陳梅香，劉坤平，羅 楓

(暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬清遠(yuǎn)醫(yī)院，廣東清遠(yuǎn)511518)

腫瘤轉(zhuǎn)移是影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后的主要原 因［1］。腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移是復(fù)雜的多步驟、多階段、多通路參與的過程。CD44是一種分布于細(xì)胞表面的黏附分子，其拼接變異體CD44v6主要介導(dǎo)異質(zhì)細(xì)胞間的黏附，促進(jìn)癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移［2］;E-鈣黏附蛋白(E-cadherin)在同質(zhì)細(xì)胞之間的黏附中起主要作用，能維持上皮細(xì)胞正常形態(tài)和結(jié)構(gòu)并阻止腫瘤細(xì)胞脫離原發(fā)灶［3］。2009年1月～2012年1月，我們觀察了CD44v6和E-cadherin蛋白在結(jié)直腸癌原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶組織中的表達(dá)情況，探討二者與結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料 結(jié)直腸癌標(biāo)本118例(結(jié)直腸癌組)、結(jié)直腸腺瘤標(biāo)本61例(結(jié)直腸腺瘤組)、結(jié)直腸癌原發(fā)灶及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶組織標(biāo)本41例，均取自2005年12月～2008年4月于我院接受手術(shù)的結(jié)直腸癌患者及結(jié)直腸腺瘤患者。結(jié)直腸癌患者男66例，女52例;年齡31～85歲，中位年齡為61.7歲;術(shù)前均未經(jīng)放、化療。所有組織標(biāo)本均經(jīng)甲醛固定后常規(guī)石蠟包埋。主要試劑:鼠抗人CD44v6購自北京中杉金橋公司;鼠抗人E-cadherin購自北京中杉金橋公司。

1.2 CD44v6、E-cadherin蛋白檢測 取各組標(biāo)本中直徑為1 mm的組織，采用Beecher公司(美國)的組織芯片打孔儀將其制成陣列蠟塊，連續(xù)切4 μm厚切片，常規(guī)HE染色，采用免疫組化SP法檢測組織中的CD44v6、E-cadherin蛋白，用已知陽性切片作為陽性對照，PBS代替一抗作陰性對照，操作步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn):CD44v6定位于細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色為陽性，根據(jù)陽性細(xì)胞百分比與染色強(qiáng)度綜合判定結(jié)果。陽性細(xì)胞百分比≤5%計0分，6%～25%計1分，26%～50%計2分，51%～75%計3分，＞75%計4分;染色呈淡黃色計1分，為黃色計2分，褐色計3分。兩項得分相乘，≤3分為陰性，＞3分則為陽性。E-cadherin定位于細(xì)胞膜，呈棕黃色為陽性，陽性細(xì)胞百分比≥70%為陽性，＜70%為陰性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件，率的比較用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CD44v6、E-cadherin蛋白表達(dá) 結(jié)直腸癌組及結(jié)直腸腺瘤組CD44v6陽性表達(dá)率分別為63.6%(75/118)、42.6%(26/61)，E-cadherin 的陽性表達(dá)率分別為57.6%(68/118)、73.8%(45/61)，P 均 ＜0.05。

2.2 CD44v6、E-cadherin蛋白表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 CD44v6在C+D期(Dukes分期)腫瘤組織中陽性表達(dá)率高于 A+B期，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P均＜0.05);E-cadherin蛋白在Dukes C+D期者腫瘤組織中的陽性表達(dá)率低于Dukes A+B期者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，P均＜0.05。見表1。

表1 CD44v6、E-cadherin蛋白表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 CD44v6、E-cadherin蛋白在結(jié)直腸癌原發(fā)灶與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶組織中的表達(dá)情況 41例發(fā)生轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌病例中，原發(fā)灶與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶CD44v6陽性表達(dá)率分別為 78.0%(32/41)、80.5%(33/41)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義;E-cadherin蛋白陽性表達(dá)率分別為 41.5%(17/41)、19.5%(8/41)，P ＜0.05。

