吳 勰 王葆青 張 進(jìn) 姜 楠王慧君 馬 端，△

（1復(fù)旦大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院代謝與分子醫(yī)學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 上海 200032，2復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院呼吸科 上海 200032，3復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院兒童發(fā)育與疾病轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中心 上海 201102）

簡訊

Ⅱ型肺泡細(xì)胞Tfpi-1基因敲除對脂多糖誘導(dǎo)小鼠急性肺損傷的影響

吳 勰1王葆青2張 進(jìn)1姜 楠1王慧君3馬 端1，3△

（1復(fù)旦大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院代謝與分子醫(yī)學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 上海 200032，2復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院呼吸科 上海 200032，3復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院兒童發(fā)育與疾病轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中心 上海 201102）

目的 觀察Ⅱ型肺泡細(xì)胞組織因子途徑抑制物1（tissue factor pathway inhibitor 1，TFPI-1）基因敲除對細(xì)菌脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷（acute lung injury，ALI）的影響。方法將Tfpi-1flox/flox轉(zhuǎn)基因小鼠和表面活性蛋白A（surfactant-associated protein A，Spa）-環(huán)化重組酶（cyclization recombination enzyme，Cre）轉(zhuǎn)基因小鼠交配，獲得Tfpi-1flox/flox：Spa-Cre基因型小鼠（C57BL/6J），使用免疫組化和熒光定量PCR檢測不同基因型小鼠肺組織中TFPI-1的表達(dá)差異。LPS誘導(dǎo)ALI 24 h后運(yùn)用體積描記法和有創(chuàng)呼吸功能檢測法檢測小鼠的呼吸功能；通過肺泡灌洗，計(jì)數(shù)肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）中白細(xì)胞的數(shù)目；BCA法測定BALF中總蛋白水平；ELISA測定BALF中纖溶酶原激活物抑制因子1 （plasminogen activator inhibitor 1，PAI-1）的濃度，HE染色觀察肺損傷的程度；計(jì)算肺濕/干重比（wet/dry weight ratio，W/D）。結(jié)果未干預(yù)情況下，Tfpi-1flox/flox：Spa-Cre基因型小鼠相對于野生型小鼠肺部結(jié)構(gòu)和呼吸功能無明顯變化。LPS誘導(dǎo)后，Tfpi-1flox/flox：Spa-Cre基因型小鼠相對于野生型小鼠肺損傷分?jǐn)?shù)、BALF中白細(xì)胞總數(shù)、W/D和BALF中PAI-1濃度顯著升高，潮氣量（tidal volume，TV）、每分通氣量（minute ventilation，MV）、吸氣時(shí)間（inspiratory time，Ti）、肺動(dòng)態(tài)順應(yīng)性（dynamic lung compliance，C）有降低趨勢，而呼氣時(shí)間（expiratory time，Te）、氣道阻力（airway resistance，R）有升高趨勢。結(jié)論Ⅱ型肺泡細(xì)胞條件性敲除Tfpi-1基因促進(jìn)了LPS誘導(dǎo)的小鼠ALI，影響了小鼠的呼吸功能。

基因敲除； 脂多糖； 急性肺損傷； 峰值呼氣流速； 組織因子途徑抑制物； Ⅱ型肺泡細(xì)胞；小鼠

【Abstraet】 Objcetivc To investigate the effect of conditional knockout of tissue factor pathway inhibitor 1（TFPI-1）gene in typeⅡpneumocytes on lipopolysaccharide（LPS）-induced acute lung injury（ALI）in mice. Mcthods Tfpi-1flox/floxtransgenic mice and surfatcant-associated protein A（Spa）-cyclization recombination enzyme（Cre）transgenic mice were inbreeded to produce Tfpi-1flox/flox：Spa-Cre mice.The expression of Tfpi-1 from the lung of mice was detected by immunohistochemistry and realtime PCR method.LPS was used to induce ALI.At 24 hours after LPS exposure，respiratory function was measured by plethysmography and invasive respiratory function test.Then the mice were euthanized to obtain bronchoalveolar lavage fluid（BALF），and the number of leukocyte were counted.The levels of protein concentration in BALF were measured by BCA methods，and the concentration of plasminogen activator inhibitor-1（PAI-1）was measured by ELISA.Lung injury was observed by HE staining，and wet/dry weight ratio（W/D）were measured. Rcsults Solo Tfpi-1 knockout in typeⅡpneumocytes did not affect the lung structure and respiratory function in Tfpi-1flox/flox：Spa-Cre mice compared with wild-type mice.After induced by LPS，lung injury score，total number of leukocytes，W/D and the concentration of PAI-1 in BALF were significantly elevated.The respiratory function such as tidal volume（TV），minute ventilation（MV），inspiratory time（Ti），and dynamic lung compliance（C）were slightly decreased in Tfpi-1flox/flox：Spa-Cre mice，while expiratory time（Te）and airway resistance（R）were slightly increased compared with wild-type mice. Conelusions Conditional Tfpi-1 knockout in typeⅡpneumocytes promotes the progress of ALI induced by LPS and affects the respiratory function in mice.

