劉華

首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院腎內(nèi)科，北京100053

過氧化物酶體增殖體激活受體γ激動劑對炎癥狀態(tài)下人腎小球系膜細(xì)胞ABCA1表達(dá)的影響

劉華

首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院腎內(nèi)科，北京100053

目的研究過氧化物酶體增殖體激活受體γ（PPAR-γ）激動劑15-脫氧前列腺素J2（15d-PGJ2）對炎癥狀態(tài)下人腎小球系膜細(xì)胞（HMC）ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1（ABCA1）表達(dá)的影響，探討影響受體表達(dá)和延緩腎小球疾病進(jìn)展的可能干預(yù)措施。方法培養(yǎng)的HMC隨機(jī)分為5組繼續(xù)培養(yǎng)24 h：空白組：普通培養(yǎng)的細(xì)胞；對照組：5 ng/mL白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）；實驗組：5 ng/mL IL-1β+2.5μmol/L 15d-PGJ2，5 ng/mL IL-1β+5μmol/L 15d-PGJ2，5 ng/mL IL-1β+10μmol/L 15d-PGJ2，應(yīng)用實時定量PCR法測定不同劑量PPAR-γ激動劑15d-PGJ2對IL-1β作用下HMC ABCA1 mRNA的影響。培養(yǎng)的HMC隨機(jī)分為4組繼續(xù)培養(yǎng)24 h：空白組：普通培養(yǎng)的細(xì)胞；對照組：5 ng/mL IL-1β；實驗組：5 ng/mL IL-1β+5μmol/L 15d-PGJ2，5 ng/mL IL-1β+10μmol/L 15d-PGJ2，應(yīng)用Western印跡方法測定不同劑量15d-PGJ2對IL-1β誘導(dǎo)的ABCA1蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果炎癥因子IL-1β能夠抑制HMC的ABCA1表達(dá)，15d-PGJ2呈劑量依賴性地增加IL-1β抑制的ABCA1 mRNA和蛋白表達(dá)。與對照組（5 ng/mL IL-1β）比較，2.5、5、10μmol/L 15d-PGJ2實驗組ABCA1 mRNA表達(dá)分別升高1.34、2.15、2.88倍，5、10μmol/L 15d-PGJ2實驗組ABCA1蛋白表達(dá)分別升高1.16、1.54倍。結(jié)論PPAR-γ激動劑15d-PGJ2劑量依賴性改善IL-1β對ABCA1 mRNA和蛋白表達(dá)的抑制，對炎癥導(dǎo)致的系膜細(xì)胞脂質(zhì)失衡具有保護(hù)作用。

過氧化物酶體增殖體激活受體γ激動劑；系膜細(xì)胞；白細(xì)胞介素1β；ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1

越來越多的證據(jù)表明，腎小球硬化與動脈粥樣硬化有相似的病理改變和病理生理機(jī)制，脂質(zhì)負(fù)荷細(xì)胞的表達(dá)是腎小球硬化和動脈粥樣硬化的特征性的改變。動脈粥樣硬化的實質(zhì)是血管壁的慢性炎癥，因此炎癥因子與脂質(zhì)共同作用是導(dǎo)致腎小球硬化發(fā)生發(fā)展的主要致病因素，研究炎癥如何在細(xì)胞水平影響膽固醇穩(wěn)態(tài)是明確其介導(dǎo)腎臟損害的關(guān)鍵。細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)涉及脂質(zhì)的攝取和排出兩方面的平衡，ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1(ABCA1)是ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體（ABC）超家族的成員之一，在膽固醇逆轉(zhuǎn)運（RCT）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）生成的起始步驟中起重要作用，具有抗早期動脈粥樣硬化的功能[1]。過氧化物酶體增殖體激活受體γ（PPAR-γ）是核激素受體超家族成員之一，在多種轉(zhuǎn)錄調(diào)控的細(xì)胞行為中都發(fā)揮重要作用，但是否影響炎癥狀態(tài)下系膜細(xì)胞內(nèi)膽固醇穩(wěn)態(tài)的相關(guān)研究較少。本實驗旨在揭示PPAR-γ激動劑在炎癥因子白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）存在情況下對ABCA1表達(dá)的影響，探討影響受體表達(dá)和延緩腎小球疾病進(jìn)展可能的干預(yù)措施。

