王濤++陳廣仁++蔡丙嚴(yán)

摘要：從蘇北地區(qū)某疑似豬傳染性胸膜肺炎發(fā)病豬采集病料，經(jīng)細(xì)菌分離培養(yǎng)得到3株分離株，分別命名為YC01、YC02、YC03。經(jīng)形態(tài)學(xué)檢查、CAMP試驗(yàn)、衛(wèi)星生長現(xiàn)象、尿素酶試驗(yàn)鑒定，3株分離菌均為豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌。藥敏試驗(yàn)顯示，3株分離菌對頭孢噻肟、氟苯尼考及由板藍(lán)根、麻黃、連翹等組成的中藥復(fù)方高度敏感。采用高敏藥物對某感染豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌的商品豬場進(jìn)行治療，結(jié)果表明，板藍(lán)根、麻黃、連翹等組成的中藥復(fù)方水提物口服與頭孢噻肟肌肉注射聯(lián)用對控制豬傳染性胸膜肺炎死亡有較好效果。

關(guān)鍵詞：胸膜肺炎放線桿菌；分離鑒定；藥敏試驗(yàn)

中圖分類號： S852.61文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2014）10-0207-02

收稿日期：2013-12-30

作者簡介：王濤（1965—），男，江蘇泰州人，碩士，副教授，從事動物傳染病防治教學(xué)與科研工作。E-mail： wangt61@hotmail.com。豬傳染性胸膜肺炎（porcine contagious pleuropneumia，PCP）是由豬胸膜肺炎放線桿菌（act inobacillus pleuropneumoniae，APP）引起的豬的一種接觸性呼吸道傳染病，以急性出血性纖維素性肺炎、慢性纖維素性壞死性胸膜肺炎為主要特征[1]。2～5月齡豬最易感，急性暴發(fā)時，有很高的發(fā)病率、死亡率，一些病豬康復(fù)后常伴有慢性肺炎，導(dǎo)致豬生長停滯且長期帶菌，從而成為其他豬的傳染源，此病給養(yǎng)豬業(yè)造成較大的經(jīng)濟(jì)損失[2]。APP是革蘭氏陰性、有莢膜的多形球桿菌，有時呈線性，無鞭毛，不運(yùn)動，不形成芽孢。根據(jù)培養(yǎng)時是否需要煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide，NAD，又稱V 因子），可將APP 分為生物Ⅰ型、生物Ⅱ型，生物Ⅰ型為NAD依賴株，包括血清型1～12 型、15 型，生物Ⅱ型生長不依賴NAD，但需要其他特定嘌呤或嘌呤前產(chǎn)物以輔助生長，含有2個血清型，分別為血清型13型、14型[1]。對APP的分離鑒定是確診PCP感染的重要依據(jù)，常用的方法是細(xì)菌分離、NAD依賴性、CAMP、尿素酶等生化試驗(yàn)及PCR擴(kuò)增[3-4]。近年來，伴隨養(yǎng)殖業(yè)集約化生產(chǎn)規(guī)模的不斷擴(kuò)大，APP防治困難逐漸增大。2013年5月，江蘇省鹽城市建湖縣某商品豬場300多頭4～5月齡的育肥豬出現(xiàn)體溫升高、呼吸困難、死前口鼻有血色泡沫等癥狀，經(jīng)診斷為豬傳染性胸膜肺炎。為了更好地控制該病，筆者在病原分離鑒定確診此病的基礎(chǔ)上進(jìn)行了高敏藥物的篩選與臨床防治試驗(yàn)。

1材料與方法

1.1材料

TSA、TSB瓊脂、NAD（煙酰胺腺嘌呤二核苷酸）均購于江蘇省揚(yáng)州市廣陵區(qū)全球通實(shí)驗(yàn)用品銷售中心，按照說明書進(jìn)行配制。犢牛血清購于杭州四季青生物工程材料有限公司；中藥麻黃、黃芩、連翹、板藍(lán)根等購自江蘇省泰州市中藥材市場；常規(guī)培養(yǎng)基、生化試劑、藥敏紙片（氟苯尼考、強(qiáng)力霉素、麻黃、黃芩、連翹、板藍(lán)根及其復(fù)方藥敏紙片等均為自制）購于杭州天和微生物試劑有限公司；金黃色葡萄球菌由筆者所在實(shí)驗(yàn)室保存；待檢病料來源于蘇北某規(guī)模豬場疑似胸膜肺炎的發(fā)病豬；試驗(yàn)豬場為建湖縣某商品豬場，存欄1 153頭。

