歐陽小予 陳建平 楊 陽 劉桑燕

三明市第二醫(yī)院消化內(nèi)科，福建省永安市 366000

非酒精性脂肪性肝病患者血清VEGF水平與IL－6、hs－CRP的相關(guān)性分析

歐陽小予 陳建平 楊 陽 劉桑燕

三明市第二醫(yī)院消化內(nèi)科，福建省永安市 366000

目的：探討非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）患者血清血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）與白介素－6（IL－6）、高敏C反應(yīng)蛋白（hs－CRP）、白細胞計數(shù)（WBC）的相關(guān)性。方法：選取2013年1月－2015年1月在我院明確診斷NAFLD患者122例，同時選取同期門診健康體檢者108例作為研究對象，采用全自動生化檢測儀檢測相關(guān)生化指標(biāo)，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測血清中VEGF、IL－6水平，免疫比濁法檢測血清hs－CRP水平。結(jié)果：與對照組比較，脂肪肝組在臀圍、腰圍、體質(zhì)指數(shù)、收縮壓、舒張壓、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶、甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白、血糖、尿酸、同型半胱氨酸、WBC、hs－CRP、VEGF、IL－6等臨床指標(biāo)均明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.01）；進一步Pearson相關(guān)分析提示脂肪肝組血清VEGF水平與IL－6、hs－CRP、WBC均呈正相關(guān)（r分別為0.602、0.698、0.713，均P＜0.01）。結(jié)論：NAFLD患者血清VEGF水平明顯升高，其水平與IL－6、hs－CRP、WBC等均呈正相關(guān)，細胞因子、炎癥因子參與了NAFLD的發(fā)生發(fā)展。

非酒精性脂肪肝 血管內(nèi)皮生長因子 白介素－6 高敏C反應(yīng)蛋白

非酒精性脂肪性肝病（Nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）是以低濃度全身炎癥為特征的炎癥紊亂狀態(tài)，其存在明顯血管內(nèi)皮功能障礙，與動脈粥樣硬化的發(fā)生密切相關(guān)[1，2］。研究發(fā)現(xiàn)：多種細胞因子影響血管的生長，其中血管內(nèi)皮生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）作為主要血管生長因子，在血管中發(fā)揮主要作用，其可反映血管內(nèi)皮損傷的程度[3］。另有大量研究發(fā)現(xiàn)：NAFLD患者血清相關(guān)炎癥因子明顯升高[4～6］。本研究旨在探討NAFLD患者血清VEGF水平及其與相關(guān)炎癥因子的相關(guān)性，為臨床上治療NAFLD提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年1月－2015年1月在我院消化內(nèi)科住院，經(jīng)肝臟彩超檢查明確診斷為NAFLD患者122例（脂肪肝組）及同時期門診健康體檢者108例（對照組）。脂肪肝組患者中，男72例，女50例，年齡32～71歲，平均年齡（57.43± 11.86）歲。對照組中，男64例，女44例，年齡28～67歲，平均年齡（59.58±13.23）歲。兩組患者在年齡、性別方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。納入及排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：NAFLD的診斷參照《NAFLD診療指南（2010年修訂版）》[7］，且肝臟彩超符合彌漫性脂肪肝的診斷標(biāo)準(zhǔn)，同時無飲酒史或飲酒折合乙醇量＜140g周（女性＜70g周）；（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：除外酒精性肝炎、病毒性肝炎、藥物性肝病、全胃腸外營養(yǎng)、肝豆?fàn)詈俗冃?、自身免疫性肝病等可?dǎo)致脂肪肝的特定疾病。

1.2 材料與試劑 VEGF、IL－6酶聯(lián)免疫吸附實驗試劑盒（由武漢博士德生物工程有限公司提供）、hs－CRP免疫比濁試劑盒（美國RB公司）、PBS緩沖液（北京索萊寶生物科技有限公司）、無菌蒸餾水。

1.3 儀器與設(shè)備 酶標(biāo)儀（美國Bio－Rad公司）、恒溫水浴箱（上海實驗儀器公司）、全自動生化分析儀OLYMPUS AU2700（日本日立公司）、低溫離心機（Thermo公司）、量筒、微量移液器（1ml、200μl、10μl）。

1.4 實驗方法

1.4.1 血壓測量。所有入選對象均經(jīng)靜息30min后由專人采用符合計量標(biāo)準(zhǔn)的臺式水銀柱血壓計測量右側(cè)肱動脈血壓，連續(xù)測量3次，每次間隔至少2min，取3次平均值為個體值。

1.4.2 身高、體質(zhì)量、腰圍（WC）、臀圍（HC）測量。所有受試者均脫鞋、免冠、僅穿單薄衣物測量身高、體重，計算體質(zhì)量指數(shù)（BMI），BMI＝體重身高2（kgm2）。WC是沿腋中線肋骨下緣與髂嵴連線中點的水平周徑。HC是臀部最大周徑。