【Kcy words】 gene knockout； lipopolysaccharide； acute lung injury； peak expiratory flow；tissue factor pathway inhibitor； typeⅡpneumocytes； mouse

急性肺損傷（acute lung injury，ALI）是由嚴(yán)重感染、創(chuàng)傷、休克、中毒、吸入有害氣體、急性胰腺炎、病理產(chǎn)科等導(dǎo)致的急性、進(jìn)行性呼吸衰竭，以肺毛細(xì)血管通透性增強(qiáng)、透明膜的形成、肺不張、進(jìn)行性的呼吸窘迫為主要特征。該過程中肺泡內(nèi)外源性凝血途徑被激活，伴隨著抗凝物質(zhì)減少和纖溶抑制，造成肺泡內(nèi)凝血-抗凝-纖溶異常，使肺泡內(nèi)處于一種高凝狀態(tài)［1］。組織因子途徑抑制物1（tissue factor pathway inhibitor 1，TFPI-1）是一種主要由血管內(nèi)皮分泌的內(nèi)源性組織因子（tissue factor，TF）抑制物，是人體內(nèi)最主要的生理性抗凝物質(zhì)。有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)通過TF啟動(dòng)的外源性凝血途徑主要由TF與TFPI-1之間的平衡來調(diào)節(jié)［2］。肺組織的血管內(nèi)皮細(xì)胞、肺泡細(xì)胞和巨噬細(xì)胞都能表達(dá)TFPI-1［3］，不同來源的TFPI-1在ALI中的作用尚不清楚。由于肺內(nèi)多種細(xì)胞可表達(dá)TFPI-1，單獨(dú)Ⅱ型上皮細(xì)胞敲除限于表達(dá)量以及其他細(xì)胞代償?shù)那闆r不一定能引起顯著的變化。本研究首次通過在小鼠Ⅱ型肺泡細(xì)胞中條件性敲除Tfpi-1基因并建立小鼠ALI模型，來評價(jià)Ⅱ型肺泡細(xì)胞缺失Tfpi-1基因后，小鼠ALI時(shí)肺組織結(jié)構(gòu)和功能的變化，以評價(jià)Tfpi-1基因?qū)LI的影響。

材料和方法

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Ⅱ型肺泡細(xì)胞特異表達(dá)Cre的雜合子小鼠（Spa-Cre）由北京軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院楊曉教授惠贈(zèng)。該小鼠和指示小鼠（ROSA26轉(zhuǎn)基因小鼠）交配，LacZ染色顯示Spa-Cre：ROS A26雙轉(zhuǎn)基因小鼠的Ⅱ型肺泡細(xì)胞具有較強(qiáng)β-半乳糖苷酶活性而呈藍(lán)染，說明表達(dá)Cre的Ⅱ型肺泡細(xì)胞具有組織特異性［4］。Tfpi-1flox/flox轉(zhuǎn)基因小鼠由本課題組和上海南方模式動(dòng)物中心共同制作：通過同源重組的方法在Tfpi-1基因的第3內(nèi)含子中插入1段序列，該序列含有1個(gè)基因失活（gene inactivation，GI）元件，其兩端標(biāo)記有Loxp序列，其余部分包含neo篩選基因序列。通過構(gòu)建Tfpi-1干細(xì)胞打靶載體、電轉(zhuǎn)SCR012小鼠胚胎干細(xì)胞、正負(fù)藥物篩選、PCR鑒定和測序鑒定，篩選出兩側(cè)臂均為陽性的胚胎干細(xì)胞克隆。通過對陽性胚胎干細(xì)胞克隆進(jìn)行囊胚顯微注射、胚胎移植等得到Tfpi-1flox/flox轉(zhuǎn)基因小鼠。將Tfpi-1flox/flox小鼠和Spa-Cre轉(zhuǎn)基因小鼠雜交后，獲得Tfpi-1flox/flox：Spa-Cre基因型小鼠（C57BL/6J），Cre倒轉(zhuǎn)GI元件，倒轉(zhuǎn)后的GI元件通過使Tfpi-1基因轉(zhuǎn)錄終止和在轉(zhuǎn)錄后水平破壞基因的正常剪接這兩種方式來實(shí)現(xiàn)基因的敲除。Cre在Spa啟動(dòng)子的作用下，在Ⅱ型肺泡細(xì)胞中特異表達(dá)，從而達(dá)到條件性敲除Tfpi-1的目的。