1.2方法

1.2.1細(xì)菌的分離培養(yǎng)與形態(tài)觀察無菌取死亡豬的氣管分泌物、肺臟作觸片，革蘭氏染色，鏡檢。同時取病料接種于含0.04% NAD的TSA瓊脂平板，在需氧及5%～10% CO2條件下37 ℃培養(yǎng)24 h，挑取可疑菌落涂片，鏡檢。純培養(yǎng)后，-70 ℃下用50%甘油生理鹽水保存?zhèn)溆肹3]。

1.2.2CAMP試驗(yàn)用金黃色葡萄球菌在兔血瓊脂平板上劃1條直線，再用分離菌劃與該線垂直但不相接觸的2條線，37 ℃ 培養(yǎng)24～36 h，觀察試驗(yàn)結(jié)果。

1.2.3衛(wèi)星現(xiàn)象取分離菌均勻涂布于普通瓊脂培養(yǎng)基上，再在培養(yǎng)基中央作2條金黃色葡萄球菌平行劃線，37 ℃有氧條件下培養(yǎng)24 h，觀察菌株生長情況。

1.2.4尿素酶試驗(yàn)取培養(yǎng)24 h的分離菌株接種于含002% NAD的尿素酶液體培養(yǎng)基中，搖勻，37 ℃培養(yǎng)10、60、120 min，分別觀察結(jié)果。

1.2.5藥敏試驗(yàn)分離菌株檢測其對頭孢噻肟、氟苯尼考、恩諾沙星、強(qiáng)力霉素、復(fù)方新諾明、丁胺卡那霉素、紅霉素、阿莫西林等8種抗生素與麻黃、黃芩、連翹、板藍(lán)根等4種中藥及復(fù)方1（板藍(lán)根、黃芩、金銀花等）、復(fù)方2（板藍(lán)根、麻黃、連翹等）、復(fù)方3（麻黃、蒲公英、連翹等）水提物的敏感性。4種中藥、3種復(fù)方按傳統(tǒng)水煎法進(jìn)行煎煮，真空抽濾并濃縮，最后濃縮為1 g/mL生藥，-20 ℃ 保存。濾紙打孔直徑為6 mm的紙片，121 ℃高壓滅菌，將紙片放入藥液里浸2 h，37 ℃烘干，-20 ℃保存?zhèn)溆?。將培養(yǎng)好的菌液（濃度稀釋至1.5 億CFU/mL）均勻涂布在TSA瓊脂上，然后將藥敏紙片貼在平皿上，培養(yǎng)24 h后觀察結(jié)果，并按抗菌藥物藥敏試驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn)判定分離菌株對不同抗生素的敏感程度[5]。

1.2.6高敏藥物對豬傳染性胸膜肺炎的防治試驗(yàn)蘇北某豬場自然發(fā)病三元雜交育肥豬發(fā)病后經(jīng)臨床診斷、實(shí)驗(yàn)室診斷確診為傳染性胸膜肺炎。選擇120頭日齡110～135 d、體質(zhì)量70～80 kg、出生后均未接種過胸膜肺炎放線桿菌疫苗的三元雜交育肥豬，試驗(yàn)前常規(guī)飼養(yǎng)，自由飲水，隨機(jī)分成6組： Ⅰ組氟苯尼考肌肉注射、Ⅱ組頭孢噻肟肌肉注射、Ⅲ組中藥復(fù)方2口服、Ⅳ組中藥復(fù)方2口服+頭孢噻肟肌肉注射、Ⅴ組感染對照、Ⅵ組空白對照，每組20頭。除空白對照組外，其余每組每天給藥，每次用藥前測量直腸溫度并觀察臨床癥狀，試驗(yàn)前后對每頭豬進(jìn)行稱重，總療程均為5 d。

1.3數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性分析。

2結(jié)果與分析

2.1豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌的分離鑒定結(jié)果

病料觸片以及分離純化菌革蘭氏染色、鏡檢都可見有革蘭氏陰性、多形態(tài)的細(xì)菌，多為球桿菌、短桿菌，偶有成絲狀的細(xì)菌，著色不均。在加入0.04%NAD的TSA固體培養(yǎng)基上初次分離培養(yǎng)24 h，可見1～2 mm、露珠狀、半透明的菌落，共獲得3株分離菌。3株分離菌在靠近溶血性金黃色葡萄球菌的地方出現(xiàn)明顯的溶血區(qū)域，即CAMP試驗(yàn)陽性。3株分離菌離金黃色葡萄球菌越近，菌落越大、越多；反之菌落越小、越少，證明3株分離菌為依賴NAD生長的細(xì)菌。3株分離菌均可水解尿素酶，液體培養(yǎng)基變?yōu)榉奂t色，菌株生長需要NAD，3株分離菌株為豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌。

