秦語(yǔ)欣， 譚 鵬， 國(guó) 偉， 費(fèi)淑琳， 吳月嬌， 李 飛

（北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京100029）

米醋對(duì)制川烏生物堿的影響

秦語(yǔ)欣， 譚 鵬， 國(guó) 偉， 費(fèi)淑琳， 吳月嬌， 李 飛*

（北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京100029）

目的分析輔料米醋的用量和蒸煮方式對(duì)制川烏生物堿類(lèi)成分的影響。方法高效液相色譜法測(cè)定醋制川烏中的新烏頭堿、次烏頭堿、烏頭堿、苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿等6種生物堿的含有量。結(jié)果相比藥典法制川烏，醋蒸和醋煮制川烏在一定程度上促進(jìn)雙酯型生物堿的一級(jí)水解，抑制單酯型生物堿的二級(jí)水解，從而提高其單酯型生物堿含有量。結(jié)論醋制川烏可提高制川烏單酯型生物堿含有量，以10%醋蒸制川烏最為適宜。

制川烏；醋；炮制；雙酯型生物堿；單酯型生物堿

川烏為毛茛科植物烏頭Aconitum carmichaelii Debx.的干燥母根，味辛、苦，性熱，有大毒，歸心、肝、脾經(jīng)，具有祛風(fēng)除濕、溫經(jīng)止痛功效［1］。臨床應(yīng)用中多使用炮制減毒后的制川烏，其減毒機(jī)理為川烏中劇毒成分烏頭堿等雙酯型生物堿經(jīng)加熱炮制后水解為苯甲酰烏頭原堿等單酯型生物堿，毒性降低為原來(lái)的1/200［2-4］。歷代加輔料炮制川烏記載頗多，其中不乏酸性條件進(jìn)行炮制，如 《證類(lèi)本草》中的二虎丸，《普濟(jì)方》中的野狼毒丸，其中川烏的炮制方法分別為醋蒸、醋炒［5-6］?，F(xiàn)代藥理研究表明，醋制川烏的鎮(zhèn)痛效果優(yōu)于藥典法制川烏［7］。目前關(guān)于川烏藥材及制川烏生物堿類(lèi)成分的研究較多［8-11］，但尚未見(jiàn)酸性輔料醋對(duì)制川烏生物堿類(lèi)成分及成品質(zhì)量影響的報(bào)道。本研究擬采用不同量的輔料醋炮制川烏，通過(guò)檢測(cè)炮制前后6種酯型生物堿的含有量變化，探討輔料醋對(duì)制川烏成品質(zhì)量的影響。

1 材料

1.1 藥物 川烏藥材于2013年9月購(gòu)于四川江油中壩附子科技發(fā)展有限公司，經(jīng)中國(guó)食品藥品檢定研究院中藥所張繼主任藥師鑒定為毛茛科植物烏頭Aconitum carmichaeli Debx.的干燥母根。

1.2 炮制輔料用醋 純糧米醋，總酸 （以乙酸計(jì)）≥3.5 g/100 mL（天津市翠波食品有限責(zé)任公司）。

1.3 儀器與試劑

1.3.1 儀器 Waters液相色譜儀（1525色譜泵、紫外檢測(cè)器，美國(guó)Waters公司）；Agilent Extend-C18色譜柱（美國(guó)Agilent公司）；Sartorius BS210S（Max 210 g，d=0.1 mg）天平（德國(guó)賽多利斯公司）；SB25-12DTDN超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）；RE旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 （上海亞榮生化儀器廠）；DHG-9070A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（常州諾基儀器有限公司）。

1.3.2 試劑 烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿和苯甲酰新烏頭原堿對(duì)照品 （購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)分別為110720-201111、110799-201106、110798-201106、111794-201102、111796-201002、111795-201002）；乙腈和四氫呋喃為色譜純 （德國(guó)Merck公司）；純凈水 （杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司）。

2 方法

2.1 炮制品的制備

2.1.1 生川烏 取原藥材，除去雜質(zhì)，得生川烏，備用。

2.1.2 制川烏 按 《中國(guó)藥典》2010年版制川烏項(xiàng)下煮法及蒸法分別炮制［1］。取生川烏，用水浸泡至內(nèi)無(wú)干心，取出加水煮沸4～6 h或蒸6～8 h，至取大個(gè)及實(shí)心者切開(kāi)內(nèi)無(wú)白心，口嘗微有麻舌感時(shí)，取出，晾至六成干，切片，干燥，得制川烏。

