王 震，施 瑜，曹珍娣，印夏微（江蘇省鎮(zhèn)江市第二人民醫(yī)院：.檢驗(yàn)科；.感染管理科 000）

近年來，金葡菌的耐藥情況日趨嚴(yán)峻，其中耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）引起的院內(nèi)感染尤其嚴(yán)重，且呈多重耐藥性［1-2］。本研究對院內(nèi)感染金黃色葡萄球菌的分布及耐藥性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并采用簡便、經(jīng)濟(jì)、快速的隨機(jī)引物DNA擴(kuò)增多態(tài)性（RAPD）技術(shù)［3］，對同一病區(qū)或同一時(shí)期從患者標(biāo)本及院感監(jiān)測標(biāo)本中分離出的金黃色葡萄球菌進(jìn)行同源性分析，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 菌株來源2006年1月至2012年12月，收集住院時(shí)間大于10d患者的血液、胸腹腔積液、痰、咽拭子、尿液、膽汁、分泌物、靜脈導(dǎo)管等標(biāo)本中分離的金黃色葡萄球菌82株；與住院患者密切接觸的醫(yī)護(hù)人員手以及患者使用過的床單、床頭柜、門把手和醫(yī)療器械等醫(yī)院感染采樣標(biāo)本中分離的金黃色葡萄球菌39株。

1.2 方法按《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》進(jìn)行細(xì)菌分離和培養(yǎng)。藥物敏感性試驗(yàn)采用Kirby-Bauer瓊脂擴(kuò)散法，結(jié)果解釋依照美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（CLSI）2008年標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 MRSA檢測頭孢西丁紙片擴(kuò)散法：在MHA平皿上接種0.5麥?zhǔn)蠞岫鹊募?xì)菌懸液，貼30μg頭孢西丁藥敏紙片，35℃培養(yǎng)24h，判斷結(jié)果。抑菌圈直徑小于或等于19mm為陽性。質(zhì)控菌株采用金黃色葡萄球菌ATCC 25923。確認(rèn)試驗(yàn)：采用PCR擴(kuò)增nuc基因和mecA基因，以279bp及310bp處有擴(kuò)增條帶判為MRSA。具體方法見文獻(xiàn)［4］。

1.4 隨機(jī)引物DNA擴(kuò)增多態(tài)性（RAPD）技術(shù)采用ERIC-2引物：5′-AAG TAA GTG ACT GGG GTG AGC G-3′［5］（日本TaKaRa生物技術(shù)有限公司合成）。擴(kuò)增體系：在25μL體系中，10×緩沖液（含Mg2+）2.5μL、dNTP混合液各0.2mmol／L、引物各20pmol、TaqDNA聚合酶2U、模板DNA 3μL。擴(kuò)增條件：94℃預(yù)變性5min；94℃1min，35℃1min，72℃2min，循環(huán)40次；72℃終延伸10min。15g／L瓊脂糖凝膠電泳分離，0.5μg／mL溴乙啶染色，紫外線觀察。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用WHONET 5.3進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 10.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 分布情況檢出金黃色葡萄球菌121株，臨床科室分布以呼吸科、泌尿外科、普外科為主。臨床標(biāo)本以呼吸道標(biāo)本中分離率最高。MRSA檢出率65.29%（79／121）。院感監(jiān)測陽性標(biāo)本主要來自與患者密切接觸過的醫(yī)護(hù)人員手以及患者使用過的床單、床頭柜、門把手和醫(yī)療器械等。見表1、2。

表1 MRSA在臨床標(biāo)本中的分布［n（%）］

表2 MRSA在醫(yī)院感染采樣標(biāo)本中的分布

2.2 耐藥性監(jiān)測分離的121株金黃色葡萄球菌除對萬古霉素、替考拉寧100%敏感外，對其他14種常用抗菌藥物表現(xiàn)為不同程度耐藥，耐藥率由高到低依次為氨芐西林、紅霉素、阿奇霉素、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、克林霉素、丁胺卡那、四環(huán)素、氯霉素、氧氟沙星、復(fù)方磺胺甲噁唑、米諾環(huán)素、利福平、莫匹羅星，且耐藥率呈逐年上升趨勢，見圖1。MRSA呈多重耐藥性，且MRSA耐藥率明顯大于甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌（MSSA），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。