2.2豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果

由表1可知，3株分離菌對頭孢噻肟、氟苯尼考、中藥復(fù)方2高度敏感，對恩諾沙星、強(qiáng)力霉素、復(fù)方新諾明、板藍(lán)根、連翹、中藥復(fù)方1、中藥復(fù)方3中度敏感，對阿莫西林、丁胺卡那霉素、紅霉素、麻黃、黃芩不敏感。

表13株分離菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果

藥物名稱抑菌圈直徑（mm）YC01YC02YC03頭孢噻肟202022氟苯尼考182017恩諾沙星171314強(qiáng)力霉素13911復(fù)方新諾明11710阿莫西林735丁胺卡那霉素8710紅霉素535板藍(lán)根111415連翹121313麻黃10810黃芩577中藥復(fù)方1151312中藥復(fù)方2181918中藥復(fù)方3111614

2.3高敏藥物對豬傳染性胸膜肺炎的治療試驗(yàn)結(jié)果

由表2可知，Ⅰ～Ⅳ組給藥后，與感染對照組比較，臨床癥狀明顯減輕，一般給藥3 次左右，大多數(shù)豬的體溫、食欲基本恢復(fù)正常。中藥復(fù)方2口服+頭孢噻肟肌肉注射組有效率達(dá)100%，治愈率達(dá)92.78%，相對增重率達(dá)78.82%，且沒有死亡豬。氟苯尼考注射組、頭孢噻肟注射組、中藥復(fù)方2口服組均有死亡豬，死亡率分別為30.57%、23.55%、378%?？梢?，中藥與抗生素聯(lián)用對控制豬傳染性胸膜肺炎死亡效果較好。表2高敏藥物對豬傳染性胸膜肺炎的治療試驗(yàn)結(jié)果

組別試驗(yàn)數(shù)

3結(jié)論與討論

胸膜肺炎放線桿菌營養(yǎng)要求高且受外界影響較大[6]。在分離過程中，最好在病死豬剛死亡或?yàn)l臨死亡時采集病料，否則，即使病料中有APP感染，也會因死亡時間太長，致使病料中APP死亡[7]。初次分離培養(yǎng)基中要加入NAD，胸膜肺炎放線桿菌在常規(guī)培養(yǎng)基中大多不生長或生長不良。本研究選擇加入NAD的TSA瓊脂培養(yǎng)基，成功分離到3株APP，分別命名為YC01、YC02、YC03。抗生素濫用是困擾獸醫(yī)臨床治療豬病的難題，根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果指導(dǎo)臨床合理用藥是比較科學(xué)的方法[5]。豬胸膜肺炎放線桿菌對頭孢噻呋、地米考星、氟甲砜霉素等敏感。本研究表明，3株分離菌對頭孢噻肟、氟苯尼考及由板藍(lán)根、麻黃、連翹等組成的中藥復(fù)方高度敏感。中西藥聯(lián)用控制豬傳染性胸膜肺炎效果較好[8]。在發(fā)病豬群的飲用水中按 20 mL/50 kg 添加中藥復(fù)方2水煎劑，2次/d，連續(xù)添加5 d，同時肌注頭孢噻肟15～30 mg/kg，1次/d，連續(xù)注射 3 d，即可控制該病。

參考文獻(xiàn)：

[1]唐文山，李昕. 豬傳染性胸膜肺炎研究進(jìn)展[J]. 動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2008，29（2）：98-102.

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[5]江新生，賈衛(wèi)軍. 豬傳染性胸膜肺炎病原分離鑒定及防治試驗(yàn)[J]. 鄭州牧業(yè)工程高等?？茖W(xué)校學(xué)報，2008，28（3）：15-16，21.

[6]陳麗雯，楊正梅，毛家偉，等. 豬胸膜肺炎放線桿菌的分離鑒定[J]. 動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2009，30（7）：17-19.

[7]蔡丙嚴(yán)，周建強(qiáng)，陳長春，等. 豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌的血清型鑒定與藥敏試驗(yàn)[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，51（4）：780-781，784.

