楊亞冬，張文元，張科技，房國(guó)堅(jiān)

（浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院，浙江 杭州310013）

·實(shí)驗(yàn)研究·

體質(zhì)量及性別對(duì)四氧嘧啶誘導(dǎo)兔糖尿病模型成模率的影響研究

楊亞冬，張文元*，張科技，房國(guó)堅(jiān)

（浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院，浙江 杭州310013）

目的探討體質(zhì)量及性別對(duì)四氧嘧啶誘導(dǎo)兔糖尿病模型成模率的影響。方法32只新西蘭大白兔，雌雄各半，體質(zhì)量1.8～2.5kg，以100mg/kg經(jīng)兔耳緣靜脈快速注射4%的四氧嘧啶溶液的方法來(lái)誘導(dǎo)建立兔糖尿病模型，3天后測(cè)空腹血糖，血糖低于16mmol/L的兔子繼續(xù)追加100mg/kg四氧嘧啶，給藥后第14天測(cè)空腹血糖，以空腹血糖＞16mmol/L確定為糖尿病。按照不同體質(zhì)量和性別觀察兔子存活情況及不同時(shí)間點(diǎn)的血糖水平。結(jié)果采用四氧嘧啶制作的糖尿病兔模型中，體質(zhì)量＞2.3kg成模率高于≤2.3kg的兔子，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；雌性與雄性兔的死亡率及成模率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。結(jié)論四氧嘧啶誘導(dǎo)新西蘭大白兔糖尿病模型中，體質(zhì)量＞2.3kg的新西蘭大白兔成模率高，更適合用作模型動(dòng)物，并且該誘導(dǎo)法適用于短周期實(shí)驗(yàn)的糖尿病動(dòng)物模型。

四氧嘧啶；糖尿病模型；體質(zhì)量；性別

四氧嘧啶常被用于建立單純的糖尿病模型[1]，本實(shí)驗(yàn)選用不同體質(zhì)量和性別的兔子，用四氧嘧啶建立糖尿病模型，了解體質(zhì)量、性別對(duì)該法制作兔糖尿病模型成模率的影響。

1 材料與方法

1.1材料 選擇健康新西蘭大白兔32只，2～5月齡，體質(zhì)量1.8～2.5kg，按體質(zhì)量分為三組：＜2.0kg，6只；2.0～2.3kg，6只；＞2.3kg，20只，每組雌雄各半。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(浙)2009-0039號(hào)，使用許可證號(hào)：SYXK (浙)2011-0166。動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境及基礎(chǔ)飼料均由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，室溫約20℃，相對(duì)濕度40%～70%，通風(fēng)良好，單籠飼養(yǎng)，普通飼料喂養(yǎng)，自由飲水。

1.2方法

1.2.1試劑與儀器 四氧嘧啶（alloxan，ALX，美國(guó)Sigma公司），用無(wú)菌生理鹽水配制4%的ALX溶液，用微量過濾器過濾，即用即配。血糖儀（Freestyle，雅培公司）。

1.2.2實(shí)驗(yàn)方法 按100mg/kg經(jīng)兔耳緣靜脈快速注射4%的ALX溶液，給藥前晚6點(diǎn)后不予喂食（不禁水），給藥后自由進(jìn)食，并在給藥后5小時(shí)給予靜脈注射25%葡萄糖4mL/只，再用50%葡萄糖液代替飲水以防低血糖，12小時(shí)后換成正常水。3天后測(cè)空腹血糖，血糖低于16mmol/L的兔子繼續(xù)追加100mg/kg四氧嘧啶。第一次給藥后14天測(cè)空腹血糖，以空腹血糖＞16mmol/L確定為糖尿病[2-3]。給藥后嚴(yán)密觀察兔子的進(jìn)食、飲水、體質(zhì)量、精神狀態(tài)和毛色等一般情況，并監(jiān)測(cè)給藥前、給藥后3、14、21、28天這5個(gè)時(shí)間點(diǎn)每只兔子的空腹血糖。血糖測(cè)定：在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的早上未喂食前，用針刺兔耳緣靜脈，擠掉第1滴血，將第2滴血滴到血糖儀專用的試紙上，插入血糖儀即顯示血糖讀數(shù)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)用（）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；成模率和死亡率用百分率表示，組間比較用Fisher精確概率法。

2 結(jié)果

2.1一般情況 造模前兔子狀態(tài)均良好，注射四氧嘧啶后12小時(shí)開始出現(xiàn)精神疲軟，活動(dòng)減少，攝食減少的現(xiàn)象，皮毛雜亂，注射后12～24小時(shí)死亡率較高，死亡時(shí)呈現(xiàn)驚厥、尖叫、角弓反張等癥狀。

