康爾恂 陳宏泉 閆麗萍 李杰 韓春玉 夏秀娟

抗幽門螺桿菌抗體陽性慢性蕁麻疹患者血清對人皮膚肥大細胞釋放組胺作用的研究

康爾恂 陳宏泉 閆麗萍 李杰 韓春玉 夏秀娟

目的探討抗幽門螺桿菌(Hp)抗體與慢性蕁麻疹(CU)發(fā)病的關系。方法選擇13C呼吸實驗陽性、抗Hp抗體陽性的CU患者為實驗組,健康人為對照組。用CU患者血清孵育人皮膚肥大細胞原代細胞株(HMC),檢測血清是否可刺激HMC細胞釋放組胺。用抗Hp抗體(IgG)刺激HMC細胞,檢測其是否具有活化細胞釋放組胺的作用。檢測CU患者血清中是否也含有高親和力受體(FcεRI)抗體或抗IgE抗體。分別用抗FcεRI抗體、抗IgE抗體刺激HMC細胞,檢測其活化HMC細胞釋放組胺作用。結果CU患者組血清活化HMC細胞釋放組胺作用(3.13±0.93)高于健康對照組(2.92±0.75,t=2.39,P＜0.05),4例CU患者血清中同時存在抗FcεRI抗體、3例存在抗IgE抗體。分別用這兩種抗體陽性的CU患者血清孵育HMC細胞,釋放組胺量均高于健康對照組(t值分別為4.82、6.34,均P＜0.01),但用只含有抗Hp抗體CU患者血清孵育HMC細胞無釋放組胺作用(與健康對照組比較,t=1.74,P＞0.05)?？笻p抗體(IgG)無激活HMC細胞釋放組胺作用(與陰性對照血清比較,t=1.95,P＞0.05),抗FcεRI抗體、抗IgE抗體均可激活HMC細胞釋放組胺(與陰性對照血清比較,t值分別為3.72、3.02,均P＜0.01)。結論抗Hp抗體對CU無致病作用,血清中同時存在抗FcεRI抗體或抗IgE抗體可導致部分Hp感染者同時患有CU。

蕁麻疹;幽門螺桿菌;抗體;肥大細胞

研究表明,幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)感染與慢性蕁麻疹(CU)發(fā)病有關,但發(fā)病機制仍不明確。本研究選擇抗Hp抗體陽性、同時患有CU的Hp現癥感染者,通過檢測患者血清以及純化的抗Hp抗體是否具有刺激體外培養(yǎng)人皮膚肥大細胞原代細胞株(HMC)釋放組胺作用,再進一步檢測患者血清中是否還存在可導致CU的抗FcεRI抗體或抗IgE抗體,探討抗Hp抗體與CU發(fā)病的關系。

對象與方法

一、對象

青島大學醫(yī)學院附屬煙臺毓璜頂醫(yī)院皮膚科門診50例伴有Hp感染的CU患者為實驗組,男23例,女27例,年齡(35±6)歲;50例無Hp感染,不患有CU的健康人為對照組,男21例,女29例,年齡(37±4)歲。CU患者入選標準:①皮膚風團、瘙癢每天或幾乎每天發(fā)作,時起時退,病程＞6周;②13C呼吸實驗陽性、抗Hp抗體陽性。CU患者排除標準:蕁麻疹患者被確診為膽堿能蕁麻疹、寒冷性蕁麻疹、皮膚劃痕癥、壓迫性蕁麻疹、日光性蕁麻疹等物理性蕁麻疹或蕁麻疹性血管炎。健康對照組均來自于我院體檢中心的健康志愿者,入選標準:①近1年無蕁麻疹和胃病史;②13C呼吸實驗、抗Hp抗體均為陰性。健康對照組排除標準:①隨訪過程中受試者13C呼吸實驗陽性或抗Hp抗體陽性;②隨訪過程中,受試者出現蕁麻疹癥狀。本研究經過本院倫理委員會批準,所有受試者均簽署知情同意書。

二、方法

1.使用試劑:10%小牛血清為北京索萊寶生物科技有限公司產品;HMC為青島諾賽科貿有限公司產品;1640培養(yǎng)液(美國Hyclone公司);組胺檢測試劑盒(上海亨代勞商貿有限公司);小鼠抗人FcεRI抗體、小鼠抗人IgE抗體檢測試劑盒為美國Rapidbio公司產品;抗Hp-IgG抗體、抗FcεRI抗體、抗IgE抗體為英國Abcam公司產品。

