚(yú)類應(yīng)激反應(yīng)從神經(jīng)內(nèi)分泌反應(yīng)開(kāi)始, 主要表現(xiàn)在兩個(gè)系統(tǒng): 一個(gè)是交感神經(jīng)－嗜鉻組織系統(tǒng)(SC系統(tǒng)), 另一個(gè)是下丘腦－垂體－腎間組織軸(HPI軸), 分別釋放腎上腺素和皮質(zhì)醇到血液中[1]。腎上腺素主要通過(guò)促進(jìn)糖原分解在短期內(nèi)提供能量[2],皮質(zhì)醇主要通過(guò)促進(jìn)葡萄糖異生以及脂肪和蛋白質(zhì)的分解代謝在長(zhǎng)期內(nèi)提供能量[3,4]。細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)的一個(gè)共同特征是在應(yīng)激時(shí)產(chǎn)生熱休克蛋白(HSPs)。熱休克蛋白70 (HSP70)是機(jī)體在應(yīng)激情況下細(xì)胞內(nèi)迅速合成的一種蛋白質(zhì), 具有高度保守性, 對(duì)應(yīng)激可產(chǎn)生保護(hù)、耐受作用, 且具有交叉耐受性[5]; 可以清除應(yīng)激所造成細(xì)胞內(nèi)的異?；蜃冃缘鞍踪|(zhì), 具有活化其他細(xì)胞基因的作用[6]; 能夠抑制由于 ATP損耗引起的細(xì)胞凋亡[7]。魚(yú)類HSP70 在各種應(yīng)激條件下的表達(dá)情況一直是魚(yú)類熱休克蛋白發(fā)現(xiàn)以來(lái)的研究熱點(diǎn)。

黃斑藍(lán)子魚(yú)(Siganus canaliculatus)為暖水近海小型魚(yú)類, 常棲息于巖礁和珊瑚叢中, 具集群游動(dòng)和覓食特性, 有一定的維護(hù)領(lǐng)地和排他性攻擊行為,各鰭棘有毒腺[8]。本課題組發(fā)現(xiàn)該魚(yú)具有合成高度不飽和脂肪酸(HUFA)的能力[9], 這是首次報(bào)道具有HUFA合成能力的海水魚(yú)類。該魚(yú)富含HUFA, 肉質(zhì)細(xì)嫩, 味道鮮美, 骨刺較少, 營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高[10]; 種苗來(lái)源較廣, 飼養(yǎng)周期較短, 已成為海水養(yǎng)殖專家積極推薦的規(guī)模化養(yǎng)殖新品種[11]。但該魚(yú)受到刺激時(shí)容易受到驚嚇, 產(chǎn)生較強(qiáng)烈的應(yīng)激反應(yīng), 如鰭條張開(kāi)伸直, 驚恐亂竄, 體色急劇變?yōu)樯詈谏? 甚至沿著水面向上跳躍[8]; 在拉網(wǎng)、捕撈、分魚(yú)和藥浴等操作過(guò)程中容易受傷甚至死亡, 帶來(lái)較嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。因此, 研究藍(lán)子魚(yú)應(yīng)激反應(yīng)特點(diǎn)和機(jī)制, 探討弱化其應(yīng)激反應(yīng)的方法將具有重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義,也是開(kāi)展規(guī)?；B(yǎng)殖與繁殖的關(guān)鍵之一[12]。然而,目前未見(jiàn)這方面的研究報(bào)道。

牛磺酸, 化學(xué)名為 2-氨基乙磺酸, 可溶于水, 化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定, 是一種非蛋白條件性必需氨基酸[13]。它具有較廣泛的生物學(xué)功能, 如參與神經(jīng)和視覺(jué)發(fā)育,滲透壓調(diào)控, 膽汁酸合成和脂肪代謝; 具有保護(hù)細(xì)胞膜, 解毒抗氧化, 調(diào)節(jié)鈣離子通道, 影響激素釋放等作用; 作為一種抑制性神經(jīng)遞質(zhì), 能調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元的活動(dòng), 發(fā)揮安定鎮(zhèn)靜、抗驚厥的作用, 可以降低機(jī)體對(duì)應(yīng)激的反應(yīng)性, 起預(yù)防應(yīng)激的作用[14,15]。在養(yǎng)殖生產(chǎn)中, 為了緩解應(yīng)激所造成的負(fù)面影響, 通常在飼料或水體中添加一定的抗應(yīng)激物質(zhì)。目前, 關(guān)于?；撬嶙鳛轸~(yú)類抗應(yīng)激物的研究報(bào)道很少。結(jié)合藍(lán)子魚(yú)應(yīng)激敏感性高的特點(diǎn), 本試驗(yàn)探討?；撬釋?duì)黃斑藍(lán)子魚(yú)的抗應(yīng)激作用。

