王國(guó)玉，王浩宇，王英南

(承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，河北承德 067000)

馬齒莧是馬齒莧科馬齒莧屬一年生草本植物，分布廣泛［1］，生長(zhǎng)迅速，營(yíng)養(yǎng)豐富，可藥食兩用［2］;對(duì)于多種致病菌，如金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、痢疾桿菌等有較強(qiáng)的抑制作用，稱之為“天然抗生素”?！吨袊?guó)藥典》收載馬齒莧具有清熱解毒、涼血止血等作用［3］，對(duì)癰腫疔瘡、濕疹、丹毒等也具有治療作用?，F(xiàn)代藥理研究表明馬齒莧具有抗菌、抗病毒、降血脂、降血糖、抗動(dòng)脈硬化，抗衰老、抗氧化、提高機(jī)體免疫力等多種作用［4－6］，且無(wú)毒副作用。民間應(yīng)用馬齒莧治療咳嗽、哮喘有明顯療效，經(jīng)試驗(yàn)證明，WEPO具有鎮(zhèn)咳平喘作用，本研究通過(guò)評(píng)價(jià)其對(duì)家兔離體氣管平滑肌張力、收縮頻率、收縮幅度的影響，觀察其β受體的關(guān)系，探討WEPO的平喘作用機(jī)制，為進(jìn)一步研究及開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物 馬齒莧干燥地上部分，采自河北省承德市。經(jīng)承德醫(yī)學(xué)院藥用植物研究室趙春穎副研究員鑒定為馬齒莧科植物Portulaca oleracea L.的干燥地上部分。藥材標(biāo)本保存于承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所藥理毒理研究室。

1.2 試劑 普萘洛爾(Propranolol，Pro)，丹陽(yáng)市藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào):20021124。氨茶堿溶液(Aminophylline，Ami)，內(nèi)蒙古蒙欣藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào):100904。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 MacLab/4e生理記錄儀，來(lái)自澳大利亞;恒溫離體浴槽，來(lái)自澳大利亞;張力換能器(Made in Spain by PRNL，S.L:LE 13206)澳大利亞。

1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 承德種青紫蘭家兔，體重2.0～2.5 kg，來(lái)源承德醫(yī)學(xué)院動(dòng)物研究所繁育場(chǎng)。

1.5 馬齒莧水提取物(WEPO)的制備 取50 g干燥馬齒莧干燥地上部分，加入8倍量的蒸餾水浸泡3 h，煎煮30 min，過(guò)濾。濾渣加適量蒸餾水再煎煮30 min，過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮至100 mL，得馬齒莧水提取液(含生藥0.5 g·mL－1)，備用，臨用時(shí)用蒸餾水稀釋為適當(dāng)濃度。

1.6 克—亨溶液的配制 NaCl 6.9 g，KCl 0.35 g，MgSO4·7H2O 0.29g ，KH2PO40.16 g，NaHCO32.1 g，CaCl20.28 g，葡萄糖 2.0 g。加水到 1 L。

1.7 家兔離體氣管環(huán)實(shí)驗(yàn)［7－8］

1.7.1 氣管環(huán)標(biāo)本的制備 青紫蘭家兔，雌雄兼用。擊后腦致死，迅速切開(kāi)頸部腹面正中的皮膚，分離出氣管，從甲狀軟骨下部至氣管下部分叉處剪取全部氣管，放4℃的通有氧氣的克－亨營(yíng)養(yǎng)液中，仔細(xì)剔除氣管周圍結(jié)締組織，3個(gè)氣管軟骨分為一個(gè)氣管環(huán)，用細(xì)棉線將4個(gè)氣管環(huán)連接為一組，將穿好的氣管環(huán)通過(guò)張力換能器與MacLab/4e生理記錄儀鏈接，固定于盛有10 mL克－亨氏液的離體浴槽內(nèi)，調(diào)定恒溫度(38±0.5)℃，通有適量的 O2(95%的 O2，5%CO2)，調(diào)節(jié)前負(fù)荷為1 g，穩(wěn)定1 h，待基線穩(wěn)定后，描記正常活動(dòng)曲線。

