■孟 巖 祁宏偉

（1.吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，吉林省吉林市 132101；2.吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧科學(xué)分院，吉林公主嶺 136100）

消化酶的活性對(duì)于動(dòng)物體的營養(yǎng)物質(zhì)吸收有著重要的影響，是營養(yǎng)物質(zhì)消化并吸收的基礎(chǔ)。大部分的營養(yǎng)物質(zhì)都要在小腸中進(jìn)行吸收，如果動(dòng)物體的消化酶活性不高或者小腸功能出現(xiàn)障礙，那么在小腸內(nèi)就會(huì)殘存大量的不能吸收的物質(zhì)，這些未吸收的物質(zhì)會(huì)增加腸道內(nèi)的滲透壓，從而引起動(dòng)物滲透性腹瀉及其它疾病[1]。

本試驗(yàn)以豆粕提取物為研究對(duì)象，探討不同添加水平的豆粕提取復(fù)合物對(duì)肉仔雞養(yǎng)分表觀代謝率以及腸道消化酶活性的影響，進(jìn)而明確其在肉仔雞玉米-豆粕型日糧中的適宜添加水平，為研究豆粕提取復(fù)合物促進(jìn)肉仔雞消化代謝的機(jī)理及其對(duì)肉仔雞腸道機(jī)能作用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

豆粕提取物：吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院研制，具體組成為：大豆異黃酮0.928%，大豆低聚糖71.33%（其中蔗糖42.6%、水蘇糖22.6%、棉籽糖6.13%）、大豆皂甙7.2%、大豆多肽6.2%。試驗(yàn)動(dòng)物為1日齡健康的艾維茵肉仔雞，購自公主嶺市某孵化場(chǎng)。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選擇健康狀況良好的1日齡艾維茵肉仔雞600只，隨機(jī)分為5個(gè)處理，每個(gè)處理設(shè)4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30只。其中一組設(shè)為對(duì)照組，只飼喂基礎(chǔ)日糧，不添加任何添加劑。試驗(yàn)組分為4個(gè)組，分別為250 mg/kg處理組：基礎(chǔ)日糧+豆粕提取復(fù)合物250 mg/kg；500 mg/kg處理組：基礎(chǔ)日糧+豆粕提取復(fù)合物500 mg/kg；750 mg/kg處理組：基礎(chǔ)日糧＋豆粕提取復(fù)合物750 mg/kg；1 000 mg/kg處理組：基礎(chǔ)日糧+豆粕提取復(fù)合物1 000 mg/kg。試驗(yàn)期為49 d，分為前、后兩期，前期0～21 d，后期22～49 d。

1.3 試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧

基礎(chǔ)日糧按照肉雞不同生長發(fā)育階段營養(yǎng)需要自行配制?；A(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.4 飼養(yǎng)管理

在試驗(yàn)前對(duì)雞舍進(jìn)行徹底清潔和消毒，試驗(yàn)期內(nèi)雞舍每7 d消毒兩次。前期0～21日齡肉仔雞采用籠養(yǎng)方式，后期22～49日齡采用地上平養(yǎng)飼養(yǎng)方式。試驗(yàn)期間，對(duì)雞舍的溫度和濕度進(jìn)行人工控制，保持良好通風(fēng)換氣，自由飲水和采食，參照肉雞標(biāo)準(zhǔn)化飼養(yǎng)管理進(jìn)行。對(duì)肉仔雞進(jìn)行常規(guī)免疫，試驗(yàn)期間均不使用其他抗生素藥物。

1.5 養(yǎng)分表觀代謝率的測(cè)定

試驗(yàn)28 d時(shí)，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選擇2只雞進(jìn)行為期4 d的代謝試驗(yàn)。代謝試驗(yàn)采用全收糞法。在代謝試驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)將試驗(yàn)雞以重復(fù)為單位稱重，準(zhǔn)確記錄各重復(fù)的飼料添加量，并采集各組飼料樣品，粉碎過40目篩，裝入樣品瓶備測(cè)。在各重復(fù)的糞盤上各放一塊干凈的塑料布用于接糞。每天早8∶00收集糞便，挑凈糞布上的羽毛和飼料顆粒等雜物后，用10%的稀硫酸進(jìn)行處理，每100 g糞樣加10 ml，將4 d收集的糞便稱重并混勻，冰箱4℃保存。將糞樣65℃烘干，室溫充分冷卻回潮24 h，稱重，粉碎過40目篩，裝入樣品瓶備測(cè)。測(cè)定飼料和糞樣中的粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和能值，計(jì)算各營養(yǎng)物質(zhì)表觀代謝率。糞便和飼料樣本的粗蛋白質(zhì)含量測(cè)定采用凱式定氮法，粗脂肪含量采用索氏脂肪提取法，能值采用氧彈式測(cè)熱儀測(cè)定。

