成金枝 張俊龍 郭 蕾 山東中醫(yī)藥大學(xué)2012級博士研究生（濟南250355）

◇山西中醫(yī)學(xué)院（太原030024）

方證研究一直是中醫(yī)基礎(chǔ)領(lǐng)域的重要內(nèi)容，但對于中醫(yī)臨床基于“異病同證”理論運用同一方劑防治不同疾病的方證機理還缺乏深入的研究。本實驗選擇AD和PD病證結(jié)合動物模型作為研究對象，中醫(yī)臨床治療AD和PD確有療效的補腎名方地黃引子作為工具藥，測定血清中T－SOD、LPO，為中醫(yī)“異病同證”、“異病同治”理論在臨床診斷及臨床治療中的應(yīng)用提供現(xiàn)代科學(xué)實驗依據(jù)。

1 實驗材料1.1 實驗動物 健康SD大鼠，購自中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心，許可證編號為SCXK—（軍）2012—0004，雄性，共84只，體重在250～300g，室溫20～23℃，濕度50%～70%飼養(yǎng)，自由進水、飲食與采光。

1.2 藥物與試劑 受試藥：地黃飲子由熟地、山茱萸、肉蓯蓉、巴戟天、附子、肉桂、麥門冬、石斛等組成，安徽亳州藥材站提供

試劑：Aβ25～35（美國Sigma公司），T－SOD、LPO測試盒（南京建成生物工程研究所），D－半乳糖（BBI公司），魚藤酮（美國Sigma公司），二甲亞砜（美國Amresco公司）等。

1.3 儀器 腦立體定位儀（美國BAS公司，型號：SAS－4100型），牙科鉆（韓國STRONG型），酶標儀（美國BIO－RAD公司，型號：Mode l 680），離心機（上海安亭科學(xué)儀器廠，型號：GL－20G－H），電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海齊欣科學(xué)儀器有限公司，型號：DH P－9162）及相關(guān)手術(shù)器械等。

2 實驗方法2.1 動物分組 將84只健康SD大鼠隨機分為AD正常對照組、AD模型組、AD假手術(shù)組、AD地黃飲子組、PD正常對照組、PD模型組、PD地黃飲子組，各組12只。

2.2 病證結(jié)合動物模型制備 2.21腎精虛證造模方法：采用亞急性衰老動物模型模擬腎精虛，即應(yīng)用腹腔注射D－半乳糖6周。

2.22 疾病造模方法：AD動物用5%的水合氯醛300mg/kg經(jīng)腹腔麻醉后，將大鼠固定在立體定位儀上，于顱頂正中切口，切開皮膚，找到bregma點，參照大鼠腦立體定位圖譜，定位坐標為 AP3.6mm、ML2.0mm、DV3.0mm，鉆開顱骨，以微量注射器垂直進針，將用2g/L Aβ25～35（Aβ25～35用無菌生理鹽水配成2g/L，－20℃保存，使用前在37℃保溫箱中放置7d，使其變成凝聚態(tài)）5μL緩慢注射到鼠腦的海馬CA1區(qū)，注射時間持續(xù)5min，留針5min，起針后局部消毒，用牙科膠覆蓋鉆孔，常規(guī)縫合傷口，連續(xù)腹腔注射青霉素1周以防治感染。假手術(shù)組除注射藥物換為生理鹽水外，其余操作方法同腎虛組。

PD動物：PD動物模型的制備參照趙喜林等長期低劑量皮下注射魚藤酮的方法［1］，將魚藤酮（1.0g/L）溶解于二甲亞砜∶生理鹽水（2∶1）的混合溶劑，正常對照組皮下注射無魚藤酮的混合溶劑，模型組皮下注射魚藤酮（1.0mg/kg/d）［2］，分兩次注射，早晚8：00各1次，連續(xù)給藥4周，每周停藥1d。

2.3 給藥 經(jīng)體表面積換算公式得出動物給藥劑量，在距離造模成功剩4周時開始，AD、PD地黃飲子組給予地黃飲子中藥灌胃，1次/d，至造模結(jié)束為止。同時正常對照組（AD、PD）、空手術(shù)組（AD）、模型組（AD、PD）大鼠則給予等量生理鹽水灌胃，至造模結(jié)束為止。

3 指標測定3.1 樣本采集 造模結(jié)束后，各組大鼠給于腹腔麻醉，開腹后抽取腹主動脈血液并離心，獲取血清。

3.2 酶標儀檢測 T－SOD和LOP按照試劑盒說明要求進行檢測。

4 結(jié) 果地黃飲子對AD、PD大鼠血清中T－SOD、LOP的影響 見表1。

表1 地黃飲子對AD、PD大鼠血清中 T－SOD、LOP的影響（±s）

表1 地黃飲子對AD、PD大鼠血清中 T－SOD、LOP的影響（±s）

注：與模型對照組比較，△P＜0.05，▲P＜0.01

AD PD組別正常組 模型組 地黃飲組T－SOD（U/mL）124.56±24.27▲ 97.88±11.79 114.98±7.73▲113.62±8.06△ 104.09±8.50▲ 91.71±6.61 101.93±8.19正常組 模型組 空手術(shù)組 地黃飲組△LPO（μmol/L）4.47±2.55▲ 9.53±5.23 6.41±2.59△ 6.21±2.91△ 5.46±2.24▲ 8.55±2.66 4.30±1.50▲

5 討 論由于AD和PD都屬于隨增齡而出現(xiàn)的腦老化疾病，衰老（生理性腎虛）是目前唯一可以確定的病因［3，4］。本研究采用海馬內(nèi)注射Aβ25～35及背部皮下長期低劑量注射魚藤酮來制造AD與PD病的模型，長期腹腔注射D－半乳糖來造亞急性衰老狀態(tài)腎精虛證的模型，病證結(jié)合。近年來，研究表明T－SOD對機體的氧化與抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用，SOD活力的高低與衰老等有著密切聯(lián)系。脂質(zhì)過氧化合物能破壞人體細胞正常生理功能，與衰老等生理過程有密切聯(lián)系。所以本實驗抽取各組大鼠血液檢測T－SOD、LPO，結(jié)果表明，地黃飲子能夠使AD和PD大鼠血清中T－SOD活力上升，并且降低模型大鼠血清中脂質(zhì)過氧化物的含量。從而為地黃飲子干預(yù)AD與PD提供了實驗依據(jù)，同時也為中醫(yī)“異病同證”、“異病同治”理論在臨床診斷及臨床治療中的應(yīng)用提供現(xiàn)代科學(xué)實驗依據(jù)。

［1］趙喜林，顧振綸，秦正紅.長期低劑量皮下注射魚藤酮制作大鼠帕金森病模型［J］.中國藥理學(xué)通報，2005，21（10）：1274－1277.

［2］李云鵬，董兆君，王仕麗，等.重復(fù)注射魚藤酮對中樞多巴胺神經(jīng)元的毒性作用［J］.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2003，25（13）：1123－1126.

［3］Fotuhi M，Hachinski V，Whitehouse PJ.Changing perspectives regarding late－life dementia［J］.Nat Rev Neurol.2009Dec：5（12）：649－658.

［4］沈自尹，黃建華，林 偉，等.從整體論到系統(tǒng)生物學(xué)進行腎虛和衰老的研究［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2009，29（6）：548－550.