由于淺水應(yīng)激是拉網(wǎng)、捕撈、分魚(yú)和藥浴等操作過(guò)程中常面臨的應(yīng)激類型, 且容易精確控制和重復(fù), 也不受魚(yú)體大小和實(shí)驗(yàn)環(huán)境的影響[16,17], 所以本研究擬選取急性淺水應(yīng)激作為實(shí)驗(yàn)應(yīng)激處理方式。主要通過(guò)測(cè)定血清腎上腺素、皮質(zhì)醇、膽固醇和葡萄糖等生理生化指標(biāo)以及腦 HSP70 mRNA的變化情況, 研究黃斑藍(lán)子魚(yú)的急性應(yīng)激反應(yīng)特點(diǎn)和評(píng)估?；撬岬目箲?yīng)激效果。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)魚(yú)與馴養(yǎng)管理

實(shí)驗(yàn)所用黃斑藍(lán)子魚(yú)捕自汕頭大學(xué)海洋生物實(shí)驗(yàn)室南澳臨海實(shí)驗(yàn)站附近海域, 選取規(guī)格基本一致(30 g左右)的魚(yú)于室內(nèi)圓柱形養(yǎng)殖缸(70 cm×60 cm,200 L)內(nèi)馴養(yǎng), 共12個(gè)缸, 每缸20尾, 采用微流水養(yǎng)殖。養(yǎng)殖用水為沙濾后的天然海水, 鹽度(30±2) ‰, 水溫為(28±1)℃, pH 7.5 左右; 適量連續(xù)充氣,水體溶氧≥5 mg/L; 日光燈調(diào)整光照時(shí)間每日12h。每天用本實(shí)驗(yàn)室配制的人工配合顆粒飼料飽食投喂2次(8:30, 16:30)。每天清晨用虹吸法去除水族缸底部的糞便。盡量減少人為干擾, 保持安靜, 防止額外應(yīng)激。

1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

實(shí)驗(yàn)魚(yú)馴養(yǎng) 15d后用于應(yīng)激實(shí)驗(yàn)。魚(yú)禁食 24h后, 將其中 1個(gè)缸的水緩慢放掉大部分(不驚擾魚(yú))后, 往缸里加入麻醉劑 2-苯氧基乙醇(0.5 mL/L)使魚(yú)被迅速麻醉, 然后隨機(jī)取 9尾魚(yú)的樣品, 作為應(yīng)激前取樣點(diǎn)。另外 5個(gè)缸用于淺水應(yīng)激處理, 即將缸中水緩慢放掉至魚(yú)體露出背部, 魚(yú)產(chǎn)生強(qiáng)烈的應(yīng)激反應(yīng)(鰭條張開(kāi)伸直、驚恐亂竄); 4min后向其中一個(gè)缸內(nèi)快速加入 2-苯氧基乙醇(0.5 mL/L)將魚(yú)麻醉,作為應(yīng)激后0min取樣點(diǎn); 向其余4個(gè)缸內(nèi)重新注入適量海水, 分別于 20、40、60、80min后從各缸隨機(jī)取9尾魚(yú)的樣品, 作為應(yīng)激后20、40、60、80min取樣點(diǎn)。它們也作為牛磺酸浸泡的對(duì)照組。另外 6個(gè)缸在應(yīng)激處理前用0.02‰的?；撬峤?d, 進(jìn)行與上述相同的應(yīng)激處理與取樣。

1.3 樣品采集和處理

在每個(gè)取樣點(diǎn), 用 1 mL一次性醫(yī)用注射器于尾靜脈快速取血, 每條魚(yú)取0.5 mL左右。血樣于4℃靜置4h以后, 在4℃、4000 r/ min下離心10min, 收集血清保存于–20℃下用于生化指標(biāo)測(cè)定。另外將魚(yú)解剖, 取鰓和腦入液氮速凍后, 保存于－80℃?zhèn)溆谩?/p>