1.7.2 分組 將氣管環(huán)隨機(jī)分為 WEPO 0.625、1.25、2.50 和5.00 g·L－1(終濃度，生藥)組，Pro+WEPO組及Ami組，每組10個(gè)氣管環(huán)。

1.7.3 給藥 WEPO各劑量組均待氣管環(huán)活動(dòng)基線穩(wěn)定后，描記藥前正?；顒?dòng)曲線，然后分別加入濃度為 62.5、125、250、500 g·L－1的 WEPO 溶液 0.1 mL，終濃度為分別為0.625、1.25、2.50、5.00 g·L－1，描記藥后氣管活動(dòng)曲線;Ami組待基線穩(wěn)定后，描記藥前正?；顒?dòng)曲線后，向營(yíng)養(yǎng)液中加入Ami組(濃度為3 g·L－1)0.1 mL，終濃度為 0.03 g·L－1;Pro+WEPO組待標(biāo)本基線平衡、穩(wěn)定后，描記藥前正常活動(dòng)曲線后，向營(yíng)養(yǎng)液中加入濃度為1 g·L－1的Pro溶液0.1 mL，終濃度為0.003 g·L－1，孵育 5 min，向營(yíng)養(yǎng)液中加入 WEPO(濃度500 g·L－1)0.1 mL，終濃度為5 g·L－1。各組均描記收縮曲線。計(jì)算給藥前后曲線的基線，頻率和幅度之差值。

2 結(jié)果

2.1 WEPO對(duì)離體氣管平滑肌張力的影響 應(yīng)用WEPO藥后家兔離體氣管平滑肌收縮曲線基線低于藥前，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)。Pro+WEPO組平滑肌收縮曲線基線與藥前比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，與WEPO組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，提示 Pro可明顯拮抗WEPO松弛氣管平滑肌作用，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 WEPO對(duì)離體氣管平滑肌張力的影響(±s，n=10)

表1 WEPO對(duì)離體氣管平滑肌張力的影響(±s，n=10)

注:與藥前比較*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與 WEPO 組比較 △△P＜0.01。

組別 終濃度/mg·L－1基線/mm差值/mm藥前 藥后0.48 ±0.06 WEPO 1.25 0.46 ±0.07 －0.02±0.01＊＊ 0.48 ±0.04 WEPO 2.5 0.46 ±0.04 －0.04 ±0.02* 0.50 ±0.03 WEPO 5.0 0.47 ±0.06 －0.05±0.01＊＊ 0.52 ±0.04 Pro+WEPO 0.003+5.0 0.49 ±0.02 0.47 ±0.09 0.02 ±0.01△△Ami 30 0.51 ±0.05 －0.04 ±0.01＊＊WEPO 0.625 0.46 ±0.07 －0.02 ±0.01＊＊0.55 ±0.12

2.2 對(duì)離體氣管平滑肌活動(dòng)頻率的影響 應(yīng)用不同劑量WEPO后家兔離體氣管平滑肌收縮頻率顯著低于藥前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或 P＜0.01);Pro+WEPO組平滑肌收縮頻率藥前比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，與WEPO組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，提示 Pro可明顯拮抗WEPO松弛氣管平滑肌作用，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 WEPO對(duì)離體氣管平滑肌收縮頻率的影響(±s，n=10)

表2 WEPO對(duì)離體氣管平滑肌收縮頻率的影響(±s，n=10)

注:與藥前比較 *P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與 WEPO 組比較，△△P ＜0.01。

組別 終濃度/mg·L－1收縮頻率/次·min－1差值/次·min－1藥前 藥后1.16 ±0.31 WEPO 0.625 2.26 ±0.42 2.01 ±0.32 －0.25 ±011 WEPO 1.25 2.34 ±0.39 1.56 ±0.41* －0.78 ±013 WEPO 2.5 2.22 ±0.51 1.38 ±0.41＊＊ －0.84 ±0.15 WEPO 5.0 2.31 ±0.52 1.19 ±0.31＊＊ 1.12 ±0.24 Pro+WEPO 0.003+5.0 2.28 ±0.51 2.32 ±0.45 0.04 ±0.01△△Ami 30 2.26 ±0.48 1.10 ±0.29＊＊