[8]劉秀玲. 中西藥結(jié)合治療豬傳染性胸膜炎[J]. 中獸醫(yī)學(xué)雜志，2006（2）：20-21.

2.1豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌的分離鑒定結(jié)果

病料觸片以及分離純化菌革蘭氏染色、鏡檢都可見有革蘭氏陰性、多形態(tài)的細(xì)菌，多為球桿菌、短桿菌，偶有成絲狀的細(xì)菌，著色不均。在加入0.04%NAD的TSA固體培養(yǎng)基上初次分離培養(yǎng)24 h，可見1～2 mm、露珠狀、半透明的菌落，共獲得3株分離菌。3株分離菌在靠近溶血性金黃色葡萄球菌的地方出現(xiàn)明顯的溶血區(qū)域，即CAMP試驗(yàn)陽性。3株分離菌離金黃色葡萄球菌越近，菌落越大、越多；反之菌落越小、越少，證明3株分離菌為依賴NAD生長的細(xì)菌。3株分離菌均可水解尿素酶，液體培養(yǎng)基變?yōu)榉奂t色，菌株生長需要NAD，3株分離菌株為豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌。

2.2豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果

由表1可知，3株分離菌對頭孢噻肟、氟苯尼考、中藥復(fù)方2高度敏感，對恩諾沙星、強(qiáng)力霉素、復(fù)方新諾明、板藍(lán)根、連翹、中藥復(fù)方1、中藥復(fù)方3中度敏感，對阿莫西林、丁胺卡那霉素、紅霉素、麻黃、黃芩不敏感。

表13株分離菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果

藥物名稱抑菌圈直徑（mm）YC01YC02YC03頭孢噻肟202022氟苯尼考182017恩諾沙星171314強(qiáng)力霉素13911復(fù)方新諾明11710阿莫西林735丁胺卡那霉素8710紅霉素535板藍(lán)根111415連翹121313麻黃10810黃芩577中藥復(fù)方1151312中藥復(fù)方2181918中藥復(fù)方3111614

2.3高敏藥物對豬傳染性胸膜肺炎的治療試驗(yàn)結(jié)果

由表2可知，Ⅰ～Ⅳ組給藥后，與感染對照組比較，臨床癥狀明顯減輕，一般給藥3 次左右，大多數(shù)豬的體溫、食欲基本恢復(fù)正常。中藥復(fù)方2口服+頭孢噻肟肌肉注射組有效率達(dá)100%，治愈率達(dá)92.78%，相對增重率達(dá)78.82%，且沒有死亡豬。氟苯尼考注射組、頭孢噻肟注射組、中藥復(fù)方2口服組均有死亡豬，死亡率分別為30.57%、23.55%、378%?？梢?，中藥與抗生素聯(lián)用對控制豬傳染性胸膜肺炎死亡效果較好。表2高敏藥物對豬傳染性胸膜肺炎的治療試驗(yàn)結(jié)果

組別試驗(yàn)數(shù)

3結(jié)論與討論

胸膜肺炎放線桿菌營養(yǎng)要求高且受外界影響較大[6]。在分離過程中，最好在病死豬剛死亡或?yàn)l臨死亡時采集病料，否則，即使病料中有APP感染，也會因死亡時間太長，致使病料中APP死亡[7]。初次分離培養(yǎng)基中要加入NAD，胸膜肺炎放線桿菌在常規(guī)培養(yǎng)基中大多不生長或生長不良。本研究選擇加入NAD的TSA瓊脂培養(yǎng)基，成功分離到3株APP，分別命名為YC01、YC02、YC03?？股貫E用是困擾獸醫(yī)臨床治療豬病的難題，根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果指導(dǎo)臨床合理用藥是比較科學(xué)的方法[5]。豬胸膜肺炎放線桿菌對頭孢噻呋、地米考星、氟甲砜霉素等敏感。本研究表明，3株分離菌對頭孢噻肟、氟苯尼考及由板藍(lán)根、麻黃、連翹等組成的中藥復(fù)方高度敏感。中西藥聯(lián)用控制豬傳染性胸膜肺炎效果較好[8]。在發(fā)病豬群的飲用水中按 20 mL/50 kg 添加中藥復(fù)方2水煎劑，2次/d，連續(xù)添加5 d，同時肌注頭孢噻肟15～30 mg/kg，1次/d，連續(xù)注射 3 d，即可控制該病。

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[8]劉秀玲. 中西藥結(jié)合治療豬傳染性胸膜炎[J]. 中獸醫(yī)學(xué)雜志，2006（2）：20-21.