1.4 血清生化指標(biāo)測(cè)定

血清皮質(zhì)醇和腎上腺素濃度使用美國(guó) RB公司的ELISA試劑盒測(cè)定, 葡萄糖和膽固醇濃度使用南京建成生物工程研究所的試劑盒測(cè)定。

1.5 腦HSP70 mRNA 測(cè)定

利用Trizol試劑(Invitrogen, USA)從藍(lán)子魚(yú)腦樣品中提取總RNA, 然后使用PrimeScript RT reagent Kit (Perfect Real Time)(Takara Code: DRR037)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄獲得單鏈 cDNA。根據(jù)黃斑藍(lán)子魚(yú) HSP70 mRNA 部分序列(GenBank Accession No.: EU 107279.1), 利用primer premier5.0軟件設(shè)計(jì)HSP70特異性引物 F1(5'-TGGATAAAGGCAAACGAGGA GA-3')和R1(5'-GCTCTCTTGTTTTGGCTGATGTC-3')。管家基因 β-actin 的引物為 F2(5'-ATCGGC AATGAGAGGTTCC-3')和 R2(5'-GACAGCACAG TGTTGGCGT-3')[18]。使用 SYBR Premix ExTaqTM(Tli RNaseH Plus)試劑盒(Takara Code: DRR420A)和ABI 730 system real-time PCR儀進(jìn)行real-time PCR擴(kuò)增反應(yīng)。PCR 反應(yīng)體系: SYBR Premix Ex TaqⅡ(2×)10 μL;正向引物(10 μmol/L) 0.4 μL; 反向引物(10 μmol/L) 0.4 μL; ROX Reference Dye (50×)0.4 μL; 模板 2 μL; 雙蒸水 6.8 μL; 總體積為 20 μL。PCR 擴(kuò)增條件為: 預(yù)變性, 95℃ 30s; PCR反應(yīng),95℃ 5s、60℃ 31s, 40個(gè)循環(huán); 溶解條件為: 95℃15s、60℃ 1min、95℃ 15s。隨機(jī)取樣品 cDNA, 通過(guò)梯度稀釋法, 制作 HSP70和 β-actin的標(biāo)準(zhǔn)曲線,由兩標(biāo)準(zhǔn)曲線方程的斜率求得HSP70 和β-actin 的擴(kuò)增效率基本相同在 0.9—1, 符合 2–ΔΔCt方法計(jì)算的前提條件。以黃斑藍(lán)子魚(yú)β-actin為內(nèi)參, 以對(duì)照組應(yīng)激前HSP70 mRNA為基準(zhǔn), 對(duì)得到的各樣品Ct值進(jìn)行均一化處理, 應(yīng)用 2–ΔΔCt計(jì)算方法[19]確定各樣品HSP70 mRNA相對(duì)水平。

1.6 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)用 Origin 7.0軟件進(jìn)行單因素方差分析(ANOVA)和Tukey多重比較法分析, 當(dāng) P < 0.05 時(shí)認(rèn)為差異顯著。所有結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(Mean± SEM, n=9)表示。

2 結(jié)果

2.1 在急性淺水應(yīng)激后黃斑藍(lán)子魚(yú)血清腎上腺素和葡萄糖濃度的變化情況

在急性淺水應(yīng)激后, 黃斑藍(lán)子魚(yú)的血清腎上腺素和葡萄糖濃度的變化情況見(jiàn)圖1。在4min淺水應(yīng)激后, 血清腎上腺素濃度迅速升高, 在0min時(shí)從應(yīng)激前的(2.00±0.22) ng/mL 達(dá)到應(yīng)激后的(15.12±1.04) ng/mL(P<0.05), 之后逐漸恢復(fù)到應(yīng)激前水平; 血清葡萄糖濃度在應(yīng)激后逐漸升高, 20min時(shí)達(dá)到最大值(7.10±0.38) mmol/L, 是應(yīng)激前(2.15±0.02) mmol/L的約3.5倍(P<0.05), 60min后恢復(fù)到應(yīng)激前水平。這說(shuō)明, 血清腎上腺素和葡萄糖濃度可以作為黃斑藍(lán)子魚(yú)急性應(yīng)激反應(yīng)的指標(biāo)。