2.3 對(duì)離體氣管平滑肌收縮幅度的影響 WEPO各劑量組藥后氣管平滑肌收縮幅度均顯著低于藥前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或 P＜0.01);Pro+WEPO組平滑肌收縮幅度Pro+WEPO組平滑肌收縮曲線基線與藥前比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，與WEPO組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，提示Pro可明顯拮抗 WEPO松弛氣管平滑肌作用，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 WEPO對(duì)離體氣管平滑肌收縮幅度的影響(±s，n=10)

表3 WEPO對(duì)離體氣管平滑肌收縮幅度的影響(±s，n=10)

注:與藥前比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與 WEPO 組比較，△△P ＜0.01。

組別 終濃度/mg·L－1收縮幅度/mm藥前 藥后差值/mm WEPO 0.625 0.31 ±0.07 0.26 ±0.05*0.2 ±0.04 0.17 ±0.05 WEPO 1.25 0.29 ±0.07 0.19 ±0.07* －0.2 ±0.03 WEPO 2.5 0.33 ±0.07 0.17 ±0.05* －0.2 ±0.03 WEPO 5.0 0.32 ±0.07 0.15 ±0.07＊＊ 0.17 ±0.04 Pro+WEPO 0.003+5.0 0.32 ±0.13 0.21 ±0.11 0.11 ±0.03△△Ami 30 0.31 ±0.05 0.11 ±0.05＊＊

3 討論

支氣管哮喘是多種細(xì)胞和細(xì)胞組分參與、涉及多種炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子的慢性非特異性氣道炎癥性疾?。?］。His、Ach、TAX2 和白三烯是慢性氣道炎癥的主要介質(zhì)，引起支氣管痙攣、黏膜水腫、氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性，屬于Ⅰ型超敏反應(yīng)［10］。

哮喘發(fā)病機(jī)制復(fù)雜［11］，目前研究免疫炎癥機(jī)制是哮喘的本質(zhì)，細(xì)胞免疫、體液免疫參與哮喘的發(fā)生發(fā)展，氣道高反應(yīng)性是哮喘發(fā)生、發(fā)展的另一重要因素，神經(jīng)機(jī)制被認(rèn)為是哮喘發(fā)病的重要環(huán)節(jié)，臨床表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作的喘息、氣急、呼吸困難或咳嗽，常在夜間或清晨發(fā)作，多數(shù)患者可經(jīng)治療緩解或自行緩解，哮喘被公認(rèn)為是“頑癥”，至今尚無(wú)根治方法［12］。

哮喘治療主要包括擴(kuò)張支氣管和抗炎兩方面。β2-R激動(dòng)劑是臨床普遍應(yīng)用的擴(kuò)張支氣管藥物之一［13］，通過(guò)激動(dòng)氣道平滑肌上的腎上腺素能受體，增加平滑肌細(xì)胞內(nèi)CAMP的濃度，激活下游的信號(hào)通路，使平滑肌松弛，達(dá)到治療目的。

本研究采用家兔離體氣管平滑肌實(shí)驗(yàn)，以藥前后離體氣管平滑肌張力、收縮頻率、收縮幅度的變化為指標(biāo)，結(jié)果證實(shí)WEPO對(duì)家兔離體氣管平滑肌有顯著的松弛作用，β受體阻斷劑Pro可明顯拮抗WEPO對(duì)氣管平滑肌的松弛作用，說(shuō)明WEPO舒張氣管平滑肌作用是通過(guò)興奮β受體產(chǎn)生的，至于WEPO中何種成分、通過(guò)何種途徑對(duì)β受體產(chǎn)生興奮作用待進(jìn)一步深入研究。

［1］ 王國(guó)玉，王浩宇，佟繼銘.馬齒莧的化學(xué)成分與藥理作用研究現(xiàn)狀［J］.承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，29(1):82 －85.

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