1 材料與方法

1.1 材料

轉(zhuǎn)染T-SV40和H-ras癌基因的人腎小球系膜細(xì)胞株（HMCL）由英國Royal Free Hospital腎臟病中心RUAN Xiongzhong教授惠贈。RPMI-1640培養(yǎng)液及胎牛血清（FBS）（Gibco，U.S.A）。IL-1β（R&D，England），Ox-LDL（中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)所），ABCA1抗體（Novus，U.S.A）溶于0.5 mL磷酸鹽緩沖液（PBS），分裝-70℃保存。PCR反應(yīng)體系、逆轉(zhuǎn)錄酶（MMLV）緩沖液（Promege，U.S.A），dNTP、Oligo（dT）、引物均由上海生工生物工程公司合成，ABCA1引物序列：上游5'-ATTCGCTCTGAGATGAGCACCA-3'；下游5'-TTTCAAGCGGGCAT AGAACCA-3'。GAPDH引物序列：上游5'-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3'下游5'-ATGGTGGTGAAGACGCCAGT-3'。15d-PGJ2：15-deoxy-Δ12，14-Prostaglandin J2（Calbiochem，U.S.A），化學(xué)分子式C20H28O3，溶于二甲基亞砜（DMSO），貯液濃度為10 mmol/L分裝，-20℃凍存?zhèn)溆?。工作液DMSO終濃度為0.1%（V/V）。

1.2 HMC細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定

用10%FCS的RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)液在37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中孵育培養(yǎng)HMCL細(xì)胞，以0.01 mol/L PBS沖洗細(xì)胞，0.25%胰蛋白酶/0.025%乙二胺四乙酸（EDTA）消化，10%FCS的RPMI1640培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞傳代培養(yǎng)。間接免疫熒光法檢測：胞漿Actin、CollagenⅣ、Fibronnectin及Vimentin染色陽性，Cytokeratin、Ⅷ因子染色陰性。

1.3 15d-PGJ2的細(xì)胞毒性試驗細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察

①細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察。靜止細(xì)胞后分別換用含終濃度為0、2.5、5、10、15、20μmol/L 15d-PGJ2的0.2% FCS RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h，40倍相差顯微鏡下觀察HMC細(xì)胞形態(tài)的改變。②錐蟲藍(lán)排斥試驗。分組方法同上，培養(yǎng)24 h收集各組細(xì)胞，PBS輕洗，胰酶消化后離心，細(xì)胞沉淀用NS制成懸液，錐蟲藍(lán)染色，隨機(jī)計數(shù)5個視野所有細(xì)胞。死亡細(xì)胞百分?jǐn)?shù)以核藍(lán)染的細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的百分比表示。③LDH釋放試驗。分組同上，培養(yǎng)24 h收集各組細(xì)胞。不含藥物的6孔細(xì)胞設(shè)為低水平對照組，高水平對照組于實驗前加入200μL 1%Triton破壞細(xì)胞。各孔取100μL上清加入100μL反應(yīng)混合物，室溫避光30 min，不含細(xì)胞的培養(yǎng)液校零，酶標(biāo)儀490 nm波長檢測。細(xì)胞毒性指數(shù)=（實驗組OD值-低水平對照組OD值）/（高水平對照組OD值-低水平對照組OD值）×100%，即為細(xì)胞死亡百分?jǐn)?shù)。

1.4 實時PCR檢測ABCA1 mRNA表達(dá)

