李 霞 馬 辰 秦艷杰 李雅娟 吳 迪 白麗雯 劉 博

(1. 大連海洋大學(xué), 遼寧省海洋生物資源恢復(fù)與生境修復(fù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 大連 116023;2. 大連海洋大學(xué), 農(nóng)業(yè)部北方海水增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 大連 116023)

泥鰍(Misgurnus anguillicaudatus)隸屬于鯉形目(Cypriniformes)、鰍科(Cobitidae), 廣泛分布于中國(guó)大陸、朝鮮半島、日本列島、中國(guó)臺(tái)灣等地[1]。泥鰍肉鮮味美, 營(yíng)養(yǎng)豐富, 素有“水中人參”之稱, 是我國(guó)重要的淡水養(yǎng)殖種類。除了二倍體, 泥鰍還存在有天然的三倍體、四倍體, 是生物學(xué)及遺傳學(xué)研究的良好材料。關(guān)于泥鰍多倍體的研究以往的報(bào)道主要在人工誘導(dǎo)方法[2,3]、倍性鑒定方法[4,5]以及生長(zhǎng)特性研究[2]等方面。多倍體泥鰍細(xì)胞系的建立及特性研究尚未見報(bào)道。

自Wolf, et al.在1962年建立了世界上第一株魚類細(xì)胞系——虹鱒(Oncorhynchus mykiss)性腺細(xì)胞系RTG-2[6]以來(lái), 魚類細(xì)胞培養(yǎng)的研究發(fā)展迅速。到2011年全世界共報(bào)道建立魚類細(xì)胞系275株, 包括淡水或溯河洄游性的魚類細(xì)胞系 175株, 海水魚類細(xì)胞系100 株[7]。用于體外培養(yǎng)的組織主要有鰭[8—10]、脾[9,11,12]、腎[13]等, 其中鰭組織細(xì)胞系有白鱘(Acipenser transmontanus)WSF細(xì)胞系[14], 大菱鲆(Scophthalmus maximus)鰭細(xì)胞系[15], 中華鱘(Acipenser sinensis)CSTF細(xì)胞系[16]等。本實(shí)驗(yàn)以天然生長(zhǎng)的二倍體(2n)、三倍體(3n)及四倍體(4n)泥鰍為材料, 分別建立了可以連續(xù)傳代的鰭組織細(xì)胞系并對(duì)其進(jìn)行生長(zhǎng)、細(xì)胞遺傳學(xué)分析, 旨在豐富魚類細(xì)胞系的種類, 為揭示多倍體魚類生長(zhǎng)、遺傳等機(jī)制打下基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)所用的泥鰍采自湖北省洪湖市, 經(jīng)流式細(xì)胞儀鑒定倍性后, 將二倍體、三倍體和四倍體泥鰍分別飼養(yǎng)在90 L水槽中, 投喂復(fù)合飼料, 日換水一次。泥鰍全長(zhǎng)10.3—15.8 cm, 體重10.00—20.24 g。

實(shí)驗(yàn)所用 DMEM/F12培養(yǎng)基、胎牛血清(FBS)、胰酶、青霉素-鏈霉素雙抗溶液為Hyclone公司產(chǎn)品;人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)、I型胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF-I)為Peprotech公司產(chǎn)品; 硫酸軟骨素為Wolsen公司產(chǎn)品。其他化學(xué)試劑均為分析純。

1.2 方法

原代培養(yǎng) 參照李霞等的方法[17]略有改動(dòng)。試驗(yàn)前將鮮活的泥鰍浸泡于高雙抗(1000 IU/mL青霉素, 1000 μg/mL鏈霉素)曝氣水中暫養(yǎng)24h, 用1‰苯甲醇麻醉后, 在超凈工作臺(tái)中剪取鰭組織。將鰭組織先用質(zhì)量濃度為 10%的碘伏浸泡 15min; 后用青霉素和鏈霉素的混合液(500 IU/mL青霉素,500 μg/mL鏈霉素)浸泡30min; 再分別用PBS漂洗兩遍和 5%FBS-DMEM/F12培養(yǎng)基漂洗一遍后, 剪成1 mm3左右的小塊并均勻接種于25 cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶中, 在 25℃CO2培養(yǎng)箱中正置干貼 24h后補(bǔ)加培養(yǎng)液至 5 mL/瓶, 所用培養(yǎng)液為添加有硫酸軟骨素(10 μg/mL)、bFGF(10 ng/mL)和 IGF-I(20 ng/mL)的20% FBS-DMEM/F12培養(yǎng)基。啟動(dòng)原代培養(yǎng)至細(xì)胞長(zhǎng)成單層。