動(dòng)物分組將18只KO小鼠（C57BL/6J；雌性15只，雄性3只）分為敲除對照組（9只雌性）和敲除LPS組（6只雌性，3只雄性），將18只同窩Tfpi-1flox/+或Tfpi-1flox/flox基因型小鼠（C57BL/6J；雌性15只，雄性3只）分為野生型對照組（9只雌性）和野生型LPS組（6只雌性，3只雄性）。小鼠體質(zhì)量18 ～22 g（清潔級），飼養(yǎng)于復(fù)旦大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)系動(dòng)物房，標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，自由進(jìn)食和飲水，普通光照。先檢測對照組小鼠呼吸功能，之后取3只小鼠進(jìn)行肺組織TFPI-1表達(dá)分析，另取3只小鼠進(jìn)行肺組織TFPI-1熒光定量PCR檢測，其余進(jìn)行肺組織病理學(xué)檢查，LPS組小鼠氣管滴注LPS（5 mg/kg）制備ALI模型［5］。雌性小鼠于模型制備完成24 h后進(jìn)行呼吸功能檢測，取其中3只雌性小鼠進(jìn)行肺組織病理學(xué)檢查，另外3只雌性小鼠進(jìn)行肺組織肺泡灌洗，其余3只雄性小鼠進(jìn)行肺組織濕/干重比（wet/dry weight ratio，W/D）測定。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的過程符合復(fù)旦大學(xué)《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》的要求。

主要試劑鼠尾基因組抽提試劑盒購自美國Axygen公司，PCRMix購自上海萊楓生物科技有限公司，TFPI-1抗體購自美國Santa Cruz公司，即用型SABC-POD兔（IgG）試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司，DAB顯色試劑盒和Trizol試劑購自美國Invitrogen公司，焦碳酸二乙酯（Diethypyrocarbonate，DEPC）購自北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限公司，實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒購自日本Takara公司，PCR引物由上海博尚生物技術(shù)有限公司和上海桑尼生物科技有限公司合成，紅細(xì)胞裂解液購自美國Sigama公司，BCA蛋白定量試劑盒購自碧云天生物技術(shù)研究所，小鼠PAI-1 ELISA試劑盒購自武漢伊萊瑞特生物科技有限公司，異丙醇、氯仿、無水乙醇購自上海國藥集團(tuán)。常用化學(xué)試劑水合氯醛、戊巴比妥鈉、NaCl、KCl、Na2HPO4、KH2PO4等均為進(jìn)口分裝或國產(chǎn)分析純。

基因型鑒定剪小鼠尾，按照Axygen組織基因組DNA提取試劑盒說明操作，提取小鼠基因組DNA。利用特定序列引物，采用PCR方法對小鼠基因型進(jìn)行鑒定，基因型為Tfpi-1+/+小鼠（野生型）可見600 bp條帶，Tfpi-1flox/flox小鼠可見500 bp條帶，雜合子基因型為Tfpi-1flox/+則可見500和 600 bp條帶。表達(dá)Cre的小鼠PCR產(chǎn)物電泳可見724 bp條帶，不表達(dá)Cre的小鼠無此條帶。

rcal-timc PCR檢測將肺組織放入預(yù)冷的勻漿器中，用trizol試劑提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)。TFPI-1引物序列：上游，5＇-TCTGTTGCTTAGCCTTGTTCCCGA-3＇；下游，5＇-TGCTTTGCATGGACCATCATCTGC-3＇；GAPDH引物序列：上游，5＇-TGTCGTGGAGTCTACTGGTGTCTT-3＇，下游，5＇-TTCTCGTGGTTCACACCCATCACA-3＇。real-time PCR檢測以GAPDH為內(nèi)參，RQ值的計(jì)算采用2-ΔΔCT的方法。