15d-PGJ2對IL-1β誘導(dǎo)的ABCA1 mRNA表達(dá)的影響：培養(yǎng)細(xì)胞靜止后，40μg/mL Ox-LDL預(yù)先孵育24 h，隨機(jī)分為5組，每組3皿，空白組：普通培養(yǎng)的細(xì)胞、對照組：5 ng/mL IL-1β及3個實驗組：5 ng/mL IL-1β+2.5μmol/L 15d-PGJ2，5 ng/mL IL-1β+5μmol/L 15d-PGJ2，5 ng/mL IL-1β+10μmol/L 15d-PGJ2。37℃培養(yǎng)24 h收獲細(xì)胞，提取總RNA，合成cDNA，25μL反應(yīng)體系PCR擴(kuò)增：DEPC水15μL，引物（P1+P2）1μL，RT產(chǎn)物2μL，SYBER GreenⅠ染料12.5μL，95℃10 s，95℃15 s，60℃30 s，共擴(kuò)增40～50個循環(huán)。

1.5 Western印跡檢測ABCA1蛋白表達(dá)

15d-PGJ2對IL-1β誘導(dǎo)的ABCA1蛋白表達(dá)的影響：培養(yǎng)細(xì)胞靜止后，40μg/mL Ox-LDL預(yù)先孵育24 h，隨機(jī)分為4組，每組3皿，空白組：普通培養(yǎng)的細(xì)胞，對照組：5 ng/mL IL-1β，實驗組：5 ng/mL IL-1β+ 5μmol/L 15d-PGJ2，5 ng/mL IL-1β+10μmol/L 15d-PGJ2，37℃培養(yǎng)24 h收獲細(xì)胞，提取總蛋白。上樣蛋白質(zhì)250μg，電泳、轉(zhuǎn)膜5 h，封閉緩沖液過夜，1∶600一抗與膜孵育，室溫緩慢振蕩2 h，1∶6000二抗室溫緩慢振蕩1 h，洗膜，ECL顯影。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 11.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間比較采用t檢驗；多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 15d-PGJ2的細(xì)胞毒性試驗

本實驗選用15d-PGJ2工作濃度為0～10μmol/L，在此范圍內(nèi)細(xì)胞死亡率＜5%，對細(xì)胞無明顯毒性作用。見表1。

表1 不同15d-PGJ2濃度組的細(xì)胞毒性試驗細(xì)胞死亡率（%，n=6）

2.1.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察相差顯微鏡觀察結(jié)果顯示，2.5～10μmol/L濃度組各組與對照組比較，細(xì)胞形態(tài)無明顯改變。15μmol/L組細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，少量細(xì)胞漂浮、死亡，20μmol/L組可見大量細(xì)胞死亡。

2.1.2 錐蟲藍(lán)排斥試驗細(xì)胞的死亡率隨著藥物作用濃度的增加而升高，2.5～10μmol/L濃度各組細(xì)胞死亡率分別為1.26%、2.85%、3.86%，15～20μmol/L濃度組細(xì)胞死亡率分別為16.78%、31.25%。見圖1。

2.1.3 LDH釋放試驗藥物的細(xì)胞毒性呈劑量依賴性，2.5～10μmol/L濃度各組細(xì)胞死亡率分別為1.75%、3.26%、4.17%，15～20μmol/L 15d-PGJ2導(dǎo)致的細(xì)胞死亡率分別達(dá)19.83%、41.08%。見圖1。

圖1 15 d-PGJ2的細(xì)胞毒性試驗

2.2 15d-PGJ2對IL-1β誘導(dǎo)的ABCA1表達(dá)的影響

2.2.1 15d-PGJ2對IL-1β誘導(dǎo)的ABCA1 mRNA表達(dá)的影響5 ng/mL IL-1β作用于細(xì)胞24 h與普通培養(yǎng)的空白組比較，能夠降低ABCA1 mRNA表達(dá)為0.195倍（P＜0.01），15d-PGJ2呈劑量依賴性的增加IL-1β抑制的ABCA1 mRNA表達(dá)。與單純5 ng/mL IL-1β對照組比較，2.5μmol/L 15d-PGJ2濃度研究組細(xì)胞ABCA1 mRNA表達(dá)升高1.34倍（P＜0.05），5、 10μmol/L濃度研究組細(xì)胞ABCA1 mRNA分別升高2.15、2.88倍（P＜0.01）。見圖2。