2.1.3 醋制川烏 參照上述制川烏的方法炮制。將其中浸泡用水以不同用量的醋水替換，其余操作同上。米醋用量分別為藥材量的 5%、10%、20%、30%、40%、50%，加水稀釋至相同體積。以上樣品平行操作兩批，分別粉碎。

2.2 色譜條件 按照2010年版 《中國(guó)藥典》川烏項(xiàng)下條件，Agilent Extend-C18色譜柱（4.6 mm× 250 mm，5μm）；以乙腈-四氫呋喃 （25：15）為流動(dòng)相A，以0.1 mol/L醋酸銨溶液（每1 000 mL加冰醋酸0.5 mL）為流動(dòng)相B，按表1的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為235 nm。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫條件Tab.1 M obile phase gradient elution condition

2.3 對(duì)照品溶液的制備 取對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加異丙醇-三氯甲烷 （1：1）配制成每1 mL含烏頭堿0.034 mg、次烏頭堿0.01 mg、新烏頭堿0.087 mg、苯甲酰烏頭原堿0.023 mg、苯甲酰次烏頭原堿0.095 mg、苯甲酰新烏頭原堿0.125 mg的溶液，備用。

2.4 供試品溶液的制備 取炮制品粉末 （過(guò)三號(hào)篩）2 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，加氨試液3 mL，精密加入異丙醇-乙酸乙酯 （1：1）混合溶液50 mL，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲處理 （功率300 W，頻率40 kHz；水溫在25℃以下）30 min，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用異丙醇-乙酸乙酯 （1：1）混合溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25 mL，40℃以下減壓回收溶劑至干，殘?jiān)芗赢惐?三氯甲烷 （1：1）混合溶液3 m L溶解，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。

2.5 樣品測(cè)定 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算供試品溶液中烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿和苯甲酰新烏頭原堿的量。色譜圖見(jiàn)圖1，各成分含有量見(jiàn)表2、圖2。

表2 各炮制品中烏頭類(lèi)生物堿測(cè)定結(jié)果Tab.2 Aconitum alkaloids conten ts in different p rocessed products

3 結(jié)果

川烏經(jīng)醋制后生物堿含有量發(fā)生了明顯變化，不同醋濃度對(duì)其影響不同，與藥典法制川烏相比，醋制川烏均使單酯型生物堿含有量升高，且加入適當(dāng)比例的醋可使其達(dá)到藥典規(guī)定，煮法炮制加輔料醋可使單酯型生物堿含有量提高14%～82%；蒸法炮制加輔料醋可使單酯型生物堿含有量提高8%～67%。

圖1 6種生物堿測(cè)定HPLC圖譜Fig.1 HPLC chromatograms of six kinds of alkaloids

圖2 生品、不同用量醋煮品、不同用量醋蒸品中雙酯型生物堿總量、單酯型生物堿總量Fig.2 Diester-type and monoester-type alkaloids contents in raw Aconcti Radix Cocta and different processed products

單酯型生物堿成分含有量的提高說(shuō)明輔料醋可能抑制了單酯型生物堿的水解；加入輔料醋炮制品檢測(cè)不到雙酯型生物堿成分，說(shuō)明輔料醋促進(jìn)了雙酯型生物堿的水解。雙酯型生物堿的水解過(guò)程為通過(guò)加水加熱處理，使極毒的雙酯型烏頭堿C8位上的乙酰基水解 （或分解），失去一分子醋酸，得到相應(yīng)的苯甲酰單酯型生物堿，為雙酯型生物堿的一級(jí)水解；再進(jìn)一步將C14位上的苯甲?；猓ɑ蚍纸猓?，失去一分子苯甲酸，得到親水性氨基醇類(lèi)烏頭原堿，為單酯型生物堿的二級(jí)水解［12-13］。炮制時(shí)加入輔料醋增加了川烏藥材組織中醋酸的濃度，酸可催化乙?；乃?，因此可能醋酸促進(jìn)了雙酯型生物堿的一級(jí)水解；隨著反應(yīng)的進(jìn)行，醋酸量逐漸增加，由于酸性條件下酰基水解反應(yīng)為可逆反應(yīng)，當(dāng)醋酸量達(dá)到一定程度時(shí)則抑制?；猓匆种屏吮郊柞；乃猓瑥亩种屏藛熙バ蜕飰A的二級(jí)水解。

