范玲玲，侯明星，都義日，丁翠霞，鐘海燕

(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，呼和浩特010050)

小腸是目前已知對(duì)缺血再灌注(I/R)最為敏感的組織之一［1］;I/R損傷引起的大量氧自由基釋放是腸黏膜屏障損傷的重要原因。烏司他丁是一種新型酶抑制劑，可抑制多種蛋白酶活性、穩(wěn)定溶酶體膜、清除氧自由基、抑制炎性介質(zhì)釋放［2～4］。2013年1～6月，我們觀察了烏司他丁對(duì)腸I/R損傷大鼠血清超氧化物歧化酶 (SOD)活性和脂質(zhì)過(guò)氧化作用產(chǎn)物—丙二醛(MDA)水平的影響，現(xiàn)分析結(jié)果，探討烏司他丁對(duì)腸I/R的保護(hù)作用及其機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 腸I/R模型制作 將84只健康雄性Wistar大鼠(內(nèi)蒙古大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，體質(zhì)量200～250 g，于室溫21～27℃，濕度50% ±5%條件下飼養(yǎng))隨機(jī)分為對(duì)照組12只，模型組36只，治療組36只。模型組及治療組制作小腸I/R損傷模型:腹腔注射氯胺酮(100 mg/kg)麻醉，常規(guī)碘伏消毒后取腹正中切口3～4 cm，鈍性分離SMA根部;以血管夾夾閉SMA根部，完全阻斷血流60 min，之后放松血管夾，使腸道血流恢復(fù)形成再灌注。對(duì)照組僅暴露SMA根部，但不夾閉。模型組、治療組分別于缺血前(夾閉SMA前)30 min尾靜脈注射生理鹽水2 mL、烏司他丁5.0×104U/kg(廣東天普生化醫(yī)藥股份有限公司)。對(duì)照組不干預(yù)。

1.2 血清SOD活性及MDA水平測(cè)定上述制模過(guò)程中于再灌注0 min及2、6 h分別取各組(模型組及對(duì)照組各取12只)腹主動(dòng)脈血4 mL，靜置10 min后，40 000 r/min離心10 min，移液器取上清液置入無(wú)菌Eppendorf管中，-20℃冷凍保存。采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定SOD活性;硫代巴比妥酸(TBA)法測(cè)定MDA水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量資料以±s表示，采用單因素方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

與對(duì)照組比較，模型組及治療組各時(shí)相點(diǎn)SOD活性均顯著降低，MDA水平均顯著升高;治療組0 min、2 h、6 h血清 SOD 活性高于模型組(P ＜0.05)，治療組0 min、2 h MDA水平低于模型組(P＜0.05)，見(jiàn)表1。

表1 三組各時(shí)點(diǎn)血清SOD活性及MDA水平變化(±s)

表1 三組各時(shí)點(diǎn)血清SOD活性及MDA水平變化(±s)

注:與對(duì)照組比較，#P＜0.05;與相應(yīng)時(shí)點(diǎn)模型組比較，*P＜0.05

組別 n SOD(U/mL) MDA(nmol/mL)12模型組 36 124.96 ±21.04 5.68 ±1.26 0 min 12 98.49 ±17.48# 7.69 ±1.26#2 h 12 68.52 ±16.46# 8.85 ±1.34#6 h 12治療組 36 74.16 ±14.21# 8.03 ±2.17#0 min 12 117.68 ±13.24* 6.38 ±1.97*2 h 12 89.54 ±17.84#* 7.10 ±2.11#*6 h 12 76.98 ±13.59#對(duì)照組7.18 ±1.98

3 討論

I/R損傷引起的大量氧自由基釋放是腸黏膜屏障損傷的重要原因，機(jī)體通過(guò)酶系和非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基，后者能攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸引起脂質(zhì)過(guò)氧化作用，形成過(guò)氧化物(LPO)如丙二醛(MDA)、過(guò)氧化氫(H2O2)、羥自由基(OH-)及新的氧自由基［5～8］。機(jī)體在長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中形成了一系列對(duì)抗自由基、防止其損傷的系統(tǒng)，主要包括低分子自由基清除劑及抗氧化酶系統(tǒng)。SOD與MDA均為反映I/R損傷常用的指標(biāo)，SOD是需氧生物體內(nèi)的一種含金屬離子的酶蛋白，其功能是催化超氧自由基的歧化作用，對(duì)機(jī)體起保護(hù)作用，其活性高低間接反映機(jī)體清除氧自由基的能力;MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化的代謝產(chǎn)物，其水平可反映氧自由基對(duì)組織損傷的程度(本研究模型組再灌注各時(shí)點(diǎn)血清中SOD活性顯著低于對(duì)照組，而MDA水平高于對(duì)照組)。

臨床上小腸I/R損傷常發(fā)生于腹部外傷、腸系膜血管缺血性疾病、失血性休克、感染和小腸移植過(guò)程中;其不僅可導(dǎo)致腸道損傷，還可導(dǎo)致遠(yuǎn)隔器官損傷，甚至引起多系統(tǒng)和器官功能衰竭［9～11］。I/R時(shí)富含黃嘌呤氧化酶的腸上皮細(xì)胞產(chǎn)生大量氧自由基，引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化，抑制線粒體酶活性，破壞腸黏膜細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能;腸黏膜通透性增高導(dǎo)致腸腔內(nèi)毒素通過(guò)損傷的腸黏膜入血，血中內(nèi)毒素水平上升;內(nèi)毒素則可增加腸壁通透性，減少腸血流量，激發(fā)“呼吸爆發(fā)”，產(chǎn)生更多的氧自由基，形成惡性循環(huán)［12，13］。

烏司他丁是從人尿液中分離純化的蛋白酶抑制劑，屬人體內(nèi)源性抑炎物質(zhì)。其前體是肝臟合成的inter-α-胰蛋白酶抑制劑。研究證實(shí)，烏司他丁對(duì)胰蛋白酶、α-糜蛋白酶等多種酶有抑制作用，具有穩(wěn)定溶酶體和細(xì)胞膜及調(diào)控炎性介質(zhì)和氧自由基釋放作用;可抑制多種水解酶的活性、穩(wěn)定溶酶體膜、抑制炎性介質(zhì)的過(guò)度釋放及改善微循環(huán)和組織灌注［14，15］。

本研究結(jié)果顯示，治療組干預(yù)后各時(shí)點(diǎn) SOD活性均高于模型組，MDA水平均低于模型組，證實(shí)烏司他丁對(duì)小腸I/R損傷具有一定的保護(hù)作用;其機(jī)制可能為提高SOD活性，抑制MDA水平。

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