于萌

摘 要：目的 探討Ph染色體在急性淋巴細胞白血病中的診斷意義。方法 選取2013年4月～2014年4月由我院血液科收治的24例成人初治急性淋巴細胞白血病患者和10例慢粒急淋變患者為研究對象。使用改良的染色體顯帶技術(shù)對患者的Ph染色體進行檢測，回顧性分析34例患者染色體核型檢測過程和檢測結(jié)果。結(jié)果 使用改良的染色體顯帶技術(shù)對34例急性淋巴細胞白血病患者進行Ph染色體的檢測，檢測出25例患者的ph染色體呈陽性，總檢出率為73.5%，其中初治急性淋巴細胞白血病患者16例，檢出率為66.7%，低于慢粒急淋變患者90%的檢出率，兩者在比較上，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 對急性淋巴細胞白血病患者采用染色體顯帶技術(shù)對Ph染色體進行監(jiān)測，其檢出率高，對ph染色體有一定的靈敏度，可作為臨床急性淋巴細胞白血病的診斷標準。

關(guān)鍵詞：ph染色體 急性淋巴細胞白血病 診斷

中圖分類號：R733.71 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2014）12（a）-0210-01

近年來，Ph陽性急性淋巴細胞白血病在全世界范圍內(nèi)均有報道，特異性Ph染色體為急性淋巴細胞白血病遺傳學(xué)特點，在幼兒階段，急性淋巴細胞白血病出現(xiàn)的概率大約為3%～5%，伴隨著年齡的增長，成年人發(fā)病的概率就達到了20%～30%，在50歲以后，其概率高達50%以上。Ph陽性急性淋巴細胞白血病被全世界一致認為是由多種基因聯(lián)合參與，并共同作用所致。因此，為探索Ph染色體在急性淋巴細胞白血病中的診斷意義，我院對34例急性淋巴細胞白血病患者的Ph染色體進行染色體顯帶技術(shù)檢測，旨在為今后的臨床診斷提供參考資料，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年4月～2014年4月由我院血液科收治的24例成人初治急性淋巴細胞白血?。ˋLL）患者和10例慢粒急淋變（CML-BP）患者為研究對象，其中男性患者19例，女性患者15例；年齡17～58歲，平均年齡（31.5±6.6）歲；急性白血病的FAB分型為L1型20例，L2型14例；其中處于緩解期的患者共15例。

1.2 病例選取標準

所有入選患者均符合全國衛(wèi)生組織對急性淋巴細胞白血病的診斷標準，排除全身其他部位的惡性腫瘤、急性傳染病等患者。

1.3 檢測方法

對所有患者的Ph染色體使用改良的染色體顯帶技術(shù)進行檢測，檢測后進行染色體核型分析。具體實施步驟如下所示。

1.3.1 標本的采集

在無菌的條件下，抽取患者的骨髓或者額外周血后，加入肝素抗凝。采用短期培養(yǎng)法制備樣本中的染色體，時長為24 h。

1.3.2 制作標本

在培養(yǎng)結(jié)束前的2.5 h左右，使用7號針頭向樣本中注入2～3滴20 μg/mL的秋水仙堿后，繼續(xù)進行培養(yǎng)。將骨髓樣本離心處理10 min，去掉上清液，加入7 mL、0.075 mol/L的kcl溶液，溶液已事先預(yù)溫于37 ℃水浴中，吹打均勻后，水浴25 min左右，溫度為37 ℃；加入預(yù)溫至37 ℃的冰醋酸固定液，吹打均勻；第一次固定時，去掉上清液，加入7 mL的固定液并離心10 min；第二次和第三次均固定30 min。去掉上清液后，將沉淀使用固定液配制成細胞懸液后，滴片。每個標本制片10張，置于室溫環(huán)境中，平放于濾紙上。

1.3.3 熱處理

取三只同容量的立式染缸，加入100 mL的earle鹽溶液，加蓋水浴至87.5 ℃，每個染缸放入4張制片。整體孵育1 h后，隔10 min取出2張，并將制片置于流水下沖洗，孵育時長為60～120 min，不得超過150 min。用姬母薩液對制片進行染色，持續(xù)10～15 min后水洗，晾干。放置普通光鏡下進行觀察，分析中期分裂細胞至少20個。

2 結(jié)果

2.1 急性淋巴細胞白血病患者的核型分析結(jié)果

34例ALL患者中，共檢測出Ph染色體陽性患者25例，總檢出率為73.5%。其中初治ALL患者有16例（檢測結(jié)果包括Ph染色體正常核型嵌合體10例、單純Ph染色體核型3例和其他染色體數(shù)目異常3例），檢出率為66.7%；CML-BP患者9例，檢出率為90%，全為Ph染色體陽性，Ph染色體在CML-BP患者中的檢出率明顯高于初治ALL患者。見表1。

3 結(jié)論

大多數(shù)急性淋巴細胞白血病患者的臨床表現(xiàn)特點為血WBC計數(shù)高、發(fā)病年紀較大、累計中樞神經(jīng)系統(tǒng)、并伴有肝脾淋巴結(jié)腫大等。FAB分型多以L2為主，免疫表型主要為CD10+的B細胞，并且其緩解率相較Ph染色體陰性患者來說，明顯較低，緩解期短，早期就容易復(fù)發(fā)。急性淋巴細胞白血病發(fā)病原因是由于Ph染色體易位，而Ph染色體易位是指9號和22號染色體發(fā)生平衡易位，導(dǎo)致位于22號染色體上的BCR基因和來自9號染色體上的C-ABL元癌基因發(fā)生異常融合而產(chǎn)生BCR/ABL融合基因。

檢測Ph染色體需要很全面的手段，包括細胞遺傳學(xué)、逆轉(zhuǎn)錄—多聚酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）分析、southerm印記雜交以及FLASH方法。使用逆轉(zhuǎn)錄方法，在成人普通ALL中發(fā)現(xiàn)有BCR/ABL融合的mRNA的人群占比55%。通過其他的研究發(fā)現(xiàn)分子生物學(xué)的實驗方法比傳統(tǒng)細胞遺傳學(xué)實驗方法有更高的陽性率，因為在傳統(tǒng)的細胞遺傳學(xué)實驗方法分析中的正常細胞中也包含BCR/ABL基因的重組。

綜上所述，改良的染色體顯帶技術(shù)對Ph染色體有一定的靈敏性，其對初治急性淋巴細胞白血病的陽性率相比慢粒急淋變患者要高，具有一定的臨床運用價值。

參考文獻

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