圖2 12 d-PGJ2對IL-1β誘導(dǎo)的ABCA1mRNA表達(dá)的影響

2.2.2 15d-PGJ2對IL-1β誘導(dǎo)的ABCA1蛋白表達(dá)的影響5 ng/mL IL-1β作用于細(xì)胞24 h與普通培養(yǎng)的空白組比較，能夠降低ABCA1蛋白表達(dá)為0.583倍（P＜0.01），15d-PGJ2呈劑量依賴性地增加IL-1β抑制的ABCA1蛋白的表達(dá)。與單純5 ng/mL IL-1β對照組比較，5μmol/L 15d-PGJ2濃度研究組細(xì)胞ABCA1蛋白表達(dá)升高為1.16倍（P＜0.05），10μmol/L 15d-PGJ2濃度研究組細(xì)胞ABCA1蛋白表達(dá)升高為1.54倍（P＜0.01）。見圖3。

圖3 15d-PGJCF LI-1β誘導(dǎo)的ABCA1蛋白表達(dá)的影響

3 討論

高脂血癥與腎臟疾病進(jìn)展密切相關(guān)，它不僅是許多腎臟疾病常見的臨床表現(xiàn)，脂代謝異常本身也參與了腎臟病的進(jìn)展。越來越多的證據(jù)表明腎小球硬化與動脈粥樣硬化有相似的病理改變和病理生理機(jī)制，血管動脈粥樣硬化實質(zhì)是一個慢性炎癥的過程，而炎性反應(yīng)又是造成腎臟組織損傷的主要機(jī)制，因此炎癥因子與脂質(zhì)參與動脈粥樣硬化和腎小球硬化的形成，炎癥加重脂質(zhì)失調(diào)導(dǎo)致的腎損害是腎小球硬化和腎病進(jìn)展的重要因素，研究炎癥如何在細(xì)胞水平影響膽固醇穩(wěn)態(tài)是明確脂質(zhì)介導(dǎo)的動脈粥樣硬化和腎臟損害的關(guān)鍵。

細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)涉及脂質(zhì)的攝取、合成、外流代謝多方面的平衡，很多因素影響動脈粥樣硬化部位細(xì)胞對脂質(zhì)的攝取和降解，受體表達(dá)變化是可能的調(diào)控機(jī)制。ABCA1在膽固醇逆轉(zhuǎn)運和高密度脂蛋白膽固醇生成的起始步驟中起重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，人類動脈粥樣硬化區(qū)的ABCA1基因表達(dá)明顯上調(diào)，且病例組巨噬細(xì)胞來源的泡沫細(xì)胞中ABCA1表達(dá)是對照組的2倍，表明ABCA1可使巨噬細(xì)胞清除過多的膽固醇，增加循環(huán)HDL-C水平，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的作用[2]。腎小球硬化的特征是巨噬細(xì)胞和系膜細(xì)胞轉(zhuǎn)化來的泡沫細(xì)胞的存在，炎癥因子可以降低人腎小球系膜細(xì)胞ABCA1表達(dá)，抑制ABCA1途徑介導(dǎo)的脂質(zhì)排出[3]，從而大大超過其清除能力而使之最終變成泡沫細(xì)胞。本研究發(fā)現(xiàn)IL-1β降低系膜細(xì)胞ABCA1蛋白和ABCA1 mRNA表達(dá)，因此炎癥因子可以通過抑制ABCA1的表達(dá)降低脂質(zhì)的排出，從而導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)膽固醇的失衡使其變成泡沫細(xì)胞，加重腎小球硬化和腎病的進(jìn)展。

由于ABCA1在膽固醇逆向轉(zhuǎn)運中發(fā)揮重要作用，因此調(diào)控其基因的表達(dá)對于膽固醇的動態(tài)平衡尤為關(guān)鍵。ABCA1基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)受多種因素影響，其中以核激素受體超家族的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)最為重要。PPAR-γ是一類由配體激活的核轉(zhuǎn)錄因子，屬于Ⅱ型核受體超家族成員，是糖代謝和脂肪生成的主要調(diào)節(jié)者，在改善血脂、減輕炎性反應(yīng)、提高胰島素敏感性等多種病理過程中發(fā)揮重要作用，PPAR-γ活性失調(diào)與多種疾病如肥胖、糖脂代謝、炎性反應(yīng)、血管疾病有關(guān)[4]。PPAR-γ激動劑對肥胖人群具有抗動脈粥樣硬化作用[5]，在2型糖尿病和肥胖小鼠模型中，PPAR-γ部分激動劑替米沙坦，改善糖尿病血管病變[6]。研究表明，PPAR-γ超表達(dá)可以增強(qiáng)巨噬細(xì)胞膽固醇流出，從而減弱ApoE缺陷的大鼠的動脈粥樣硬化[7]。