TFPI-1免疫組織化學(xué)TFPI-1單克隆抗體以1∶50稀釋，肺組織石蠟切片，采用抗生物素蛋白-生物素-過氧化物酶（ABC）法檢測肺組織TFPI-1表達(dá)水平。

呼吸功能檢測參照文獻(xiàn)［6］，采用Buxco無創(chuàng)肺功能儀（美國Buxco公司）檢測小鼠的呼吸功能，包括潮氣量（tidal volume，TV）、每分通氣量（minute ventilation，MV）、呼氣時(shí)間（expiratory time，Te）、吸氣時(shí)間（inspiratory time，Ti）、PIF和PEF。之后以1.5 g/kg烏拉坦腹腔注射麻醉小鼠，頸部正中縱向切口3 cm，分離氣管和食道。在近喉部將氣管作橫向切口，插入連接有三通開關(guān)的2.5 mm氣管導(dǎo)管，用于測定TV和流率（V），TV和V用Kent呼吸流量測定儀（美國Kent Scientific Corporation公司）測定。胸內(nèi)壓（intrapleural pressure，IPP）用食道內(nèi)壓代替，將食道作橫向切口，插入頭端有4個(gè)側(cè)孔的注水導(dǎo)管，后聯(lián)PT14MX型壓力換能器（上海嘉龍教學(xué)儀器廠），經(jīng)SMUP-B型生物信號處理系統(tǒng)（復(fù)旦大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理與病理生理學(xué)系）處理后，TV和V經(jīng)A/D轉(zhuǎn)換，進(jìn)入PC計(jì)算機(jī)，由呼吸檢測系統(tǒng)PRC1.00軟件（上海嘉龍教學(xué)儀器廠）自動(dòng)記錄TV、V和IPP曲線，并自動(dòng)計(jì)算肺動(dòng)態(tài)順應(yīng)性（dynamic lung compliance，C）和氣道阻力（airway resistance，R）。

肺組織形態(tài)學(xué)檢查對各組小鼠肺組織做常規(guī)石蠟切片、HE染色，采用Takao法進(jìn)行病理學(xué)評分。將各個(gè)評分進(jìn)行匯總，總分即代表肺損傷的程度［7］。

小鼠W/D測定游離小鼠肺組織后，肺組織稱濕重（W）后置于60℃溫箱，72 h后（至恒重）再稱干重（D），計(jì)算濕/干重比（W/D），可反映肺水腫程度。

BALF內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)計(jì)數(shù)，總蛋白濃度定量以及PAI-1濃度檢測對小鼠進(jìn)行肺泡灌洗，吸取20μL BALF在細(xì)胞計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù)白細(xì)胞總數(shù)（若BALF中有較多紅細(xì)胞，先用紅細(xì)胞裂解液處理，以除去紅細(xì)胞），剩余樣本按照說明書用BCA法進(jìn)行總蛋白定量以及PAI-1濃度檢測。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理Graphpad 5.0軟件對所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以±s表示，差異顯著性采用雙側(cè)t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

Ⅱ型肺泡細(xì)胞Tfpi-1敲除小鼠的構(gòu)建、表型觀察及基因型鑒定通過表型觀察，Ⅱ型肺泡細(xì)胞中敲除Tfpi-1基因的小鼠與同窩對照組相比，在存活、發(fā)育及可育性方面的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖1）。

免疫組化及熒光定量PCR檢測免疫組化結(jié)果顯示TFPI-1在小鼠肺組織內(nèi)表達(dá)豐富，包括Ⅱ型肺泡細(xì)胞和Ⅰ型肺泡細(xì)胞，相較于 WT組小鼠，KO組小鼠肺組織中TFPI-1表達(dá)陽性的Ⅱ型肺泡細(xì)胞數(shù)量顯著減少（圖2）。

圖1 組織特異性的打靶和基因型鑒定Fig 1 Tissuc spceifie gcnc targcting and gcnotyping

圖2 TFPI-1在KO小鼠和WT小鼠肺組織中的表達(dá)情況Fig 2 Thc cxprcssion of TFPI-1 in thc lung of KO miec and WT miec