2.血清采集:抽取受試者外周靜脈血10 ml,400×g10 min分離血清,將分離的血清樣本編號后置于-20℃冰箱備用。

3.肥大細胞培養(yǎng):將HMC接種于含10%小牛血清的1640培養(yǎng)液,置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內培養(yǎng)至對數生長期。

4.CU患者血清活化HMC釋放組胺的檢測:將105/ml的HMC細胞懸液100 μl加入96孔細胞培養(yǎng)板,每孔內加入CU患者血清100 μl,以健康對照血清作為對照組,每例30個孔,37℃孵育20 min,按組胺檢測試劑盒操作檢測組胺釋放量。

5.CU患者血清中抗FcεRI抗體和抗IgE抗體檢測:按小鼠抗人FcεRI抗體檢測試劑盒和小鼠抗人IgE抗體檢測試劑盒說明書操作,檢測CU患者血清中抗FcεRI抗體、抗IgE抗體是否陽性。

6.抗Hp-IgG抗體活化HMC釋放組胺檢測:將105/ml HMC細胞懸液100 μl加入96孔細胞培養(yǎng)板,分別加入含2 mg/L抗Hp-IgG抗體的健康人血清100 μl,并設只加健康人血清的陰性對照組,每組30個孔。37℃孵育20 min,按組胺檢測試劑盒操作,檢測組胺釋放量。

7.抗FcεRI抗體及抗IgE抗體刺激HMC細胞釋放組胺檢測:將105/ml的HMC細胞懸液100 μl加入96孔細胞培養(yǎng)板,分別加入含2 mg/L抗FcεRI抗體、2 mg/L抗IgE抗體的健康人血清100 μl、不含抗FcεRI抗體及抗IgE抗體的陰性對照血清,每組30個孔,孵育20 min后,分別按組胺檢測試劑盒操作,檢測培養(yǎng)孔內組胺釋放量。

8.統(tǒng)計學方法:所有數據均采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行分析。使用t檢驗和Wilcoxon秩和檢驗。

結 果

一、CU患者血清刺激HMC細胞釋放組胺量檢測結果

CU患者組血清刺激HMC細胞釋放組胺量高于健康對照組。4例(8%)CU患者血清抗FcεRI抗體陽性,3例(6%)抗IgE抗體陽性,這兩種抗體陽性CU患者血清刺激HMC細胞釋放組胺量高于健康對照組。43例只含抗Hp抗體CU患者血清(86%)對HMC細胞無刺激釋放組胺作用。見表1。

表1 抗幽門螺桿菌抗體陽性慢性蕁麻疹患者血清中各抗體刺激HMC細胞釋放組胺量比較(±s)

表1 抗幽門螺桿菌抗體陽性慢性蕁麻疹患者血清中各抗體刺激HMC細胞釋放組胺量比較(±s)

注:慢性蕁麻疹患者血清刺激HMC細胞釋放組胺量與對照組比較,a:秩和檢驗

組別 例數 組胺(μg/L) t值 P值慢性蕁麻疹組 50 3.13±0.93 2.39 ＜0.05同時含抗FcεRI抗體 4 4.52±1.24 4.82a ＜0.01同時含抗IgE抗體 3 4.02±1.34 6.34a ＜0.01僅抗幽門螺桿菌抗體 43 3.06±1.25 1.74 ＞0.05健康對照組 50 2.92±0.75

二、抗Hp-IgG抗體、抗FcεRI抗體、抗IgE抗體刺激HMC細胞釋放組胺量檢測結果

與未加抗體的陰性對照組比較,抗Hp抗體無刺激HMC細胞釋放組胺作用,抗FcεRI抗體和抗IgE抗體均可刺激HMC細胞釋放組胺,釋放量高于陰性對照組。見表2。

表2 抗Hp-IgG抗體、抗FcεRI抗體、抗IgE抗體刺激HMC細胞釋放組胺量比較(±s)

表2 抗Hp-IgG抗體、抗FcεRI抗體、抗IgE抗體刺激HMC細胞釋放組胺量比較(±s)

注:各抗體刺激HMC細胞釋放組胺量與陰性對照組比較

血清抗體 n 組胺(μg/L) t值 P值抗幽門螺桿菌抗體 30 1.63±0.66 1.95 ＞0.05抗FcεRI抗體 30 6.45±0.80 3.72 ＜0.01抗IgE抗體 30 5.42±0.92 3.02 ＜0.01陰性對照組 30 1.33±0.61