1.4.3 生化指標(biāo)測量。所有受試者均禁食12h后抽取清晨空腹肘靜脈血液標(biāo)本，采用全自動生化分析儀測定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸轉(zhuǎn)移酶（AST）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL－C）、高密度脂蛋白（HDL－C）、血糖（GLU）、尿酸（UA）、白細胞（WBC）。

1.4.4 血清VEGF、IL－6、hs－CRP水平測定。所有研究對象均留取空腹肘靜脈血5ml，置于含依地酸鈉（EDTA）抗凝管中，靜置30min，4℃，3 000rmin，離心20min，留取血清標(biāo)本放置－80℃冰箱保存。采用酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測血清VEGF、IL－6水平，免疫比濁法檢測血清hs－CRP水平，試劑盒由武漢博士德生物工程有限公司提供，測定方法嚴(yán)格按照說明書進行操作。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行處理，計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料采用卡方檢驗，變量間的關(guān)聯(lián)分析采用Pearson相關(guān)分析，P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組各臨床指標(biāo)比較 與對照組比較，脂肪肝組患者在HC、WC、BMI、SBP、DBP、ALT、AST、TG、TC、LDL－C、GLU、UA、Hcy均明顯升高，HDL－C明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.01）。而在ALB、Scr、BUN等方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1兩組各臨床指標(biāo)對比（±s）

表1兩組各臨床指標(biāo)對比（±s）

注：1mmHg＝0.133kPa。

指標(biāo)對照組脂肪肝組tχ2值P值0.01 WC（cm）77.56±11.45 94.98±10.66－11.897＜0.01 BMI 23.16±2.63 27.70±4.05－5.724＜0.01 SBP（mmHg）120.08±9.33 129.14±15.02－5.544＜0.01 DBP（mmHg）74.37±7.76 80.14±9.52－5.058＜0.01 ALB（gL）44.42±2.62 44.15±2.68 0.789 0.431 ALT（UL）23.06±17.93 56.77±24.49－3.481＜0.01 AST（UL）18.24±9.13 39.18±28.79－7.614＜0.01 TG（mmolL）1.39±0.98 2.20±1.05－6.057＜0.01 TC（mmolL）4.30±1.07 5.22±1.44－5.517＜0.01 LDL－C（mmolL）2.83±0.80 3.08±0.75－2.445 0.015 HDL－C（mmolL）1.31±0.36 1.01±0.34－6.372＜0.01 Scr（μmolL）72.88±19.55 73.57±11.33－0.319 0.750 BUN（mmolL）4.64±1.46 4.42±0.97 1.287 0.200 GLU（mmolL）4.14±1.07 4.78±2.09－2.802 0.006 Hcy（μmolL）9.83±2.12 12.55±4.03－6.509＜0.01 UA（mmolL）288.26±88.53 344.64±82.18－4.985＜HC（cm）89.27±6.74 102.66±8.49－13.307＜0.01

2.2 兩組血清VEGF、IL－6、hs－CRP、WBC水平比較 與對照組比較，脂肪肝組血清VEGF、IL－6、hs－CRP、WBC濃度均明顯升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.01）。見表2。

表2 兩組血清VEGF、IL－6、hs－CRP水平比較（±s）

表2 兩組血清VEGF、IL－6、hs－CRP水平比較（±s）

指標(biāo)對照組脂肪肝組t值P值0.01 0.01 IL－6（pgml）44.40±2.60 68.12±5.93－10.376＜0.01 WBC（×109L）4.59±0.50 5.44±1.13－7.488＜0.01 hs－CRP（mgL）3.35±1.19 5.69±1.68－12.266＜VEGF（ngL）76.29±4.44 123.08±22.34－22.236＜

2.3 脂肪肝組中VEGF與IL－6、hs－CRP、WBC的相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示：脂肪肝組血清VEGF水平與血清IL－6、hs－CRP、WBC水平均呈正相關(guān)（r分別為0.602、0.698、0.713，均P＜0.01）。

3 討論

NAFLD是指除外酒精和其他明確的肝損害因素所致的，以彌漫性肝細胞大泡性脂肪變?yōu)橹饕卣鞯呐R床病理綜合征，其已成為慢性肝病的第二位原因。全球流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示：NAFLD的患病率為17%～33%，肥胖及2型糖尿病患者中可達75%[8］。目前有研究發(fā)現(xiàn)其是以低濃度全身炎癥為特征的炎癥紊亂狀態(tài)，存在明顯血管內(nèi)皮功能障礙，如得不到有效治療，將最終發(fā)生動脈粥樣硬化。因此，尋找能夠逆轉(zhuǎn)或延緩NAFLD的因子或藥物，對于臨床上治療進展的NAFLD具有重要意義。