3 討論

CD44存在兩種類型，即 CD44s(標(biāo)準(zhǔn)型)以及CD44v(變異型)，前者主要在生理狀態(tài)下表達(dá)，后者主要在病理狀態(tài)下表達(dá)。多項臨床研究已證實，CD44的變異體(CD44v)，尤其是 CD44v4～v7和CD44v6～v9均參與腫瘤的發(fā)病和進(jìn)展，CD44v6的高表達(dá)被認(rèn)為與惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，且在結(jié)直腸癌中呈現(xiàn)特異性表達(dá)［4～7］。CD44v6參與腫瘤遷移侵襲過程的相關(guān)機(jī)制可能為:CD44v6是一種透明質(zhì)酸、骨橋蛋白受體，能與細(xì)胞外間質(zhì)、基底膜的透明質(zhì)酸和骨橋蛋白結(jié)合，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的形態(tài)、運(yùn)動，利于浸潤轉(zhuǎn)移［8，9］;同時表達(dá) CD44v6 的細(xì)胞可以模擬淋巴歸巢使腫瘤細(xì)胞逃避免疫防御;CD44v6還可激活細(xì)胞體內(nèi)一些信號通路，使細(xì)胞分泌蛋白水解酶，加速細(xì)胞外基質(zhì)的降解［10］。還有研究表明CD44v6低表達(dá)的大腸癌患者生存率高于CD44v6 高表達(dá)者［11，12］，提示 CD44v6 是一個預(yù)后不良的指標(biāo)。本研究發(fā)現(xiàn)CD44v6蛋白在結(jié)直腸癌組織中的陽性表達(dá)率高于結(jié)直腸腺瘤，且Dukes C+D期者高于Dukes A+B期者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，提示CD44v6蛋白的表達(dá)預(yù)示著腫瘤細(xì)胞存在侵襲和轉(zhuǎn)移的可能性。此外，我們對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中CD44v6蛋白進(jìn)行檢測，未見CD44v6蛋白表達(dá)有明顯變化，與文獻(xiàn)［13］報道一致。

E-cadherin是鈣離子依賴的細(xì)胞黏附分子中的一員，E-cadherin蛋白正常表達(dá)于細(xì)胞膜，異常表達(dá)為細(xì)胞膜表達(dá)缺失或出現(xiàn)胞質(zhì)表達(dá)，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞與周圍正常細(xì)胞之間的黏附下降，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移［14，15］。有研究顯示E-cadherin蛋白在胃癌組織中的表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)［16，17］。本研究發(fā)現(xiàn)，E-cadherin蛋白在結(jié)直腸腺瘤中的陽性表達(dá)率高于結(jié)直腸癌，提示E-cadherin蛋白在結(jié)直腸惡性腫瘤中呈低表達(dá);同時E-cadherin蛋白在Dukes C+D期患者腫瘤組織中的陽性表達(dá)率低于Dukes A+B期，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者中表達(dá)率低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，提示E-cadherin蛋白表達(dá)減少，同質(zhì)細(xì)胞間黏附力降低，腫瘤細(xì)胞易于轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果還顯示，E-cadherin蛋白在結(jié)直腸癌原發(fā)灶中的表達(dá)率高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶，說明E-cadherin蛋白在結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移過程中可能發(fā)生了異質(zhì)性變化，其表達(dá)減少預(yù)示腫瘤細(xì)胞擁有更強(qiáng)的轉(zhuǎn)移能力。

綜上所述，結(jié)直腸癌組織中CD44v6呈高表達(dá)，E-cadherin蛋白呈低表達(dá)，二者可能與結(jié)直腸癌的侵襲及轉(zhuǎn)移有關(guān)，檢測兩項指標(biāo)可為臨床預(yù)測結(jié)直腸癌的侵襲及轉(zhuǎn)移提供一定依據(jù)。

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