大量研究表明，PPAR-γ可通過調(diào)控ABCA1的表達(dá)，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的保護(hù)作用。在動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中，PPAR-γ通過核受體超家族成員肝X受體d（LXRα）上調(diào)ABCA1的表達(dá)，介導(dǎo)膽固醇外流和脂質(zhì)轉(zhuǎn)運的基因的表達(dá)，促進(jìn)膽固醇流出及血漿轉(zhuǎn)運，降低細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量，對細(xì)胞內(nèi)膽固醇的調(diào)節(jié)發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，因此PPAR-γ-LXRα-ABC通路在巨噬細(xì)胞膽固醇流出機(jī)制中具有重要作用[8]。Ozasa等[9]通過給予2型糖尿病患者服用PPAR-γ激動劑吡格列酮，并在離體條件下血清培養(yǎng)人巨噬細(xì)胞加入PPAR-γ激動劑吡格列酮，在體內(nèi)研究和離體實驗發(fā)現(xiàn)ABCA1的表達(dá)增多，最后巨噬細(xì)胞通過ABCA1蛋白將胞內(nèi)多余的膽固醇轉(zhuǎn)移至胞外。而抑制PPAR-γ表達(dá)可以促進(jìn)動脈粥樣硬化。Hamblin等[10]研究發(fā)現(xiàn)，在PPAR-γ基因表達(dá)缺失的小鼠，血管內(nèi)皮細(xì)胞VCAM-1的表達(dá)升高，動脈粥樣硬化等相關(guān)血管病變發(fā)生率增加，提示PPAR-γ的缺失可能與動脈粥樣硬化發(fā)生有著重要聯(lián)系。

PPAR-γ-肝臟X受體（LXRα）-ABC通路不但在巨噬細(xì)胞膽固醇流出機(jī)制中具有重要作用，能夠抑制動脈粥樣硬化斑塊的形成，還參與腎臟的脂質(zhì)代謝。對低密度脂蛋白受體基因敲除糖尿病小鼠動脈的研究表明[11]，過氧化物酶體增殖物激活受體α/γ雙激動劑可以減輕小鼠脂質(zhì)沉積和炎性反應(yīng)，增加斑塊內(nèi)膠原和α-SMA含量，有利于粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性。研究表明肝臟X受體（LXR-α）激動劑能提高兔系膜細(xì)胞ABCA1表達(dá)，并促進(jìn)其介導(dǎo)的膽固醇流出，說明LXR-α通過ABCA1途徑參與調(diào)節(jié)腎臟脂質(zhì)的平衡[12]。對慢性腎功能不全患者的研究發(fā)現(xiàn)，患者巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量增加與ABCA1表達(dá)下調(diào)有關(guān)[13]。

PPAR-γ主要通過抑制炎性反應(yīng)來實現(xiàn)對動脈粥樣硬化的抑制作用，動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展過程中產(chǎn)生大量的炎癥因子，人及動物粥樣斑塊炎性部位有PPAR-γ高度表達(dá)，活化的PPAR-γ通過限制巨噬細(xì)胞譜系促炎性反應(yīng)，在炎性反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵調(diào)節(jié)器的作用，而PPAR-γ在內(nèi)皮細(xì)胞的缺失可促進(jìn)動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。PPAR-γ受體激動劑羅格列酮能減少巨噬細(xì)胞在血管壁的聚集，并抑制炎性反應(yīng)和動脈粥樣硬化斑塊的形成。以上研究表明，激活的PPAR-γ在調(diào)節(jié)內(nèi)皮功能、維持內(nèi)皮結(jié)構(gòu)完整、抑制動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的過程中發(fā)揮重要作用，有望成為治療動脈粥樣硬化的新靶點。