傳代培養(yǎng) 吸出培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液, 加入0.25%的胰蛋白酶溶液1 mL, 30s后吸去胰蛋白酶溶液, 使得瓶底形成一層胰蛋白酶膜, 繼續(xù)消化1min,輕磕細(xì)胞培養(yǎng)瓶。將之前吸出的培養(yǎng)液加回, 用吸管吹打, 制成細(xì)胞懸液; 將細(xì)胞懸液以體積比 1︰1分到兩個(gè)新的培養(yǎng)瓶中; 并補(bǔ)加培養(yǎng)液至5 mL; 在25℃CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至細(xì)胞長(zhǎng)成單層后繼續(xù)用此方法傳代。從原代培養(yǎng)傳代至30代所用的培養(yǎng)液為添加有硫酸軟骨素(10 μg/mL)、bFGF(10 ng/mL)和IGF-I(20 ng/mL)的20%FBS-DMEM/F12培養(yǎng)基, 30代以后所用培養(yǎng)液為 20%FBS-DMEM/F12培養(yǎng)基,停止添加硫酸軟骨素、bFGF和IGF-I。

細(xì)胞保存方法 參照李霞等的方法[17]。首先配制含 20%FBS、60%DMEM/F12和 20%二甲基亞砜的細(xì)胞凍存液, 并放置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩Ｈ?0代以后生長(zhǎng)旺盛的細(xì)胞, 用0.25%的胰酶溶液消化, 加入培養(yǎng)液重懸后, 1500 r/min離心5min, 棄上清, 向沉淀中加入1 mL細(xì)胞凍存液, 重懸, 調(diào)整細(xì)胞濃度至 1.0×106個(gè)/mL, 并轉(zhuǎn)至凍存管中。放置冰箱中逐漸降溫: 4℃冰箱中 30min, –20℃冰箱中2h、–80℃冰箱中 24h, 最后放入液氮中(–196℃)長(zhǎng)期保存。

取保存液氮中 60d的細(xì)胞, 在 40℃水中解凍,待細(xì)胞凍存液融化后轉(zhuǎn)入25℃水浴中3min, 然后將細(xì)胞凍存液轉(zhuǎn)入到離心管中, 并加入等量DMEM/F12培養(yǎng)基, 1500 r/min離心5min, 棄上清,用 20%FBS-DMEM/F12培養(yǎng)基重懸細(xì)胞, 轉(zhuǎn)入到25 cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶中, 并補(bǔ)加培養(yǎng)基至 5 mL, 在25℃CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24h后全量換培養(yǎng)液, 繼續(xù)培養(yǎng)。同時(shí), 取少量重懸的細(xì)胞液加入胎盤藍(lán)染色,并用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù), 計(jì)算存活率。

存活率=活細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%染色體分析 參考Wang, et al.的方法[14], 每10代取三種倍性泥鰍鰭細(xì)胞做染色體分析。向細(xì)胞液中加入終濃度為 1 μg/mL秋水仙素, 并將培養(yǎng)瓶置于25℃CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng), 3—5h后用0.25%的胰酶溶液消化, 細(xì)胞轉(zhuǎn)入離心管中, 以 1500 r/min離心5min, 收集細(xì)胞。用0.075 mol/L KCl溶液低滲40min, Carnoy固定液固定15min, 固定三次后滴片,干燥后用Giemsa染液染色, 高倍鏡下觀察拍照, 計(jì)數(shù)染色體數(shù)目, 并進(jìn)行核型分析。