圖2結(jié)果顯示，煮法與蒸法炮制得到的制品酯型生物堿含有量變化趨勢(shì)呈現(xiàn)為隨醋濃度的增加單酯型生物堿含有量先升高，后下降，再升高的波動(dòng)變化。加入輔料醋后生物堿的變化較為復(fù)雜，該變化趨勢(shì)尚未發(fā)現(xiàn)科學(xué)解釋?zhuān)瑢?duì)此有待進(jìn)一步研究。

4 討論

《中國(guó)藥典》2010年版規(guī)定，制川烏單酯型生物堿總量應(yīng)為0.070%～0.15%［1］。本實(shí)驗(yàn)生川烏采用藥典法炮制，其指標(biāo)性成分—單酯型生物堿含有量均低于藥典要求，而炮制時(shí)加入適當(dāng)比例的醋可提高該成分含有量，使其達(dá)到藥典要求。煮法炮制會(huì)使生物堿類(lèi)成分流失，而蒸法炮制則較好的保留有效成分。醋煮川烏雖相對(duì)提高了單酯型生物堿含有量，但仍低于藥典規(guī)定下限，而藥典法蒸川烏時(shí)，單酯型生物堿含有量雖然也略低于藥典規(guī)定下限，但當(dāng)加入少量醋后便可使其達(dá)到藥典要求。對(duì)比表2（不同醋用量蒸制品單酯型生物堿含有量）發(fā)現(xiàn)，采用10%、50%米醋均可以有效提高該成分含有量并達(dá)到藥典規(guī)定，考慮經(jīng)濟(jì)成本，選用10%米醋蒸制川烏工藝在生產(chǎn)上最為適宜。

市場(chǎng)上流通的川烏藥材質(zhì)量良莠不齊，有些按照藥典規(guī)定的煮4～6 h或蒸6～8 h后仍難以得到合格的制品，酯型生物堿含有量太低會(huì)使藥效降低，影響臨床使用。本實(shí)驗(yàn)加入輔料醋炮制川烏，可在一定程度上提高酯型生物堿的含有量，解決了制品質(zhì)量達(dá)不到藥典要求的問(wèn)題，對(duì)制川烏的生產(chǎn)有一定指導(dǎo)意義。

采用不同用量的米醋炮制川烏時(shí)，制品中酯型生物堿含有量呈波動(dòng)變化，該變化機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

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Influence of vinegar on aconite alkaloids from Aconiti Radix Cocta

QIN Yu-xin， TAN Peng， GUOWei， FEIShu-lin， WU Yue-jiao， LIFei*
（Beijing University of ChineseMedicine，Beijing 100029，China）

AIMTo analyze the impactof adjuvant vinegar on alkaloids from Aconiti Radix Cocta.METHODSTo analyze six aconite alkaloids，including mesaconitine，hypaconitine，aconitine，benzoylmesaconine，benzoyl aconine，and benzoyl hypaconine from Aconiti Radix Cocta processed with different concentration of vinegar by HPLC.RESULTSCompared with the officialmethod，steaming and boiling process with vinegar promoted the first hydrolysis of diester-type alkaloids and inhibited the second hydrolysis ofmonoester-type alkaloids in Aconiti Radix Cocta to some degree，so improved the amount ofmonoester-type alkaloids.CONCLUSIONProcessing with vinegar can increase the content ofmonoester-type alkaloids in Aconiti Radix Cocta，best presents by 10%vinegar concentration.

Aconiti Radix Cocta；vinegar；process；diester-type alkaloids；monoester-type alkaloids

R283

A

1001-1528（2015）04-0828-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.04.030

2014-06-06

中醫(yī)藥行業(yè)科研專(zhuān)項(xiàng)項(xiàng)目 （201107008）；國(guó)家973計(jì)劃中醫(yī)基礎(chǔ)理論專(zhuān)項(xiàng) （2009CB522800；2009CB522805）

秦語(yǔ)欣（1991—），女（滿(mǎn)族），碩士生，研究方向?yàn)橹兴幣谥?。E-mail：qinyuxin11@sina.com

*通信作者：李 飛 （1963—），女，碩士，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幣谥?。Tel：（010）84738616，E-mail：lf668@ sina.com