2.2 在急性淺水應(yīng)激后黃斑藍(lán)子魚(yú)血清膽固醇和皮質(zhì)醇水平的變化情況

在急性淺水應(yīng)激后, 黃斑藍(lán)子魚(yú)的血清膽固醇和皮質(zhì)醇水平的變化情況見(jiàn)表1。在4min淺水應(yīng)激后, 血清皮質(zhì)醇和膽固醇濃度沒(méi)有發(fā)生顯著變化(P>0.05)。這說(shuō)明血清皮質(zhì)醇和膽固醇濃度不適合作為黃斑藍(lán)子魚(yú)急性應(yīng)激反應(yīng)的指標(biāo)。

2.3 在急性淺水應(yīng)激后黃斑藍(lán)子魚(yú)腦 HSP70 mRNA水平的變化情況

在急性淺水應(yīng)激后, 黃斑藍(lán)子魚(yú)腦 HSP70 mRNA的變化情況見(jiàn)圖2。在4min淺水應(yīng)激后, 腦HSP70 mRNA的表達(dá)水平逐漸增加, 在應(yīng)激后60min達(dá)到最大值, 約為應(yīng)激前的11.54倍(P<0.05),然后下降到接近應(yīng)急前水平。這說(shuō)明HSP70 mRNA的表達(dá)水平也可以作為黃斑藍(lán)子魚(yú)急性應(yīng)激反應(yīng)的有效指標(biāo)。

圖1 急性淺水應(yīng)激后黃斑藍(lán)子魚(yú)血清腎上腺素(A)和葡萄糖(B)的變化情況Fig. 1 The changes of serum adrenaline (A) and glucose (B) levels in Siganus canaliculatus post the acute stress

表1 急性淺水應(yīng)激后黃斑藍(lán)子魚(yú)血清皮質(zhì)醇和膽固醇的變化情況Tab. 1 The changes of cortisol and cholesterol in serum of Siganus canaliculatus post the acute stress

圖2 急性淺水應(yīng)激后黃斑藍(lán)子魚(yú)腦HSP70 mRNA的變化情況Fig. 2 Changes of HSP70 mRNA level in the brain of Siganus canaliculatus post the acute stress

2.4 ?；撬峤輰?duì)黃斑藍(lán)子魚(yú)急性應(yīng)激反應(yīng)的影響

?；撬峤萁M與對(duì)照組的結(jié)果比較見(jiàn)圖 3。根據(jù)上述結(jié)果, 在應(yīng)激后0、20、60min時(shí), 血清腎上腺素、葡萄糖和腦HSP70 mRNA的水平分別達(dá)到最大值且顯著高于其他時(shí)間點(diǎn)。為此, 本部分分別比較此 3個(gè)時(shí)間點(diǎn)的血清腎上腺素、葡萄糖和腦HSP70 mRNA水平。結(jié)果顯示, ?；撬峤輰?duì)應(yīng)激前藍(lán)子魚(yú)的血清腎上腺素、葡萄糖濃度和腦HSP70 mRNA水平?jīng)]有影響, 但顯著降低了急性應(yīng)激后的上述3個(gè)生理生化指標(biāo)的水平(P<0.05)。這說(shuō)明?；撬峤輰?duì)黃斑藍(lán)子魚(yú)具有明顯的抗急性應(yīng)激效果。