蛋白質(zhì)表觀代謝率（%）=[（食入飼料量×飼料蛋白質(zhì)含量-糞便量×糞便蛋白質(zhì)含量）/食入飼料量×飼料蛋白質(zhì)含量]×100；

脂肪表觀代謝率（%）=[（食入飼料量×飼料脂肪含量-糞便量×糞便脂肪含量）/食入飼料量×飼料脂肪含量]×100；

表觀代謝能（MJ/kg）=[食入能量（MJ）-排泄物中能量（MJ）]/食入飼料量（kg）。

1.6 肉雞腸道消化酶活性測(cè)定

于21日齡時(shí)每處理隨機(jī)取4只雞(每重復(fù)1只)屠宰，迅速打開腹腔，取十二指腸食糜。將十二指腸食糜按照生理鹽水和食糜1∶5的質(zhì)量比進(jìn)行混合，混勻后在勻漿器進(jìn)行勻漿，勻漿的過程中，勻漿管處于冰水混合物中，勻漿時(shí)間30 s，在4℃離心機(jī)，離心15 min(12 000 r/min)，取離心后的上清液，放置于-80℃保存?zhèn)錅y(cè)。使用試劑盒（購自南京建成生物工程研究所）分別對(duì)淀粉酶、脂肪酶以及蛋白酶的活性進(jìn)行測(cè)定。蛋白酶活性采用福林-酚試劑法[2]測(cè)定，淀粉酶活性采用碘-淀粉比色法[2]測(cè)定，脂肪酶活性采用比濁法[3]測(cè)定。

1.7 數(shù)據(jù)處理

利用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，試驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用Duncan's法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 豆粕提取物對(duì)養(yǎng)分表觀代謝率的影響(見表2)

表2 豆粕提取物對(duì)養(yǎng)分表觀代謝率的影響

由表2可見，不同添加水平豆粕提取物對(duì)肉仔雞養(yǎng)分表觀代謝率均可產(chǎn)生積極的影響。在粗蛋白代謝影響方面，試驗(yàn)組均比對(duì)照組有所提高，其中250 mg/kg處理組較對(duì)照組雖然有所提高，但影響不顯著（P＞0.05）；500 mg/kg處理組比對(duì)照組提高了7.45%（P＜0.05），提高幅度最大；750 mg/kg處理組比對(duì)照組提高了6.76%（P＜0.05）；1 000 mg/kg處理組比對(duì)照組提高了5.79%（P＜0.05），500、750、1 000 mg/kg三個(gè)處理組之間無顯著差異(P＞0.05)，但1 000 mg/kg處理組較750 mg/kg處理組代謝率有下降的趨勢(shì)（P＞0.05）；在粗脂肪代謝方面，試驗(yàn)組與對(duì)照組相比雖然均有提高，但只有500 mg/kg處理組與對(duì)照組相比差異顯著（P＜0.05），其它各組與對(duì)照組相比均差異不明顯（P＞0.05）。表觀代謝能方面，雖然試驗(yàn)組間有比對(duì)照組提高的趨勢(shì)，但均無顯著差異（P＞0.05）。

2.2 豆粕提取復(fù)合物對(duì)肉仔雞腸道消化酶活性的影響(見表3)

表3 豆粕提取復(fù)合物對(duì)肉仔雞腸道消化酶活性的影響(U/g)