VEGF可由血管內(nèi)皮細胞、巨噬細胞和平滑肌細胞等多種細胞產(chǎn)生，其在正常血管中不表達。而有研究證明：VEGF與血管內(nèi)皮損傷密切相關(guān)，在急性冠脈綜合征、動脈硬化及血管相關(guān)疾病中高表達[3］。機體微炎癥持續(xù)狀態(tài)，可引起血管內(nèi)皮細胞損傷、血管通透性增加，炎癥因子可刺激血管內(nèi)皮細胞及平滑肌細胞分泌VEGF，VEGF表達上調(diào)引起血管內(nèi)皮細胞及平滑肌細胞增殖，引起血管動脈粥樣硬化，動脈粥樣硬化進一步加重了機體的微炎癥狀態(tài)。

炎性因子被認為在NAFLD的發(fā)生、發(fā)展中起著關(guān)鍵作用[9］，其常伴隨腸源性內(nèi)毒素血癥的發(fā)生，而腸源性內(nèi)毒素血癥能夠激活NF－κB信號傳導(dǎo)系統(tǒng)，引起炎癥介質(zhì)TNF－α、IL－6的大量釋放，TNF－α、IL－6能促進炎癥反應(yīng)，刺激炎癥指標(biāo)hs－CRP的產(chǎn)生[10］。增加的TNF－α可使NO產(chǎn)生下降。同時NAFLD常常伴有胰島素抵抗，而胰島素抵抗可增強內(nèi)皮細胞產(chǎn)生和釋放ET－1，ET－1與NO的比例失衡，最終引起血管內(nèi)皮功能障礙而促使動脈粥樣硬化發(fā)生[11］。本研究發(fā)現(xiàn)：與對照組比較，NAFLD患者血清IL－6、hs－CRP、WBC等反應(yīng)炎癥的指標(biāo)均明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.01）。這表明NAFLD患者存在明顯的微炎癥狀態(tài)。同時采用酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測NAFLD患者血清VEGF水平結(jié)果顯示：與對照組比較，NAFLD患者血清VEGF水平明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），這說明NAFLD患者血管內(nèi)皮存在明顯的損傷。進一步單因素相關(guān)分析結(jié)果提示：NAFLD患者血清VEGF水平與血清IL－6、hs－CRP、WBC均呈明顯正相關(guān)（r分別為0.602、0.698、0.713，均P＜0.01），這進一步說明NAFLD患者存在明顯內(nèi)皮功能損害，且其損害程度與機體微炎癥程度呈正相關(guān)。

綜上所述，NAFLD患者血清IL－6、hs－CRP、WBC、VEGF等指標(biāo)均明顯升高，血清VEGF與IL－6、hs－CRP、WBC均呈明顯正相關(guān)，提示炎癥因子、細胞因子參與了NAFLD的發(fā)生、發(fā)展。

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（本文通訊作者：劉桑燕）

（編輯落落）

Correlation between Vascular Endothelial Growth Factor and Interleukin－6，High－sensitivity C－reactive Protein in Patients with Nonalcoholic Fatty Liver Disease

OUYANG Xiaoyu，CHEN Jianping，YANG Yang，et al.Department of Digestive Internal Medicine，the Second Hospital of Sanming，Yong’an City，F(xiàn)ujian Province 366000

Objective：To investigate the correlation between vascular endothelial growth factor and interleukin－6，highsensitivity C－reactive protein，white blood cells count in patients with Nonalcoholic fatty liver disease.Methods：Select the 122patients with nonalcoholic fatty liver disease（fatty liver group），108people with no fatty liver disease（normal control group）were chosen for the study.The related biochemical indices were detected with automatic biochemical analyzer.The levels of serum VEGF and IL－6were measured by Enzyme－linked immunosorbent experiment.The levels of serum hs－CRP were measured by Immune turbidimetry.Results：The comparison of hip circumference（HC），waist circumference（WC），body mass index（BMI），systolic blood pressure（SBP），diastolic blood pressure（DBP），alanine aminotransferase（ALT），aspartate aminotransferase（AST），total cholesterol（TG），triglycerides（TC），low density lipoprotein（LDL－C），glucose（GLU），uric acid（UA），homocysteine（Hcy），white blood cells count（WBC），high－sensitivity C－reactive protein（hs－CRP），vascular endothelial growth factor（VEGF），interleukin－6（IL－6）levels between fatty liver group and normal control group were higher in the fatty liver group than those of normal control group，the difference were significant（all P＜0.01）.Pearson correlation analysis show that serum VEGF levels and IL－6，hs－CRP，WBC were positively correlated in patients with nonalcoholic fatty liver disease（r＝0.602，0.698，0.713，all P＜0.01）.Conclusion：The levels of VEGF were significantly increased in nonalcoholic fatty liver disease，it was positively correlated with IL－6，hs－CRP，WBC，suggesting that cytokines and inflammatory cytokines might play an important role in the pathogenesis of nonalcoholic fatty liver disease.

Nonalcoholic fatty liver disease，Vascular endothelial growth factor，Interleukin－6，High－sensitivity C－reactive protein

R575.5

A

1001－7585（2015）19－2589－03

2015－05－25