細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定 待三種倍性泥鰍鰭細(xì)胞分別傳代至 50代時(shí), 用 0.25%的胰酶溶液消化,細(xì)胞重懸, 按每孔500 μL接種于24孔細(xì)胞板中, 接種密度為(3.0—5.0)×104個(gè)/mL, 置于 25℃CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng), 每24h取3孔細(xì)胞用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù), 連續(xù)進(jìn)行 7d。以培養(yǎng)時(shí)間(d)為橫坐標(biāo), 細(xì)胞濃度(個(gè)/mL)為縱坐標(biāo), 繪制三種細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線。根據(jù)公式T=t×Lg2/Lg(Nt/N0)可計(jì)算出細(xì)胞的群體倍增時(shí)間,其中, Nt為時(shí)間t后的細(xì)胞數(shù), N0接種細(xì)胞數(shù)。

細(xì)胞及細(xì)胞核大小測(cè)定 取 53代的三種倍性泥鰍鰭細(xì)胞, 用 0.25%的胰酶溶液消化, 細(xì)胞重懸, 用移液槍取200 μL細(xì)胞液加胎盤藍(lán)1︰1混合加入到血球計(jì)數(shù)板中, 在顯微鏡下, 用校正好的目鏡測(cè)微尺測(cè)算直徑并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。細(xì)胞傳至 53代時(shí), 在倒置顯微鏡下觀察貼壁細(xì)胞, 計(jì) 100個(gè)圓形細(xì)胞核,用校正好的目鏡測(cè)微尺測(cè)算其直徑并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

數(shù)據(jù)處理 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的方式表示, 采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果

2.1 原代培養(yǎng)

二倍體泥鰍鰭組織培養(yǎng) 48—60h后有細(xì)胞從組織塊中遷出(圖1A), 并呈纖維樣, 6—7d后組織塊周圍形成單層, 培養(yǎng)30—32d后細(xì)胞即可長(zhǎng)滿培養(yǎng)瓶瓶底。三倍體泥鰍鰭組織培養(yǎng)36—48h后有細(xì)胞從組織塊中遷出(圖 1B), 呈纖維樣, 3—4d后組織塊周圍形成細(xì)胞單層, 培養(yǎng)28—30d后細(xì)胞即可長(zhǎng)滿培養(yǎng)瓶瓶底。四倍體泥鰍組織培養(yǎng)48—60h后有細(xì)胞從組織塊中遷出(圖 1C), 并呈纖維樣, 5—6d后組織塊周圍形成單層, 培養(yǎng)26—28d后即可鋪滿整個(gè)培養(yǎng)瓶瓶底。

2.2 傳代培養(yǎng)及細(xì)胞系的建立

三種細(xì)胞傳代后 6—7d即可長(zhǎng)滿培養(yǎng)瓶瓶底,連續(xù)傳代10代后, 細(xì)胞增殖速度加快。二倍體4—5d即可長(zhǎng)滿單層, 三倍體 2—3d即可長(zhǎng)滿單層, 四倍體3—4d即可長(zhǎng)滿單層。三種細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好, 細(xì)胞透明, 形態(tài)均一, 呈纖維樣。30代以后停止添加人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)、I型胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF-I)和硫酸軟骨素, 細(xì)胞生長(zhǎng)及分裂狀況都未受到影響。目前, 二倍體泥鰍鰭細(xì)胞已傳代至59代(圖2A)、三倍體和四倍體泥鰍鰭細(xì)胞均已傳代至68代(圖2B、C), 成功建立三種倍性泥鰍鰭組織細(xì)胞系。

圖1 二倍體、三倍體和四倍體泥鰍鰭組織原代培養(yǎng)細(xì)胞Fig. 1 Primary cultured diploid, triploid and tetraploid fin cells of oriental weatherfish

圖2 二倍體、三倍體和四倍體泥鰍鰭組織傳代培養(yǎng)細(xì)胞Fig. 2 Passage cultured diploid, triploid and tetraploid fin cells of oriental weatherfish

2.3 細(xì)胞保存

三種倍性的泥鰍鰭細(xì)胞凍存復(fù)蘇后, 多數(shù)細(xì)胞都可以繼續(xù)存活, 細(xì)胞形態(tài)均一為纖維樣細(xì)胞, 3—4d長(zhǎng)滿單層, 并且可以繼續(xù)傳代。二倍體、三倍體及四倍體細(xì)胞凍存后存活率分別為: (80.88±1.38)%、(84.48±1.13)%、(81.57±1.28)%, 經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析, 三者之間不存在顯著差異(P<0.05)。

