陳立東，肖敏，張緒國(guó)，朱艷霞，梁鵬飛，鄒兆坤

· 論著 ·

吡格列酮對(duì)不穩(wěn)定型心絞痛合并糖尿病患者內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量及脂聯(lián)素水平的影響

陳立東，肖敏，張緒國(guó)，朱艷霞，梁鵬飛，鄒兆坤

目的探討吡格列酮對(duì)不穩(wěn)定型心絞痛（UAP）合并2型糖尿病患者內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPCs）數(shù)量及脂聯(lián)素水平的影響。方法入選自2010年6月至2011年5月在湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院住院的有UAP合并2型糖尿病患者57例，隨機(jī)分為吡格列酮組（n=28）和對(duì)照組（n=29），吡格列酮組應(yīng)用吡格列酮（30 mg/d）治療，對(duì)照組患者不使用噻唑烷二酮類藥物。治療前及治療12周時(shí)通過(guò)流式細(xì)胞技術(shù)雙色分析法檢測(cè)所有患者外周血中EPCs占有核細(xì)胞的百分比，其中EPCs用CD34+/KDR+雙標(biāo)記定位，比較兩組患者在干預(yù)前后內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量的變化及血清脂聯(lián)素水平的變化。結(jié)果兩組患者在治療前EPCs的數(shù)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。治療12周時(shí)，吡格列酮組患者EPCs數(shù)量較治療前明顯增加（0.023±0.010 vs. 0.051±0.012，P＜0.01）；對(duì)照組患者EPCs數(shù)量在治療前后無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；12周時(shí)，吡格列酮組患者EPCs數(shù)量高于對(duì)照組患者（P＜0.028）。吡格列酮組血清脂聯(lián)素水平在治療前、后有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；對(duì)照組患者血脂聯(lián)素水平在治療前、后無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；12周時(shí)，吡格列酮組患者血清脂聯(lián)素水平高于對(duì)照組患者（P＜0.05）。結(jié)論 吡格列酮能夠促進(jìn)冠心病合并糖尿病患者EPCs的動(dòng)員，提高患者血清脂聯(lián)素水平。

吡格列酮；內(nèi)皮祖細(xì)胞；冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟??；2型糖尿病

近期臨床研究表明，吡咯列酮能降低2型糖尿病患者心血管事件的發(fā)生率[1]，但其具體機(jī)制尚不清楚。內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPCs）對(duì)于動(dòng)脈粥樣硬化性疾病中血管內(nèi)皮功能修復(fù)有重要的作用[2]，而且冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病（冠心?。┗颊咄庵苎狤PCs的數(shù)量與心血管不良事件的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)呈負(fù)相關(guān)[3]，EPCs數(shù)量可作為預(yù)測(cè)冠心病患者心臟不良事件發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)性的重要指標(biāo)。吡格列酮具有動(dòng)員2型糖尿病患者內(nèi)皮祖細(xì)胞的作用[4]，但對(duì)合并有糖尿病的冠心病患者是否具有類似的作用尚不清楚，本研究旨在觀察吡格列酮對(duì)于冠心病合并糖尿病患者外周血中EPCs數(shù)量及血脂聯(lián)素含量的影響，探討吡格列酮改善不穩(wěn)定型心絞痛合并2型糖尿病患者臨床預(yù)后的可能機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象入選2010年6月至2011年5月在湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院住院的不穩(wěn)定型心絞痛合并2型糖尿病患者57例。入選標(biāo)準(zhǔn)：①臨床確診2型糖尿病患者且糖化血紅蛋白（HbA1c）水平在6.5%～9.0%之間；②經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影證實(shí)為冠心病，臨床表現(xiàn)符合不穩(wěn)定心絞痛診斷標(biāo)準(zhǔn)；③住院期間接受冠狀動(dòng)脈支架置入治療；④無(wú)心功能不全；⑤未合并嚴(yán)重肝、腎疾患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①已接受過(guò)噻唑烷二酮類藥物治療；②存在應(yīng)用吡格列酮禁忌證，如藥物過(guò)敏、心功能不全、肝腎功能異常。將入選患者隨機(jī)分為吡格列酮組（n=28）和對(duì)照組（n=29），兩組患者可根據(jù)病情選擇磺脲類、雙胍類、α-糖苷酶抑制劑等口服藥物以及皮下注射胰島素控制血糖，吡格列酮組患者應(yīng)用吡格列酮（30 mg/d）治療，其中對(duì)照組患者不使用噻唑烷二酮類藥物，入選患者均要求在入院后將其血糖控制于目標(biāo)水平（即空腹血糖：3.9～7.2 mmol/L，隨機(jī)血糖≤10.0 mmol/L）。