由表3可見，各試驗(yàn)組的α-淀粉酶活性均比對(duì)照組有不同程度的提高，其中，250 mg/kg組比對(duì)照組提高10.55%（P＜0.05），500、750、1 000 mg/kg組比對(duì)照組分別高出50.49%、50.61%、45.7%，差異極顯著（P＜0.01）；三個(gè)處理組脂肪酶活性比對(duì)照組分別高出30.34%、28.08%、16.95%，差異顯著（P＜0.05），而250 mg/kg組的脂肪酶活性與對(duì)照組相比無明顯差異（P＞0.05）；500、750 mg/kg和1 000 mg/kg三個(gè)處理組的總蛋白水解酶的酶活比對(duì)照組分別高出39.69%、33.04%、24.72%，差異顯著（P＜0.05），250 mg/kg組總蛋白水解酶活性比對(duì)照組有所增加，但差異不顯著（P＞0.05）。1 000 mg/kg組與500 mg/kg組和750 mg/kg組相比較，消化酶活性均有下降的趨勢(shì)，但差異不顯著（P＞0.05 ）。

3 討論

3.1 豆粕提取物對(duì)養(yǎng)分表觀代謝率的影響

大量的研究表明，豆粕提取物中的活性物質(zhì)除了具有提高機(jī)體免疫力、抗脂質(zhì)氧化、降血脂、抗自由基、抗病毒、抗腫瘤等生理功能以外，這些大豆活性物質(zhì)還可以促進(jìn)機(jī)體生長發(fā)育，提高機(jī)體對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收和利用，同時(shí)影響了機(jī)體正常菌群的活性，使得腸黏膜細(xì)胞代謝發(fā)生變化，進(jìn)而影響了肉仔雞養(yǎng)分表觀代謝率。豆粕提取物活性物質(zhì)一方面可以提高蛋白質(zhì)等含氮化合物的利用；另一方面，豆粕提取物含有大量的多聚糖類，可以提高益生菌的活性，可以加強(qiáng)對(duì)含氮化合物的利用；低聚糖可以吸附氨氣，使得腸道氨氣濃度降低，吸附的氨氣隨著糞便排出體外；不僅提高了含氮化合物的利用度，還改善了腸道環(huán)境，最終可以提高機(jī)體對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收。本研究粗蛋白和粗脂肪的表觀代謝率在豆粕提取復(fù)合物添加量為500 mg/kg之前是增加的，并達(dá)到最大值，在750 mg/kg之后呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。粗蛋白和粗脂肪表觀消化率升降與豆粕提取物能夠促進(jìn)并提高肉仔雞的生產(chǎn)性能結(jié)果是一致的，具體作用機(jī)理需要進(jìn)一步深入的研究。

3.2 豆粕提取物對(duì)腸道消化酶活性的影響

腸道中消化酶的活性一方面可以反映動(dòng)物的消化能力；另一方面也是酶合成與酶分解的平衡反映。當(dāng)動(dòng)物受到應(yīng)激刺激等行為時(shí)，其分泌的消化酶就會(huì)明顯減少，影響動(dòng)物對(duì)食物的消化吸收[4]。酶活性的增加另一方面是由于酶的合成增多，或者酶的合成大于酶的降解。其影響主要是由于機(jī)體對(duì)攝入的蛋白質(zhì)和氨基酸進(jìn)行代謝產(chǎn)生尿素等，這些含氮物質(zhì)在機(jī)體腸道分解產(chǎn)生氨氣，對(duì)消化道的pH值產(chǎn)生了影響，從而使得消化酶的活性發(fā)生改變。

本研究結(jié)果表明，豆粕提取物可以提高腸道中的淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶的活性，這主要是由于豆粕提取物提高了動(dòng)物體的免疫能力，減少了動(dòng)物的應(yīng)激反應(yīng)，提高了消化酶的合成速度。此結(jié)果與豆粕提取物提高養(yǎng)分表觀代謝率相一致,結(jié)果表明肉仔雞養(yǎng)分表觀代謝率與腸道脂肪酶活性有關(guān)，也說明了雞腸道消化酶活性可能反映了雞對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的利用能力[5]。本試驗(yàn)研究的數(shù)據(jù)結(jié)果和上述研究結(jié)果一致，豆粕提取物能夠明顯提高肉仔雞的消化酶活性。

4 結(jié)論

從本試驗(yàn)結(jié)果可以得出,肉仔雞日糧中添加豆粕提取物可提高養(yǎng)分的表觀代謝率以及腸道消化酶活性，綜合對(duì)二者的影響結(jié)果,豆粕提取復(fù)合物在肉仔雞日糧中的添加量以500～750 mg/kg為宜。