2.4 染色體分析

每傳十代, 對(duì)三個(gè)倍性的鰭細(xì)胞進(jìn)行染色體分析。在統(tǒng)計(jì)的 100個(gè)分裂相中, 二倍體細(xì)胞染色體數(shù)目分布從 33到56不等, 但分裂相染色體數(shù)目出現(xiàn)頻率最高是50條; 三倍體細(xì)胞染色體數(shù)目分布從48到 89不等, 但是分裂相染色體數(shù)目出現(xiàn)頻率最高是75條; 四倍體細(xì)胞染色體數(shù)目分布從87到103不等, 但分裂相染色體數(shù)目頻率最高是 100條?？梢? 二倍體、三倍體及四倍體的染色體數(shù)目分別為50、75和100。

對(duì)三個(gè)倍性的50代鰭細(xì)胞進(jìn)行染色體分析結(jié)果如下: 二倍體細(xì)胞染色體數(shù)目分布從 33到 55不等, 而有 50條染色體的細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的68%(圖3A); 三倍體細(xì)胞染色體數(shù)目分布從54到77不等, 而有75條染色體的細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的59%(圖 3B); 四倍體細(xì)胞的染色體數(shù)目分布從 87到101不等, 而擁有100條染色體的細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的 54%(圖 3C), 說(shuō)明傳代后各細(xì)胞系染色體穩(wěn)定。

對(duì)不同倍性的泥鰍鰭細(xì)胞進(jìn)行核型分析, 結(jié)果表明, 二倍體、三倍體及四倍體的核型公式分別為2n=50, 10m+4sm+36t, NF=64 (圖 4A、D); 3n=75, 15m+6sm+54t, NF=96 (圖 4B、E); 4n=100, 20m+8sm+72t,NF=128 (圖4C、F)。即二倍體、三倍體及四倍體細(xì)胞有5組中部著絲粒染色體(m), 2組亞中部著絲粒染色體(sm), 18組端部著絲粒染色體(t)。

圖3 第50代二倍體、三倍體和四倍體鰭組織細(xì)胞染色體分布Fig. 3 Number distribution of chromosome in diploid, triploid and tetraploid fin cells at passage 50

2.5 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線測(cè)定

從第 50代細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(圖 5)中可以看出,25℃、5%CO2、20%FBS-DMEM/F12條件下二倍體細(xì)胞在0—1d處于潛伏期, 在1—1.5d進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期, 在4—4.5d進(jìn)入穩(wěn)定期, 在5d后進(jìn)入衰退期; 三倍體細(xì)胞在0—1d處于潛伏期, 在1—1.5d進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期, 在 3—3.5d進(jìn)入穩(wěn)定期, 在 5d后進(jìn)入衰退期; 四倍體細(xì)胞在0—2d處于潛伏期, 在2—2.5d進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期, 在 4—4.5d進(jìn)入穩(wěn)定期, 在 5d后進(jìn)入衰退期。經(jīng)測(cè)算, 在以上培養(yǎng)條件下, 二倍體、三倍體和四倍體鰭細(xì)胞的倍增時(shí)間分別為 48.43h、36.01h和41.45h。

2.6 細(xì)胞及細(xì)胞核大小

細(xì)胞核大小 從測(cè)算的結(jié)果看, 培養(yǎng)的二倍體、三倍體、四倍體細(xì)胞核的直徑、面積、體積間都有極顯著差異(P<0.01)。二倍體、三倍體和四倍體細(xì)胞的細(xì)胞核直徑比為 1︰1.15︰1.25; 細(xì)胞核面比為 1︰1.33︰1.57; 細(xì)胞核體積比為 1︰1.53︰1.97(表 1)。

細(xì)胞大小 從測(cè)算的結(jié)果看, 培養(yǎng)的二倍體、三倍體、四倍體細(xì)胞的直徑、面積、體積之間都有極顯著差異(P<0.01)。其中二倍體、三倍體和四倍體的細(xì)胞直徑比為1︰1.11︰1.33; 細(xì)胞面積比為1︰1.23︰1.78; 細(xì)胞體積比為1︰1.37︰2.37(表2)。