討 論

回顧有關Hp感染與CU發(fā)病關系研究文獻,許多研究者認為,Hp感染與CU相關，部分Hp感染的CU患者經抗Hp治療后,癥狀可改善或完全緩解,并提出實驗室檢測是否存在Hp感染對于治療CU是有指導作用［1-3］。但研究也表明,抗Hp治療并不是對所有 Hp 感染的 CU 患者有效［4-5］。Kaplan 等［6］認為,抗Hp抗體可活化肥大細胞釋放組胺,導致CU發(fā)病,但目前還沒有抗Hp抗體可活化肥大細胞釋放組胺的直接證據。本研究首先用患有Hp感染的CU患者血清孵育HMC細胞,發(fā)現CU患者血清具有刺激HMC細胞釋放組胺的作用。進一步研究發(fā)現,50例CU患者中有4例血清抗FcεRI抗體陽性,3例抗IgE抗體陽性,這7例CU患者血清具有刺激HMC細胞釋放組胺的作用。而使用僅含抗Hp抗體(IgG)孵育HMC細胞,無活化HMC細胞釋放組胺作用。表明抗FcεRI抗體和抗IgE抗體具有明確的活化肥大細胞釋放組胺作用,部分Hp感染的CU患者是由這兩種自身抗體引起的。單純抗Hp治療可能對這兩種自身抗體陽性的CU患者無效［7-8］。Hp感染的CU中部分歸因于血清中存在針對肥大細胞自身抗體(抗FcεRI抗體或抗IgE抗體),屬慢性自身免疫性蕁麻疹(CAU)。因此,對于患Hp感染的CU患者,除常規(guī)抗Hp治療外,自身血清皮膚試驗(ASST)有助于對CU性質的鑒別,有利于對CU的針對性治療［9］。

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Effect of sera from chronic urticaria patients with anti-Helicobacter pyloriantibodies on the release of histamine by human mast cells

Kang Erxun*，Chen Hongquan，Yan Liping，Li Jie，Han Chunyu，Xia Xiujuan.*Department of Dermatology，Yantai Yuhuangding Hospital Affiliated to Medical College of Qingdao University，Yantai 264000，Shandong，China

Kang Erxun，Email:kangerxun2000@163.com

Objective To investigate the relationship between anti-Helicobacter pylori(Hp)antibodies and development of chronic urticaria(CU).Methods Fifty CU patients with positive13C-urea breath test and anti-Hp antibodies，as well as 50 healthy human controls were recruited in this study.Serum samples were collected from all the subjects.The samples from the patients were subjected to tests for anti-high affinity IgE receptor(anti-FcεRI)and-IgE antibodies.Human mast cells(HMCs)were classified into several parts to be incubated with the sera of patients with CU，the sera of healthy controls with anti-IgE and-FcεRI antibodies respectively for 20 minutes.Those incubated with the sera of healthy controls without these antibodies served as the control.Subsequently，the levels of histamine released by HMCs were measured by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA).Results The sera of CU patients showed a stronger ability to activate HMCs to release histamine than those of healthy controls((3.13±0.93)μg/L vs(2.92 ± 0.75)μg/L，t=2.39，P＜ 0.05).Anti-FcεRI antibodies were detected in 4 patients，and anti-IgE antibodies in 3 patients.A significant increase was observed in the levels of histamine released by HMCs incubated with anti-FcεRI antibody-positive and anti-IgE antibody-positive patient-derived sera(t=4.82，6.34，respectively，bothP＜ 0.01)，but not in those incubated with patient-derived sera only positive for anti-Hp antibodies(t=1.74，P＞ 0.05)compared with those incubated with healthy control-derived sera.In comparison with the antibody-free healthy control-derived sera，those with anti-Hp IgG antibodies showed no significant effect on the release of histamines by HMCs(t=1.95，P＞ 0.05)，whereas those with anti-FcεRI antibodies and anti-IgE antibodies exhibited an obvious promoting effect(t=3.72，3.02，respectively，bothP＜ 0.01).Conclusions The anti-Hp antibodies appears to have no role in the pathogenesis of CU，but the presence of anti-FcεRI and anti-IgE antibodies may contribute to the initiation of CU in patients with Hp infection.

Urticaria；Helicobacter pylori；Antibody；Mast cells

10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2014.08.009

山東省科技發(fā)展計劃(2011GSF11819)

264000山東煙臺,青島大學醫(yī)學院附屬煙臺毓璜頂醫(yī)院皮膚科(康爾恂、閆麗萍、韓春玉、夏秀娟),檢驗科(李杰);青島大學附屬醫(yī)院皮膚科(陳宏泉)

康爾恂,Email:kangerxun2000@163.com

2013-11-25)

(本文編輯:吳曉初)