3 討論

一般認(rèn)為, 魚(yú)類在應(yīng)激因子刺激后, 第一階段出現(xiàn)交感－嗜鉻組織系統(tǒng)反應(yīng), 表現(xiàn)為血液中腎上腺素濃度升高; 第二階段(應(yīng)激刺激幾十分鐘后)出現(xiàn)下丘腦－垂體－腎間組織軸反應(yīng), 表現(xiàn)為血液中皮質(zhì)醇濃度的升高。在本研究中, 黃斑藍(lán)子魚(yú)受到短暫淺水應(yīng)激后, 血清腎上腺素濃度立即顯著升高,而血清皮質(zhì)醇濃度沒(méi)有顯著變化, 與之相符。腎上腺素可以作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng), 提高其興奮性, 使機(jī)體處于警覺(jué)狀態(tài)[20]。這與黃斑藍(lán)子魚(yú)警覺(jué)性高、容易受驚的特性相符。血液腎上腺素的變化常發(fā)生在捕撈活動(dòng)中漁具對(duì)魚(yú)體的刺激及魚(yú)類在逃逸過(guò)程中的生理應(yīng)激反應(yīng)中。例如, 裸蓋魚(yú)(Anoplopoma fimbria)在被漁具鉤住或者在網(wǎng)中拖拽后, 其血液腎上腺素濃度產(chǎn)生明顯變化[21]; 大菱鲆在暴露于空氣和圍網(wǎng)封閉擁擠兩種脅迫下, 魚(yú)體都表現(xiàn)出腎上腺素含量升高[22]; 在捕獲脅迫中從漁具中逃逸的真鯛的血漿腎上腺素含量顯著高于滯留在網(wǎng)具中的魚(yú)[23]; 野生綠背菱鰈(Rhombosolea tapirina)在捕獲、裝載及運(yùn)輸后, 血液腎上腺素濃度顯著升高[24]。此外,其他一些環(huán)境因素也會(huì)影響魚(yú)體的腎上腺素水平。例如, 把大菱鲆(Scophthalmus maximus L.) 和真鯛(Pagrus major)養(yǎng)殖在一定濃度的氨氮水體中, 其血液腎上腺素含量可以反映出魚(yú)體所受脅迫的程度[25];魚(yú)體血液腎上腺素的含量也會(huì)在體外寄生蟲(chóng)等生物因子的作用下發(fā)生變化[26]。

圖3 ?；撬峤輰?duì)急性淺水應(yīng)激后黃斑藍(lán)子魚(yú)血清腎上腺素(A)、葡萄糖濃度(B)和腦HSP70 mRNA(C)水平變化的影響Fig. 3 Effects of taurine immersion on serum adrenaline(A),glucose(B) and brain HSP70 mRNA(C) levels of Siganus canaliculatus post the acute stress

血液皮質(zhì)醇水平的升高常被看作是魚(yú)類應(yīng)激的靈敏信號(hào)[27]。在本研究中, 黃斑藍(lán)子魚(yú)血清皮質(zhì)醇濃度在應(yīng)激后沒(méi)有顯著變化, 這可能是應(yīng)激時(shí)間(4min)不夠長(zhǎng)的原因。Haddy[28]也報(bào)道捕撈行為等并沒(méi)有引起布氏棘鯛(Acanthopagrus butcheri)皮質(zhì)醇濃度的變化。然而, 振蕩可以使鯽(Carassius Auratus)的皮質(zhì)醇濃度在幾分鐘內(nèi)顯著升高[29]。Fevolden, et al.[30]認(rèn)為, 應(yīng)激后血液皮質(zhì)醇濃度存在差異可能是由魚(yú)自身相關(guān)基因決定的。作為皮質(zhì)醇合成的前體物質(zhì), 膽固醇在本研究中也沒(méi)有發(fā)生顯著性變化。與此相似, 斑點(diǎn)叉尾(Ictalurus punctatus)受到急性應(yīng)激后, 其血中膽固醇水平也沒(méi)有顯著變化[31]。

血糖是機(jī)體內(nèi)主要的供能物質(zhì), 常態(tài)下其含量比較恒定; 隨著環(huán)境和機(jī)體活動(dòng)的變化, 血糖含量也會(huì)發(fā)生變化。應(yīng)激反應(yīng)是一種耗能過(guò)程, 會(huì)導(dǎo)致血糖水平的變化, 因此血糖水平常被作為可靠的生理應(yīng)激指標(biāo)之一[32]。在本研究中, 隨著血清腎上腺素濃度的升高, 血清葡萄糖濃度在應(yīng)激后20min顯著升高到最大值, 之后又隨著腎上腺素水平的下降逐漸降低到應(yīng)激前水平。由于皮質(zhì)醇濃度沒(méi)有發(fā)生變化, 說(shuō)明黃斑藍(lán)子魚(yú)急性應(yīng)激后血清葡萄糖濃度的升高可能主要是通過(guò)腎上腺素促進(jìn)糖原分解實(shí)現(xiàn)的。相似的結(jié)果在兩種珊瑚鱒(Plectropomus leopardus 和 P.maculatus)的生理應(yīng)激反應(yīng)中也有報(bào)道[33]。