PPAR-γ的配體主要分為天然配體前列腺素J2（PGJ2）及其代謝產(chǎn)物，其中15d-PGJ2是PPAR-γ最有效的天然配體，PPAR-γ激動劑可改善肥胖導(dǎo)致的腎損傷[14]，PPAR-γ表達(dá)增加還可以減輕氧化損傷介導(dǎo)的腎臟衰老[15-18]。本研究發(fā)現(xiàn)PPAR-γ的激動劑天然配體15d-PGJ2，能夠劑量依賴性改善IL-1β抑制的ABCA1 mRNA和蛋白表達(dá)，抑制炎癥導(dǎo)致的脂質(zhì)失調(diào)，在減緩炎癥加重的脂質(zhì)腎損害中發(fā)揮關(guān)鍵的作用，推測可能延緩腎小球硬化和腎臟病進(jìn)展。原發(fā)和繼發(fā)性腎小球腎炎中的炎性反應(yīng)是腎臟組織損傷的主要機(jī)制之一，此研究結(jié)果探討PPARγ激動劑對炎癥在細(xì)胞水平所致脂質(zhì)失衡的保護(hù)作用，可望為防治腎臟病進(jìn)展尋找可能的干預(yù)措施，為PPARγ激動劑應(yīng)用于腎臟疾病提供了一定的理論依據(jù)。

[1]Jiang Z，Zhou R，Xu C，et al.Genetic valiation of the ATP-binding cassette transporter A1 and susceptibility to coronary heart disease[J].Mol Genet Metab，2011，103（1）：81-88.

[2]Pelham CJ，Keen HL，Lentz SR，et al.Dominant negative PPARv promotes atheroselerosis，vascular dysfunction，and hypertension through distinct effects in endothelium and vascular muscle[J].Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol，2013，304：R690-R701.

[3]陳昱楊，陳曜，趙蕾，等.炎癥干擾PPARγ-LXRα-ABCA1途徑介導(dǎo)的腎小球系膜細(xì)胞膽固醇外流[J].中國病理生理雜志，2010，26（12）：2400-2404.

[4]Wang N，Yin R，Liu Y，et al.Role of peroxisome proliferatoractivated receptor-gamma in atherosclerosis：an update[J]. Circ J，2011，75（2）：528-535.

[5]Lim S，Despres JP，Koh KK.Prevention of atherosclerosis in overweight/obese patients in need of novel multi-targeted approaches[J].Circ J，2011，75（5）：1019-1027.

[6]Toyama K，Nakamura T，Kataoka K，et al.Telmisartan protects against diabetic vascular complications in a mouse model of obesity and type 2 diabetes，partially through peroxisome proliferator activated receptor-gamma-dependent activity[J].Biochem Biophys Res Commun，2011，410（10）：508-513.

[7]Hu Q，Zhang XJ，Liu CX，etal.Ppargamma1-induced caveolin-1 enhances cholesterolefflux and attenuates atherosclerosisin apolipoprotein E-deficientmice[J].JVasc Res，2010，47：69-79.

[8]張雪，吳崇明，郭鵬.改善膽固醇流出作用靶分子及相關(guān)藥物研究進(jìn)展[J].國際藥學(xué)研究雜志，2014，1（41）：94-98.

[9]Ozasa H，Ayaori M，Iizuka M，et al.Pioglitazone enhances cholesterol efflux from macrophagesby increasing ABCA1/ ABCG1 expressions via PPAR gamma/LX Ralpha pathway：findings from in vitro and ex vivo studies[J].Atherosclerosis，2011，219：141-150.

[10]Hamblin M，Chang L，Zhang H，etal.Vascularsmooth muscle cell peroxisome proliferator-activated receptor-gamma mediates pioglitazone-reduced vascular lesion formation[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol，2011，31：352-359.

[11]張步春，李憲凱，車文良，等.過氧化物酶體增殖物激活受體α/γ雙激動劑對低密度脂蛋白受體基因敲除糖尿病小鼠動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的影響[J].中華心血管病雜志，2013，2（41）：143-149.