2.2成模情況 本實(shí)驗(yàn)共選用了32只不同體質(zhì)量雌雄各半的兔子，注射前血糖均低于6 mmol/L。第一次注射后，死亡13只，7只兔子3天后測(cè)空腹血糖＞16mmol/L，另外12只在追加注射四氧嘧啶后，死亡6只，4只3天后測(cè)空腹血糖＞16mmol/L，2只仍低于16mmol/L，誘導(dǎo)無(wú)效。32只兔子死亡19只，誘導(dǎo)無(wú)效2只，成模11只。統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，體質(zhì)量＞2.3kg的兔子成模率（50.00%）與體質(zhì)量≤2.3kg的兔子比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；不同性別中，雌性成模率與雄性成模率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見表1。

2.3不同時(shí)間點(diǎn)血糖水平 11只成模兔子中，血糖基礎(chǔ)值雌兔與雄兔差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），給藥后3天、14天雄兔血糖明顯高于雌兔，給藥后21、28天成模的雌、雄兔血糖差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見表2。

表2 成模兔子不同時(shí)間點(diǎn)平均血糖變化情況（，mmol/L）

與雌兔比較*P＜0.05

組別 n 基礎(chǔ)值 給藥后3天 給藥后14天 給藥后21天 給藥后28天雄兔 4 5.35±0.54 18.88±1.0*17.45±0.44*16.63±0.39 15.98±1.39雌兔 7 5.38±0.61 16.70±0.3 16.80±0.33 16.49±0.38 13.89±1.82

3 討論

本研究從動(dòng)物的自身特征著手來(lái)研究體質(zhì)量與性別對(duì)造模成功率的影響。研究結(jié)果顯示,注射后12～24小時(shí)死亡率較高，四氧嘧啶注射后短暫的低血糖期是兔子死亡的主要原因[4]。表1提示，雄兔與雌兔的死亡率與成模率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。不同時(shí)間點(diǎn)的血糖水平提示，在給藥后3天、14天 ,雄兔的平均血糖均高于雌兔，另外，對(duì)誘導(dǎo)藥物無(wú)反應(yīng)的均是雌兔，這些結(jié)果均提示雌兔相對(duì)于雄兔來(lái)說(shuō)對(duì)藥物有更好的耐受性。從不同體質(zhì)量來(lái)看，體質(zhì)量＞2.3kg成模率最高（50.00%），與體質(zhì)量≤2.3kg的兔子比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05），提示體質(zhì)量越小，死亡率越高，成模率越低。表明體質(zhì)量大于2.3kg的兔子具有更好的耐受性，更適于用作為模型動(dòng)物。

成模后，兔子的血糖水平會(huì)出現(xiàn)下降，到第28天時(shí)，11只成模兔子中有7只降到＜16mmol/L，尤以雌兔下降明顯，因此該誘導(dǎo)法適用于做短周期實(shí)驗(yàn)的糖尿病動(dòng)物模型。這個(gè)現(xiàn)象同時(shí)也提示，造模后兔子自身可能出現(xiàn)胰島細(xì)胞修復(fù)的情況[5]，對(duì)于耐受性相對(duì)較好的雌兔來(lái)說(shuō)，可以摸索加大給藥劑量，使模型穩(wěn)定在糖尿病水平的持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)。

[1] 李擁軍，柳夏林，劉昌偉，等.1型糖尿病小鼠下肢缺血恢復(fù)受損的機(jī)制.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，29(6):742，封三

[2] 黃松，冼蘇.糖尿病動(dòng)物模型研究現(xiàn)狀及進(jìn)展.廣西醫(yī)學(xué)，2002，24(1):46

[3] 孟建波，康勝群，康素嫻，等.四氧嘧啶誘導(dǎo)兔1型糖尿病模型的實(shí)驗(yàn)研究.河北醫(yī)藥，2009，31（1）：19

[4] 李晶，張春元，張寶珍，等.四氧嘧啶誘發(fā)大白兔糖尿病模型的實(shí)驗(yàn)研究.中國(guó)校醫(yī)，1999，13（1）:30

[5] 朱昆，潘洪濤，羅萍，等.四氧嘧啶誘發(fā)兔糖尿病模型的胰島素管理及糖尿病腎病模型建立.吉林醫(yī)學(xué)，2006，27（9）：1010

浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科學(xué)研究計(jì)劃項(xiàng)目（2013KYA045）

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