3 討論

3.1 泥鰍鰭細(xì)胞系建立方法

培養(yǎng)材料無(wú)菌是細(xì)胞體外培養(yǎng)成功的關(guān)鍵之一。已有的報(bào)道大多采用雙抗或酒精侵泡處理暴露在體外的器官, 如大菱鲆鰭細(xì)胞系建立中用 70%酒精漂洗鰭組織[15]; 大瀧六線魚鰭、吻端組織培養(yǎng)前對(duì)其使用雙抗(100 IU/mL青霉素、100 μg/mL鏈霉素)浸泡處理[17]。本研究在對(duì)泥鰍鰭組織無(wú)菌處理中發(fā)現(xiàn), 上述方法均存在滅菌不徹底的問題。通過反復(fù)嘗試做了如下改進(jìn): 首先用質(zhì)量濃度為 10%的碘伏浸泡 15min; 然后用雙抗溶液(500 IU/mL青霉素、500 μg/mL鏈霉素)浸泡30min, 達(dá)到很好的無(wú)菌處理效果。碘伏是一種以表面活性劑為載體和增溶的不定型絡(luò)合碘, 具有性能穩(wěn)定, 使用方便, 緩慢釋放有效碘和長(zhǎng)效殺菌的優(yōu)點(diǎn), 在水產(chǎn)養(yǎng)殖中被廣泛使用。

圖4 第50代二倍體、三倍體及四倍體泥鰍鰭細(xì)胞染色體核型分析Fig. 4 Chromosome and Karyotype analysis of diploid,triploid and tetraploid fin cells at passage 50

圖5 第50代二倍體、三倍體及四倍體鰭細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線(該圖中縱坐標(biāo)細(xì)胞數(shù)應(yīng)為104)Fig. 5 The growth curve of diploid, triploid and tetraploid fin cell at passage 50

在魚類細(xì)胞培養(yǎng)中, 常使用的培養(yǎng)基有DMEM/F12、DMEM 和 L-15等。本文參考大瀧六線魚鰭、吻端、腎[17]的培養(yǎng)方法, 在泥鰍鰭細(xì)胞培養(yǎng)過程中使用含20%FBS的DMEM/F12培養(yǎng)基, 與魏云波等[18]建立的褐點(diǎn)石斑魚三種細(xì)胞系和Imajoh, et al.[19]報(bào)道的真鯛細(xì)胞系采用的最適培養(yǎng)基相同。在其他魚類細(xì)胞培養(yǎng)過程中也有采用L-15培養(yǎng)基的, 效果也較好, 如秦啟偉等[20]建立的斜帶石斑魚脾臟細(xì)胞系、樊廷俊等[15]建立的大菱鲆鰭細(xì)胞系。

魚類細(xì)胞系的來(lái)源主要有腎、脾、吻端、心臟、鰭等[21], 在解剖獲得內(nèi)臟器官時(shí), 必然造成魚體死亡。本實(shí)驗(yàn)采用鰭組織為材料。鰭是易于再生的器官, 剪去一段后, 剩余部分仍能很快修復(fù), 而魚不會(huì)死亡, 這對(duì)珍貴材料的重復(fù)利用和保護(hù)非常有益。目前, 二倍體、三倍體和四倍體泥鰍鰭細(xì)胞已傳至59代、68代、68代, 成功建立三個(gè)倍性的泥鰍鰭細(xì)胞系。

表1 二倍體、三倍體及四倍體泥鰍鰭細(xì)胞核大小Tab. 1 The size of nuclears of diploid, triploid and tetraploid fin cell in M. anguillicaudatus

表2 二倍體、三倍體及四倍體泥鰍鰭細(xì)胞大小Tab. 2 The size of passage fin cells in diploid,triploid and tetraploid M. anguillicaudatus