1.2 冠狀動(dòng)脈介入治療患者術(shù)前常規(guī)服用阿司匹林、氯吡格雷等藥物，之前未服用上述藥物者，按指南要求術(shù)前給予負(fù)荷量，冠狀動(dòng)脈介入治療（PCI）術(shù)中應(yīng)用肝素（100 IU/kg）抗凝治療，冠狀動(dòng)脈支架均選用國(guó)產(chǎn)雷帕霉素洗脫支架（Partner支架，樂(lè)普公司），術(shù)后正規(guī)服用雙聯(lián)抗血小板藥物至少1年。

1.3 EPCs檢測(cè)的主要試劑異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記的CD34抗體購(gòu)自美國(guó)BD Pharmingen公司。VEGFR-2+/KDR單克隆抗體（用藻紅蛋白PE標(biāo)記）、紅細(xì)胞裂解液試劑盒（流式細(xì)胞專用，包含紅細(xì)胞裂解液、洗液、固定液）、ELISA 試劑盒（檢測(cè)脂聯(lián)素）購(gòu)自美國(guó)R&D公司。

1.4 EPCs數(shù)量和血脂聯(lián)素水平的檢測(cè)所有患者在接受PCI術(shù)后即刻及12周后抽取外周靜脈血以檢測(cè)EPCs數(shù)量和血脂聯(lián)素的水平。EPCs數(shù)量的檢測(cè)：采集外周靜脈血標(biāo)本，分別取100 μl加入2個(gè)15 ml的離心管中。取一管作陰性對(duì)照（未加PE標(biāo)記和APC標(biāo)記的抗體），另一管中加入10 μl FTIC標(biāo)記的CD34抗體及10 μl PE標(biāo)記的VEGFR-2+/KDR單克隆抗體，震蕩混勻，室溫避光孵育15 min。取200 μl紅細(xì)胞裂解液，用去離子水稀釋10倍后加入離心管中，震蕩、混勻，室溫避光孵育10 min，然后以300 g的離心力離心5 min后棄上清液。取200 μl紅細(xì)胞洗液，用去離子水稀釋10倍加入離心管中，再次震蕩、混勻，然后以300 g的離心力離心5 min后棄上清液。加入400 μl稀釋了10倍的紅細(xì)胞洗液和50 μl固定液。通過(guò)流式細(xì)胞儀（美國(guó)Beckman公司)對(duì)試管中的CD34+/KDR+雙標(biāo)記的陽(yáng)性細(xì)胞和有核細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。以EPCs占外周血有核細(xì)胞的百分比代表作為外周血EPCs數(shù)量的統(tǒng)計(jì)量。血脂聯(lián)素的檢測(cè)采用ELISA法測(cè)定。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)和單因素方差分析，治療前后組內(nèi)差別比較使用協(xié)方差分析，計(jì)數(shù)資料比較采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者的臨床基本特征吡格列酮組和對(duì)照組患者的平均年齡分別為（59.6±7.5）歲和（61.0±8.6）歲，兩組患者在年齡、性別構(gòu)成、體質(zhì)指數(shù)、冠心病危險(xiǎn)因素方面（如合并吸煙、高血壓病、血脂異常等），以及基礎(chǔ)血糖水平、使用胰島素治療患者的比例等均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P均＞0.05，表1）。