小鼠呼吸功能檢測LPS未干預(yù)時(shí)，WT組和KO組小鼠呼吸功能的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。LPS氣管灌注24 h后，兩組小鼠呼吸功能之間的差異仍然無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但KO小鼠相對于WT小鼠，TV、MV、C有降低趨勢，而Te、R有升高趨勢（圖3）。

小鼠肺組織結(jié)構(gòu)檢查，肺損傷指標(biāo)以及肺泡內(nèi)凝血纖溶指標(biāo)檢測LPS未干預(yù)時(shí)，各組小鼠在肺部結(jié)構(gòu)上未見明顯差異；LPS干預(yù)后，兩組小鼠肺泡腔內(nèi)可見紅細(xì)胞和白細(xì)胞浸潤，巨噬細(xì)胞增多，肺泡隔明顯增厚，血管充血，間質(zhì)水腫，整個(gè)肺組織出現(xiàn)炎性反應(yīng)并伴有透明膜形成，而KO組小鼠相較于WT組小鼠，這種變化更加明顯（圖4）。

圖3 小鼠呼吸功能檢測Fig 3 Thc tcst of rcspiratory funetion in miec

圖4 ALI狀態(tài)下KO小鼠的肺泡腔內(nèi)白細(xì)胞浸潤（主要為中性粒細(xì)胞）更為明顯Fig 4 In thc statc of ALI，KO miec has morc lcukoeytc infiltration（mainly ncutrophils）in alvcolar spaec

討 論

Huang等［8］曾經(jīng)制備了TFPI-1結(jié)構(gòu)域1基因敲除小鼠，但純合小鼠因卵黃囊出血、腦出血和胎盤發(fā)育異常而導(dǎo)致胚胎致死，因此無法將其用于肺發(fā)育和肺損傷的評價(jià)。基于這種現(xiàn)狀，我們和上海南方模式動(dòng)物中心合作，成功制備了Tfpi-1flox/flox小鼠，再與Spa-Cre小鼠雜交獲得了Ⅱ型肺泡細(xì)胞條件敲除Tfpi-1基因的小鼠。免疫組化和熒光定量PCR檢測發(fā)現(xiàn)，在蛋白水平和RNA水平，KO組小鼠相較于WT組，TFPI-1均有明顯下降，因此具備了評價(jià)TFPI-1在肺發(fā)育和肺損傷中是否發(fā)揮作用的基礎(chǔ)。

TF是外源性凝血途徑的啟動(dòng)因子。ALI發(fā)生時(shí)，肺泡細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞受損，一方面血液循環(huán)中的血細(xì)胞和凝血因子滲透到肺泡中，另一方面釋放大量TF，導(dǎo)致在肺泡中發(fā)生凝血反應(yīng)，最終可形成透明膜，引起急性呼吸窘迫綜合征（acute respiratory distress syndrom，ARDS）［9-10］。Bastarache等［11］發(fā)現(xiàn)，ALI和ARDS患者肺水腫液中TFPI-1水平顯著高于血漿。本課題組之前的研究也發(fā)現(xiàn)，肺組織中TF在LPS處理6 h后開始上升，在12 h時(shí)達(dá)到高峰；TFPI-1則在LPS處理后呈下降趨勢，在10 h時(shí)達(dá)到最低值，24 h后仍未回到正常水平［12］。Agrawal等［13］發(fā)現(xiàn)，TFPI-1可通過抑制TF活性、降低炎性因子釋放，從而減輕內(nèi)毒素引起的肺損傷。并且有研究發(fā)現(xiàn)體外培養(yǎng)的人肺泡上皮來源的A549細(xì)胞和原代分離的人Ⅱ型肺泡細(xì)胞在炎性因子的刺激下能釋放TFPI-1［9-11］，提示肺泡細(xì)胞在維持肺泡內(nèi)TF-TFPI-1平衡以及ALI時(shí)肺泡內(nèi)凝血和纖溶狀態(tài)的平衡中發(fā)揮了重要的調(diào)節(jié)作用。

有關(guān)呼吸功能的研究結(jié)果顯示，LPS誘導(dǎo)小鼠ALI前后Tv和Mv明顯下降，提示ALI時(shí)肺順應(yīng)性降低，部分肺泡閉塞以及肺水腫導(dǎo)致肺通氣功能下降。在生理狀態(tài)下，KO組小鼠和WT組小鼠的肺功能差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。建立ALI模型后，兩種小鼠的呼吸功能差異雖然無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但KO組小鼠TV、MV和C有明顯的下降趨勢，R有明顯的上升趨勢。