3.2 泥鰍鰭細(xì)胞染色體分析

染色體數(shù)目、核型是細(xì)胞遺傳學(xué)的基礎(chǔ), 是鑒定細(xì)胞系種屬以及體外培養(yǎng)條件下細(xì)胞系是否發(fā)生轉(zhuǎn)化的可靠指標(biāo)。在每十代進(jìn)行的染色體分析中,三種倍性的細(xì)胞系均出現(xiàn)染色體非整倍體現(xiàn)象, 但是染色體數(shù)出現(xiàn)頻率最高的都分別在50、75和100,即特征染色體數(shù)目仍分別是50條、75條和100條。對(duì)二倍體、三倍體和四倍體細(xì)胞進(jìn)行核型分析發(fā)現(xiàn),三者均具有5組中部著絲粒染色體(m), 2組亞中部著絲粒染色體(sm), 18組端部著絲粒染色體(t)。與李雅娟等[1]報(bào)道的二倍體、三倍體及四倍體泥鰍染色體數(shù)目分析和核型研究一致, 證明這三種細(xì)胞系確為二倍體、三倍體及四倍體泥鰍細(xì)胞系, 并且到目前為止, 細(xì)胞系尚未發(fā)生變異。

3.3 不同倍性泥鰍鰭細(xì)胞大小及增殖情況比較

一般認(rèn)為細(xì)胞核大小與染色體數(shù)目成正比, 而且為了維持恒定的核質(zhì)比率, 隨著細(xì)胞核的增大,細(xì)胞大小也按比例增加[22], 即二倍體、三倍體及四倍體的細(xì)胞核體積的理論比值應(yīng)為1︰1.5︰2。紅細(xì)胞核的大小是魚類多倍體鑒定的重要指標(biāo)[22]。但以往報(bào)道的三倍體與二倍體的紅細(xì)胞核體積比和紅細(xì)胞體積比值都有不同結(jié)果。三倍體鰱紅細(xì)胞核體積為二倍體的1.63倍[23], 大黃魚三倍體紅細(xì)胞及核的體積分別是二倍體的 1.97、1.70倍[24]。Kim, et al.提出三倍體泥鰍的紅細(xì)胞及核的體積分別是二倍體的1.52和1.77倍[2], 而吳萍等的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明三倍體泥鰍的紅細(xì)胞及核的體積分別是二倍體的1.62和1.44倍[5]。對(duì)于四倍體, Refstie提出虹鱒二倍體與四倍體紅細(xì)胞體積之比為 1︰1.91, 紅細(xì)胞核體積之比為 1︰2.05[25]; 而馬濤等的研究發(fā)現(xiàn)二倍體與四倍體虹鱒紅細(xì)胞面積之比為 1︰2.00, 紅細(xì)胞核體積之比為 1︰2.42[26]。在本實(shí)驗(yàn)中測(cè)得的體外培養(yǎng)泥鰍二倍體、三倍體和四倍體的鰭細(xì)胞及核的體積比分別是 1︰1.37︰2.37和 1︰1.53︰1.97, 接近理論比值。上述研究結(jié)果的差異可能和測(cè)量方法、細(xì)胞狀態(tài)等有關(guān)。

本文通過泥鰍鰭細(xì)胞和細(xì)胞核大小的比較認(rèn)為隨倍性增加, 不僅細(xì)胞核體積增大, 細(xì)胞體積也有明顯增加, 所以如果不同倍性泥鰍體內(nèi)細(xì)胞數(shù)量一致的話, 那么倍性越高, 個(gè)體應(yīng)該越大。群體倍增時(shí)間是細(xì)胞總數(shù)增加一倍所需要的時(shí)間。對(duì)三種倍性鰭細(xì)胞群體倍增時(shí)間比較可以看出二倍體最長(zhǎng), 三倍體最短, 可見三倍體細(xì)胞在傳代過程中能夠更快地適應(yīng)環(huán)境, 細(xì)胞活力好, 分裂快, 生長(zhǎng)旺盛。已有研究表明三倍體泥鰍的平均體重大于二倍體, 且生長(zhǎng)速度也比二倍體快[2], 結(jié)合本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果認(rèn)為, 這一現(xiàn)象可能和三倍體細(xì)胞大、群體倍增時(shí)間短即生長(zhǎng)速度快有關(guān)。從細(xì)胞學(xué)角度揭示多倍體魚類生長(zhǎng)態(tài)勢(shì)、抗逆特性的機(jī)理將是多倍體研究的一個(gè)重要方向[27], 而本研究所建立的多倍體泥鰍細(xì)胞系無(wú)疑將為這項(xiàng)研究的開展提供了必要的細(xì)胞學(xué)平臺(tái)。