2.2 兩組患者冠狀動(dòng)脈病變特征及介入治療情況比較兩組患者在冠狀動(dòng)脈病變數(shù)量、分布位置以及復(fù)雜病變構(gòu)成比例無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P均＞0.05）；吡格列酮組患者共置入46枚支架，對(duì)照組共置入52枚支架，兩組患者在PCI術(shù)中所用支架的平均長(zhǎng)度及支架直徑比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異差異（P均＞0.05，表2）。

表1 兩組患者的臨床及冠脈病變特征

表2 冠脈病變特征及介入治療情況

2.3 EPCs數(shù)量和血脂聯(lián)素的變化情況兩組患者在治療前EPCs的數(shù)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。治療12周時(shí)，吡格列酮組患者EPCs數(shù)量較治療前明顯增加（0.023±0.010 vs. 0.051±0.012），治療前后比較存在顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）；對(duì)照組患者EPCs數(shù)量治療前后比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；12周時(shí)，吡格列酮組患者EPCs數(shù)量高于對(duì)照組患者（P＜0.028）（表3）。治療12周時(shí)，兩組患者血清脂聯(lián)素水平均較治療前增高，吡格列酮組血清脂聯(lián)素水平在治療后增高明顯，治療前后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；對(duì)照組患者血脂聯(lián)素水平治療前后比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；12周時(shí)，吡格列酮組患者血清脂聯(lián)素水平高于對(duì)照組患者（P＜0.05）（表3）。

3 討論

內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPCs）亦稱成血管細(xì)胞，可參與血管損傷的修復(fù)。研究已證實(shí)：EPCs在血管內(nèi)皮損傷后自身修復(fù)過(guò)程中發(fā)揮重要作用[5]。目前公認(rèn)EPCs 表面標(biāo)記有3種：CD133、CD34和VEGFR-2（KDR），其中CD133+/CD34+/ KDR+的內(nèi)皮祖細(xì)胞主要存在于骨髓中，位于外周血中內(nèi)皮祖細(xì)胞表達(dá)CD133減少，但繼續(xù)表達(dá)CD34，并開始表達(dá)KDR[6]，因此，本研究以表達(dá)CD34和KDR雙陽(yáng)性的細(xì)胞作為循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞。研究顯示，經(jīng)吡格列酮治療12周，入選患者CD34+/KDR+細(xì)胞數(shù)量明顯增高，表明吡格列酮能提高不穩(wěn)定型心絞痛合并糖尿病患者外周循環(huán)中EPCs數(shù)量。

外周血中EPCs所占數(shù)量比可以作為預(yù)測(cè)血管恢復(fù)能力和心血管病危險(xiǎn)程度的可靠指標(biāo)。其數(shù)量的減少提示血管內(nèi)皮的自我修復(fù)能力降低、同時(shí)心血管疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增高[3]。在有關(guān)糖尿病患者的研究中發(fā)現(xiàn)，與非糖尿病患者相比，糖尿病患者外周血中EPCs 數(shù)量明顯減少，且與糖尿病的嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)。目前認(rèn)為，糖尿病患者EPCs數(shù)量減少導(dǎo)致內(nèi)皮修復(fù)功能失調(diào)是促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化性疾病進(jìn)展的重要因素之一[7]。 結(jié)合本研究的結(jié)果提示，吡格列酮能夠促進(jìn)糖尿病患者EPCs的動(dòng)員，因此在改善機(jī)體血管內(nèi)皮修復(fù)能力、抑制冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性疾病進(jìn)展方面能夠發(fā)揮有益的作用。