[12]Jing Wu，Yahua Zhang，Nanping Wang，et al.Liver X receptor-alpha mediates cholesterol efflux in glomerular mesangialcells[J].Am J Physiol Renal Physiol，2004，287（5）：F886-F895.

[13]周家軍，甘華，劉彩欣，等，慢性腎功能不全通過下調(diào)ABCA1表達(dá)影響巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2013，6：543-546.

[14]李穎，夏天，王荔，等.過氧化物酶體增殖物激活受體γ激動劑對肥胖小鼠血清脂聯(lián)素、尿蛋白排泄及腎臟病理的作用[J].中華腎臟病雜志，2014，30（2）：128-133.

[15]葉婷，寧勇.過氧化物酶增殖物激活受體-γ和核因子E2相關(guān)因子-2在腎臟衰老中的作用[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2014，11（30）：4-7.

[16]寧勇，何泳，馬祖福，等.替米沙坦對5/6腎切除腎衰竭大鼠的腎臟保護(hù)作用及其機(jī)制研究[J].中國醫(yī)藥，2012，7（4）：385-388.

[17]李勇，孫帥奇，李普陽，等.過氧化物酶體增殖物激活受體γ激動劑治療促腎上腺皮質(zhì)激素型垂體腺瘤的實驗研究[J].中華腦科疾病與康復(fù)雜志：電子版，2013，3（1）：15-19.

Impact of peroxisome proliferator activated receptor-γagonist on the expression of ATP-binding cassette transporter A1 in human mesangial cell treated by interleukin-1β

LIU Hua
Department of Nephrology,Xuanwu Hospital,Capital Medical University,Beijing 100053,China

ObjectiveTo observe the protective effect of peroxisome proliferator activated receptor-γ(PPAR-γ)agonist for human mesangial cell(HMC)by the rgulation of ATP-binding cassette transporter A1(ABCA1)when stimulated by interleukin-1β(IL-1β)from progression of kidney diseases.MethodsHMC cultured for 24 hours were randomly divided into 5 groups:blank group:normal cultured cells;control group:cultured cells stimulated by dose of 5 ng/mL IL-1β;study group:cultured cells stimulated separately by 5 ng/mL IL-1β+2.5μmol/L 15d-PGJ2,5 ng/mL IL-1β+5 μmol/L 15d-PGJ2,5 ng/mL IL-β+10μmol/L 15d-PGJ2,the mRNA levels of ABCA1 were examined using Real-time PCR.Similarly,HMC cultured for 24 hours were randomly divided into 4 groups:blank group:normal cultured cells; control group:cultured cells stimulated by dose of 5 ng/mL IL-1β;study group:cultured cells stimulated separately by dose of 5 ng/mL IL-1β+5μmol/L 15d-PGJ2,5 ng/mL IL-β+10μmol/L 15d-PGJ2,the protein levels of ABCA1 were detected by Western blot.ResultsThe expression of ABCA1 mRNA and protein of HMC can be reduced by IL-1β while the inhibition expression could be increased by co-cultured with 15d-PGJ2 in a dose-dependent manner.When co-cultured with 2.5,5,10μmol/L dose of 15d-PGJ2,the expression of ABCA1 mRNA of HMC could be increased 1.34,2.15,2.88 times compared with the control group,while the expression of ABCA1 protein could be increased 1.16,1.54 times respectively when co-cultured with 5,10μmol/L dose of 15d-PGJ2,compared with the control group.ConclusionThe decreasing expression of ABCA1 stimulated by IL-1βcan be offset by 15d-PGJ2 in a dose-dependent manner which mean that PPAR-γagonist has a protective effect of HMC for dyslipidemia enhanced by inflammatory cytokines.

Peroxisome proliferator activated receptor-γagonist;Human mesangial cell;Interleukin-1β;ATP-binding cassette transporter A1

R692

A

1673-7210（2015）07（b）-0007-05

2015-03-30本文編輯：任念）

北京市科委資助項目（SCW2009-07）。