張淑瓊，王 凡（.云南省昆明市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 65004；.云南省第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，昆明 65003）

抗鏈球菌溶血素O（ASO）是化膿性鏈球菌細(xì)胞外產(chǎn)物的特異性抗體。ASO主要用于鏈球菌感染引起的扁桃體炎、急性腎小球腎炎、活動(dòng)性風(fēng)濕熱、風(fēng)濕性心肌炎、皮膚及軟組織等的感染診斷和監(jiān)控［1］。評(píng)價(jià)分析測量范圍有助于發(fā)現(xiàn)方法學(xué)原理、儀器、校準(zhǔn)品、試劑、操作程序、質(zhì)量控制計(jì)劃等很多方面的誤差來源，是一個(gè)很重要的儀器性能指標(biāo)［2］。作者參照美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）的EP6-A文件指南，用奧林巴斯AU5400全自動(dòng)生化分析儀對(duì)血清ASO檢測系統(tǒng)的測量范圍進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑奧林巴斯AU5400全自動(dòng)生化分析儀；試劑：德賽診斷系統(tǒng)（上海）試劑盒，批號(hào)為17648校準(zhǔn)品批號(hào)為16693；質(zhì)控品為美國BIO-RAD，批號(hào)為54551、54553。

1.2 樣本根據(jù)EP6-A指南推薦選擇高值和低值樣本各一份。

1.3 方法收集高值（H）和低值（L）的患者樣本血清，要求高值樣本超過廠家提供的線性范圍。按1L+0H、0.8L+0.2H、0.6L+0.4H、0.4L+0.6H、0.2L+0.8H、0L+1H配制方法，制成6個(gè)不同濃度的系列評(píng)價(jià)標(biāo)本，在奧林巴斯AU5400全自動(dòng)生化分析儀上測定ASO，每個(gè)樣本按隨機(jī)方式重復(fù)測定3次，在1d內(nèi)完成。將ASO濃度為841IU／mL的血清分別作2～160倍稀釋，檢測結(jié)果與稀釋后的預(yù)期值比較，計(jì)算回收率，確定最大稀釋度。

2 結(jié) 果

2.1 ASO測量值與預(yù)期值結(jié)果將配制好的不同濃度系列樣本進(jìn)行檢測，結(jié)果見表1。

表1 ASO測量值與預(yù)期值結(jié)果（IU／mL）

將預(yù)期值為X，測量均值為Y，作散點(diǎn)圖，目測呈一條直線關(guān)系，在Microsoft Excel 2000作直線回歸，預(yù)期值與測量均值的散點(diǎn)圖見圖1。

圖1 ASO預(yù)期值與測量均值散點(diǎn)圖

從上述直線回歸結(jié)果得知，r2=0.998 7，說明組成回歸線的所有數(shù)據(jù)點(diǎn)緊密貼近回歸線，預(yù)期值與測量值之間相關(guān)性極好；斜率b1=0.984，在0.97～1.03，從經(jīng)驗(yàn)上判斷，斜率與1之間無差異；截距b0=7.45，與分析測量范圍的上限1 200IU／mL相比值很小，作截距與0差異的t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明截距是由統(tǒng)計(jì)引入的，實(shí)際的標(biāo)準(zhǔn)曲線能通過原點(diǎn)。從上述結(jié)果說明，該方法在實(shí)驗(yàn)所涉及的濃度范圍7～1 094IU／mL呈線性。