本研究還發(fā)現(xiàn)，吡格列酮能提升不穩(wěn)定心絞痛合并糖尿病患者血脂聯(lián)素的水平。既往體外研究也發(fā)現(xiàn)，吡格列酮能夠通過(guò)直接激活轉(zhuǎn)錄區(qū)上游的啟動(dòng)子增加脂聯(lián)素mRNA的轉(zhuǎn)錄水平，進(jìn)而促進(jìn)脂肪組織分泌脂聯(lián)素[8]。脂聯(lián)素是一種由脂肪組織合成分泌的有胰島素增敏作用的調(diào)節(jié)激素，該激素能夠通過(guò)減輕內(nèi)皮細(xì)胞炎性損傷、減少泡沫細(xì)胞形成及抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖、遷移等多種途徑發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用[9]；近來(lái)研究還發(fā)現(xiàn)，脂聯(lián)素還具有抑制EPC凋亡[10]、改善EPC內(nèi)皮修復(fù)能力的作用。本研究結(jié)果提示，吡格列酮可能通過(guò)上調(diào)機(jī)體血脂聯(lián)素的分泌水平，進(jìn)一步促進(jìn)機(jī)體EPC的動(dòng)員、增殖過(guò)程。

迄今已有多項(xiàng)臨床研究證實(shí)吡格列酮可以降低2型糖尿病高?；颊咝哪X血管不良事件的風(fēng)險(xiǎn)性，但其中的具體機(jī)制目前尚不清楚。本項(xiàng)研究的結(jié)果顯示，吡格列酮可能通過(guò)提升血脂聯(lián)素的水平、促進(jìn)機(jī)體EPC動(dòng)員等途徑改善冠心病合并糖尿病患者的臨床預(yù)后，但由于本研究入選的患者例數(shù)較少，這一結(jié)論尚有待于更大樣本量的研究來(lái)證實(shí)。

表3 外周血中EPCs數(shù)量和脂聯(lián)素的變化情況

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Influences of pioglitazone on quantity of endothelial progenitor cells and adiponectin level in patients with unstable angina pectoris complicating diabetes

CHEN Li-dong*, XIAO Min, ZHANG Xu-guo, ZHU Yan-xia, LIANG Peng-fei. ZOU Zhao-kun*Department of Emergency, Taihe Hospital, Hubei University of Medicine, Shiyan 442000, China.

ObjectiveTo investigate the influences of pioglitazone on quantity of endothelial progenitor cells (EPCs) and adiponectin level in patients with unstable angina pectoris (UAP) complicating type 2 diabetes mellitus (T2DM).MethodsThe patients (n=57) were randomly divided into pioglitazone group (n=28) and control group (n=29), and pioglitazone group was treated with pioglitazone (30 mg/d) and control group was not given TZD drugs. The percentage of peripheral EPCs in karyocytes was detected by using flow cytometry and double color analysis before treatment and 12 w after treatment, and EPCs were localized with CD34+/KDR+ double labeling. The changes of quantity of EPCs and level of serum adiponectin were compared between 2 groups before and after treatment.ResultsThe quantity of EPCs had no statistical difference between 2 groups before treatment (P＞0.05). After treatment for 12 w, the quantity of EPCs increased significantly in pioglitazone group (0.023±0.010 vs. 0.051 ±0.012, P＜0.01), and had no statistical difference in control group (P＞0.05). The quantity of EPCs was higher in pioglitazone group than that in control group 12 w after treatment (P＜0.028). The level of serum adiponectin had statistical difference in pioglitazone group before and after treatment (P＜0.05), while had no statistical difference in control group (P＞0.05). The level of serum adiponectin was higher in pioglitazone group than that in control group 12 w after treatment (P＜0.05).ConclusionPioglitazone can improve the mobilization of EPCs and level of serum adiponectin in patients with UAP complicating T2DM.

Pioglitazone; Endothelial progenitor cells; Coronary atherosclerosis; Type 2 diabetes mellitus

R541.4

A

1674-4055(2015)01-0069-03

2014-05-19）

（責(zé)任編輯：田國(guó)祥）

442000 十堰，湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院急診科

鄒兆坤,E-mail:mqrrp@163.com

10.3969/j.1674-4055.2015.01.22