圖1 2006～2012年院內(nèi)感染121株金黃色葡萄球菌對14種抗菌藥物耐藥率曲線

2.3 RAPD同源性分析對同一病區(qū)或同一時(shí)期從患者標(biāo)本及院感監(jiān)測標(biāo)本中分離出的21株金黃色葡萄球菌，采用RAPD技術(shù)進(jìn)行基因同源性分析，擴(kuò)增圖譜見圖2。共分為個(gè)型，其中同源性較高的有：Ⅰ型（菌株號為1、6）；Ⅱ型（菌株號為2、3、4、5）；Ⅲ型（菌株號為7、8）；Ⅳ型（菌株號為9、10）；Ⅴ型（菌株號為11、12、17、20）；Ⅵ型（菌株號為13、14、18）；Ⅶ型（菌株號為15、16）；Ⅷ型（菌株號為19、21）。與患者接觸后的醫(yī)護(hù)人員手、物體表面及醫(yī)療器械等是引起金黃色葡萄球菌醫(yī)院內(nèi)傳播的主要原因。

圖2 21株院內(nèi)感染金黃色葡萄球菌RAPD分型結(jié)果

3 討 論

本研究發(fā)現(xiàn)，金黃色葡萄球菌引起的院內(nèi)感染以呼吸科、泌尿外科、普外科患者為主，以呼吸道標(biāo)本中分離率最高；對萬古霉素、替考拉寧以外的其他14種抗菌藥物表現(xiàn)為不同程度耐藥，且耐藥率呈逐年上升趨勢；MRSA檢出率為65.29%（79／121），呈多重耐藥性。同源性分析發(fā)現(xiàn)，院感監(jiān)測陽性標(biāo)本主要來自與患者密切接觸過的醫(yī)護(hù)人員手以及患者使用過的床單、床頭柜、門把手和醫(yī)療器械等?；颊?醫(yī)護(hù)人員-醫(yī)療器械間的交叉感染，是引起金黃色葡萄球菌醫(yī)院內(nèi)傳播的主要原因。

由醫(yī)務(wù)人員手導(dǎo)致的院內(nèi)感染不容忽視［6］。目前主要存在以下幾個(gè)方面的問題：（1）醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生依從性低，是制約手衛(wèi)生規(guī)范化管理的關(guān)鍵問題所在［7］。因此，要提高手衛(wèi)生的效果，必須采取有效措施，強(qiáng)化醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生意識。（2）醫(yī)院應(yīng)加強(qiáng)手衛(wèi)生規(guī)范的宣傳和培訓(xùn)，不斷提高醫(yī)務(wù)人員對手衛(wèi)生重要性的認(rèn)知度。（3）醫(yī)院應(yīng)不斷完善手衛(wèi)生設(shè)施，使醫(yī)務(wù)人員做到洗手高效、方便易行。（4）積極推廣使用速干型手消毒劑，達(dá)到快速、高效的殺菌效果，有利于提高工作效率［8］。

同時(shí)，醫(yī)院應(yīng)嚴(yán)格控制抗菌藥物的使用，執(zhí)行消毒隔離措施，加強(qiáng)醫(yī)療器械的使用和消毒管理，方可有效控制醫(yī)院內(nèi)感染發(fā)生。

［1］馬鳳玲.耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的醫(yī)院感染及耐藥性分析［J］.廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，25（6）：930-931.

［2］劉惠容，林定忠.臨床標(biāo)本耐甲氧西林金黃色葡萄球菌分布及藥敏分析［J］.中國當(dāng)代醫(yī)藥，2011，18（10）：70-71.

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