2.1豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌的分離鑒定結(jié)果

病料觸片以及分離純化菌革蘭氏染色、鏡檢都可見有革蘭氏陰性、多形態(tài)的細(xì)菌，多為球桿菌、短桿菌，偶有成絲狀的細(xì)菌，著色不均。在加入0.04%NAD的TSA固體培養(yǎng)基上初次分離培養(yǎng)24 h，可見1～2 mm、露珠狀、半透明的菌落，共獲得3株分離菌。3株分離菌在靠近溶血性金黃色葡萄球菌的地方出現(xiàn)明顯的溶血區(qū)域，即CAMP試驗(yàn)陽性。3株分離菌離金黃色葡萄球菌越近，菌落越大、越多；反之菌落越小、越少，證明3株分離菌為依賴NAD生長的細(xì)菌。3株分離菌均可水解尿素酶，液體培養(yǎng)基變?yōu)榉奂t色，菌株生長需要NAD，3株分離菌株為豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌。

2.2豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果

由表1可知，3株分離菌對頭孢噻肟、氟苯尼考、中藥復(fù)方2高度敏感，對恩諾沙星、強(qiáng)力霉素、復(fù)方新諾明、板藍(lán)根、連翹、中藥復(fù)方1、中藥復(fù)方3中度敏感，對阿莫西林、丁胺卡那霉素、紅霉素、麻黃、黃芩不敏感。

表13株分離菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果

藥物名稱抑菌圈直徑（mm）YC01YC02YC03頭孢噻肟202022氟苯尼考182017恩諾沙星171314強(qiáng)力霉素13911復(fù)方新諾明11710阿莫西林735丁胺卡那霉素8710紅霉素535板藍(lán)根111415連翹121313麻黃10810黃芩577中藥復(fù)方1151312中藥復(fù)方2181918中藥復(fù)方3111614

2.3高敏藥物對豬傳染性胸膜肺炎的治療試驗(yàn)結(jié)果

由表2可知，Ⅰ～Ⅳ組給藥后，與感染對照組比較，臨床癥狀明顯減輕，一般給藥3 次左右，大多數(shù)豬的體溫、食欲基本恢復(fù)正常。中藥復(fù)方2口服+頭孢噻肟肌肉注射組有效率達(dá)100%，治愈率達(dá)92.78%，相對增重率達(dá)78.82%，且沒有死亡豬。氟苯尼考注射組、頭孢噻肟注射組、中藥復(fù)方2口服組均有死亡豬，死亡率分別為30.57%、23.55%、378%?？梢姡兴幣c抗生素聯(lián)用對控制豬傳染性胸膜肺炎死亡效果較好。表2高敏藥物對豬傳染性胸膜肺炎的治療試驗(yàn)結(jié)果

組別試驗(yàn)數(shù)

3結(jié)論與討論

胸膜肺炎放線桿菌營養(yǎng)要求高且受外界影響較大[6]。在分離過程中，最好在病死豬剛死亡或?yàn)l臨死亡時采集病料，否則，即使病料中有APP感染，也會因死亡時間太長，致使病料中APP死亡[7]。初次分離培養(yǎng)基中要加入NAD，胸膜肺炎放線桿菌在常規(guī)培養(yǎng)基中大多不生長或生長不良。本研究選擇加入NAD的TSA瓊脂培養(yǎng)基，成功分離到3株APP，分別命名為YC01、YC02、YC03?？股貫E用是困擾獸醫(yī)臨床治療豬病的難題，根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果指導(dǎo)臨床合理用藥是比較科學(xué)的方法[5]。豬胸膜肺炎放線桿菌對頭孢噻呋、地米考星、氟甲砜霉素等敏感。本研究表明，3株分離菌對頭孢噻肟、氟苯尼考及由板藍(lán)根、麻黃、連翹等組成的中藥復(fù)方高度敏感。中西藥聯(lián)用控制豬傳染性胸膜肺炎效果較好[8]。在發(fā)病豬群的飲用水中按 20 mL/50 kg 添加中藥復(fù)方2水煎劑，2次/d，連續(xù)添加5 d，同時肌注頭孢噻肟15～30 mg/kg，1次/d，連續(xù)注射 3 d，即可控制該病。

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