生理情況下Ⅱ型肺泡細(xì)胞缺乏TFPI-1時(shí)，小鼠肺部的結(jié)構(gòu)與功能未見變化。在LPS誘導(dǎo)建立的ALI模型中，Ⅱ型肺泡細(xì)胞缺乏TFPI-1的小鼠肺泡腔內(nèi)中性粒細(xì)胞浸潤明顯增多，血管充血更加嚴(yán)重，肺泡間隔明顯增厚，肺損傷分?jǐn)?shù)、W/D以及BALF中的總白細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著升高，透明膜形成顯著增多，提示在ALI的過程中Ⅱ型肺泡細(xì)胞分泌的TFPI-1能夠發(fā)揮比較顯著的抗凝和抗炎作用，從而有助于減輕肺損傷。同時(shí)，我們關(guān)注了肺泡內(nèi)PAI-1的變化，發(fā)現(xiàn)KO組小鼠相對于WT組小鼠，肺泡內(nèi)的PAI-1水平顯著下降，提示KO組小鼠的肺組織內(nèi)纖溶活性代償性的上升，以維持肺泡內(nèi)凝血與纖溶的平衡。

總之，本研究的結(jié)果初步顯示，在急性肺部炎癥時(shí)，Ⅱ型肺泡細(xì)胞產(chǎn)生的TFPI-1可以通過改變肺泡內(nèi)TF-TFPI-1平衡，影響肺泡內(nèi)的炎癥和凝血平衡，進(jìn)而促進(jìn)炎癥的發(fā)生和發(fā)展，同時(shí)影響小鼠的呼吸功能。目前有關(guān)TFPI-1在細(xì)胞膜上的受體尚不明確，TFPI-1作為一種抗凝分子，可通過與FXa/ TF/FVIIa結(jié)合形成一種四元復(fù)合物，抑制血栓的形成，而其中的TF是一種跨膜分子，在此過程中可通過PAR對ERK通路產(chǎn)生抑制作用，但是否有抑制P38途徑的作用目前還存在爭議［14］；另有報(bào)道TFPI-1可以與SDC4相互結(jié)合向細(xì)胞內(nèi)傳遞信號［15-16］，對于TFPI-1減少加重肺部炎癥的機(jī)制尚有待于進(jìn)一步的研究。

致謝王際平和溫丹萍在小鼠繁殖、基因型鑒定技術(shù)以及文獻(xiàn)分享上給予了指導(dǎo)和幫助；肖家軍、許飛、刁磊和徐君在免疫組化實(shí)驗(yàn)上給予了幫助；房波在real-time PCR實(shí)驗(yàn)上給予了幫助；張志剛老師在小鼠肺部病理檢查上給予了指導(dǎo)與幫助；王琴、宋元林老師和高磊老師在小鼠ALI模型建立以及肺損傷指標(biāo)檢測技術(shù)上給予了指導(dǎo)和幫助；上海市針灸筋絡(luò)研究所的王宇老師和馬子風(fēng)在小鼠呼吸功能檢測上給予了幫助。

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Effcet of eonditional knoekout of Tfpi-1 gcnc in typcⅡpncumoeytcs on lipopolysaeeharidcs-induecd aeutc lung injury in miec

WU Xie1，WANG Bao-qing2，ZHANG Jin1，JIANG Nan1，WANG Hui-jun3，MA Duan1，3△
（1Key Laboratory of Metabolism and Molecular Medicine，Ministry of Education，School of Basic Medical Sciences，F(xiàn)udan University，Shanghai 200032，China；2Department of Respiration，Zhongshan Hospital，F(xiàn)udan University，
Shanghai 200032，China；3Research Center for Children Development and Translational Medicine，
Children's Hospital，F(xiàn)udan University，Shanghai 201102，China）

E-mail：duanma@fudan.edu.cn

R 34；R 563

A

10.3969/j.issn.1672-8467.2015.06.001

2015-06-25；編輯：段佳）

國家自然科學(xué)基金（81070104）△

*This work was supportcd by thc National Natural Seicnec Foundation of China（81070104）.