表2 ASO稀釋回收率測定結(jié)果（IU／mL）

2.2 ASO臨床可報(bào)告范圍驗(yàn)證將ASO濃度為841IU／mL的樣本分別進(jìn)行2、10、20、40、80、160倍稀釋，每個(gè)稀釋樣本重復(fù)測定2次，計(jì)算稀釋回收率。按儀器說明書要求，回收率在90.0%～110.0%結(jié)果時(shí)為可接受。稀釋回收率=（測定值／預(yù)期值）×100%。見表2。從表2結(jié)果可看出，隨著標(biāo)本稀釋倍數(shù)的增加，回收率逐漸增高，當(dāng)稀釋倍數(shù)大于或等于1∶80時(shí)，標(biāo)本回收率大于110.0%，超過可接受范圍。因此，當(dāng)患者樣本超過線性范圍時(shí)，必須稀釋重做，但最大稀釋度不宜超過40倍，標(biāo)本稀釋后的測定值必須大于21IU／mL，否則結(jié)果不可靠。即AMR（分析測量范圍）上限乘以最大稀釋度即為CRR（臨床可報(bào)告范圍）上限（1 094.1IU／mL×40=43 764IU／mL），結(jié)合試劑說明書靈敏度為7IU／mL，故本檢測系統(tǒng)測定ASO的臨床可報(bào)告范圍為7～43 764IU／mL。

3 討 論

分析測量范圍即定量檢測項(xiàng)目的線性檢測范圍，是反映分析方法性能的重要指標(biāo)，也是保證臨床檢測結(jié)果準(zhǔn)確性的重要砝碼。分析測量范圍的建立有助于獲得準(zhǔn)確可靠的檢測結(jié)果，在日常檢測過程中，標(biāo)本真實(shí)濃度只有在分析測量范圍內(nèi)才能保證其檢測結(jié)果的可靠性，否則可能會(huì)造成檢測結(jié)果的假性偏高或偏低［3］。對(duì)于CRR大于AMR的檢驗(yàn)項(xiàng)目，需進(jìn)行最大稀釋度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，并結(jié)合臨床決定水平和功能靈敏度來共同確定該項(xiàng)目的CRR。

分析用于驗(yàn)證的材料必須具有該方法的基質(zhì)效應(yīng)［4］。本研究首先通過一系列濃度的血清驗(yàn)證ASO測量的線性范圍，避免基質(zhì)效應(yīng)的影響，然后通過倍比稀釋實(shí)驗(yàn)確定ASO的臨床可報(bào)告范圍。從表1結(jié)果可看出，ASO的測量均值與預(yù)期值成很好的線性關(guān)系：Y=0.984 2 X+7.458 1，r2=0.998 7，驗(yàn)證后說明奧林巴斯AU5400全自動(dòng)生化分析儀測定ASO在7～1 094IU／mL線性良好，超出了試劑說明書規(guī)定的（7～800 IU／mL）范圍。在實(shí)際工作中，仍應(yīng)按照試劑說明書規(guī)定的線性為準(zhǔn)，對(duì)于超出試劑說明書規(guī)定的線性范圍的患者樣本，作者建議稀釋后重測。表2結(jié)果顯示，對(duì)于倍比稀釋血清，隨著稀釋倍數(shù)的增加，回收率逐漸增高，當(dāng)稀釋至1∶80倍時(shí)，回收率為122.9%，已經(jīng)高于110.0%，結(jié)果不可靠。這可能是基質(zhì)效應(yīng)的影響，當(dāng)稀釋倍數(shù)不斷增加，反應(yīng)環(huán)境已發(fā)生較大變化。當(dāng)患者標(biāo)本ASO測定值超過最大線性范圍時(shí)，必須稀釋重做，但最大稀釋度不宜超過40倍，即奧林巴斯AU5400全自動(dòng)生化分析儀檢測ASO的臨床可報(bào)告范圍為7～43 764IU／mL。

綜上所述，對(duì)于超過線性范圍的患者樣本，稀釋程序非常關(guān)鍵，為確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，建議臨床實(shí)驗(yàn)室在編寫標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程時(shí)，有必要規(guī)范樣本稀釋操作程序，為實(shí)驗(yàn)室提供進(jìn)一步的質(zhì)量保證，更好地為臨床提供更準(zhǔn)確的檢測結(jié)果。

［1］陳文彬，潘祥林，康熙熊，等.診斷學(xué)［M］.6版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2004：482.

［2］楊有業(yè)，張秀明.臨床檢驗(yàn)方法學(xué)評(píng)價(jià)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：168-195.

［3］潘錫龍.血清肌酸激酶活性檢測的分析測量范圍建立與評(píng)價(jià)［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2013，10（2）：167-168.

［4］潘超，王文龍，張國偉.定量檢測中分析測量范圍的驗(yàn)證［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2010，25（4）：303.