養(yǎng)殖動(dòng)物應(yīng)激時(shí)會(huì)發(fā)生一系列的生理變化, 除神經(jīng)內(nèi)分泌激素、血糖濃度發(fā)生變化外, 與細(xì)胞反應(yīng)相關(guān)的熱休克蛋白也發(fā)生變化。在一定的脅迫范圍內(nèi), 熱休克蛋白常被誘導(dǎo), 從而形成保護(hù)性機(jī)制,抵消脅迫對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物的影響[34]。黃斑藍(lán)子魚(yú)受到急性淺水應(yīng)激后, HSP70 mRNA表達(dá)量顯著升高, 說(shuō)明 HSP70對(duì)魚(yú)體應(yīng)激時(shí)可能具有保護(hù)作用。然而,低溫、擁擠和捕捉等脅迫因子并沒(méi)有顯著影響大西洋鮭體內(nèi)的熱休克蛋白水平[35]; 注射操作也不會(huì)影響劍尾魚(yú)HSP70變化[36]。黃斑藍(lán)子魚(yú)受到4min淺水應(yīng)激后HSP70 mRNA水平顯著升高, 正好印證了藍(lán)子魚(yú)應(yīng)激反應(yīng)強(qiáng)的特點(diǎn)。

在養(yǎng)殖生產(chǎn)中, 藥浴、分魚(yú)、運(yùn)輸?shù)炔僮鬟^(guò)程常引起魚(yú)類較強(qiáng)烈的應(yīng)激反應(yīng), 人們通常在操作前通過(guò)加入麻醉鎮(zhèn)靜劑來(lái)降低應(yīng)激反應(yīng)給魚(yú)體帶來(lái)的危害[37]?？紤]到麻醉劑的安全性及劑量控制等問(wèn)題[38],本研究選用具有安定鎮(zhèn)靜、抗驚厥作用等多種生物學(xué)功能的?；撬嶙鳛榻档退{(lán)子魚(yú)急性應(yīng)激反應(yīng)的物質(zhì)。結(jié)果表明, 牛磺酸浸泡可顯著降低黃斑藍(lán)子魚(yú)急性應(yīng)激后的血清腎上腺素、葡萄糖濃度和腦HSP70 mRNA水平, 說(shuō)明牛磺酸的抗應(yīng)激作用明顯。這與Kumar, et al.[39]報(bào)道?；撬峤菘梢越档秃T(Clarias batrachus)由鎘誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激相似?？箲?yīng)激劑也可通過(guò)添加到飼料中的方式進(jìn)行應(yīng)用。例如, 用含 0.1%葡聚糖的飼料投喂虹鱒(Oncorhynchus mykiss)可以降低運(yùn)輸應(yīng)激帶來(lái)的危害[40]; 棉子糖的添加能夠提高花鱸(Lateolabrax japonicus)抗空氣暴露應(yīng)激能力[41]。?；撬崽砑拥斤暳现泻蟮目箲?yīng)激效果有待研究。?；撬峥赏ㄟ^(guò)化學(xué)合成的方法大批量生產(chǎn), 價(jià)格約2.5—3萬(wàn)元/噸, 且預(yù)期未來(lái)不會(huì)上漲。目前, ?；撬嵋炎鳛檎T食劑和促生長(zhǎng)劑普遍應(yīng)用于魚(yú)類養(yǎng)殖中[42], 考慮到其安全性好且劑量容易控制, 相信其作為抗應(yīng)激添加劑具有良好的應(yīng)用前景。

4 總結(jié)

應(yīng)對(duì)急性應(yīng)激, 黃斑藍(lán)子魚(yú)的血清腎上腺素濃度迅速上升, 促進(jìn)糖原分解, 使血糖濃度升高來(lái)滿足應(yīng)激對(duì)能量的需求; 同時(shí), 通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞熱休克蛋白的表達(dá)增強(qiáng)對(duì)機(jī)體的保護(hù)。所以, 血清腎上腺素和葡萄糖濃度以及細(xì)胞 HSP70 mRNA水平可以作為反映黃斑藍(lán)子魚(yú)應(yīng)激狀況的有效指標(biāo)。?；撬峋哂幸欢ǖ目箲?yīng)激作用。