劉海青，范 微，張靜宵，劉巴睿，張發(fā)榮，加 洛，陶元清

（青海省地方病預(yù)防控制所，西寧 811602）

喜馬拉雅旱獺實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化的研究進(jìn)展

劉海青，范 微，張靜宵，劉巴睿，張發(fā)榮，加 洛，陶元清

（青海省地方病預(yù)防控制所，西寧 811602）

喜馬拉雅旱獺是青藏高原特有野生動(dòng)物，因其具有的生物學(xué)特性在生物醫(yī)學(xué)研究中得到廣泛應(yīng)用。根據(jù)喜馬拉雅旱獺的生物學(xué)特性和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量控制要求，對其進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化研究。本文綜述近年來喜馬拉雅旱獺實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化的研究進(jìn)展，提高對喜馬拉雅旱獺的認(rèn)識(shí)，以期推動(dòng)旱獺的基礎(chǔ)和應(yīng)用研究，實(shí)現(xiàn)喜馬拉雅旱獺的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化目標(biāo)。

喜馬拉雅旱獺；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化；技術(shù)和方法；人類乙肝

隨著生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)研究的飛速發(fā)展，對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品種的需求也越來越高，將野生動(dòng)物培育和開發(fā)為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是我國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物工作發(fā)展的重要方向［1］。喜馬拉雅旱獺是我國分布最廣，數(shù)量最多的旱獺種類，廣泛分布于青藏高原高山草甸草原、高山草原山地環(huán)境的高原土生特有嚙齒冬眠動(dòng)物，因其特有的生物學(xué)特性在生物醫(yī)學(xué)研究中得到廣泛應(yīng)用［2］。通過近20年來不懈努力，青海省地方病預(yù)防控制所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心建成了國內(nèi)最大規(guī)模的人工喜馬拉雅旱獺生產(chǎn)和研究基地，現(xiàn)有56對旱獺種群，每年可供應(yīng)120～150只人工飼養(yǎng)條件下生產(chǎn)的實(shí)驗(yàn)獺，并與科研院校協(xié)作開展了多項(xiàng)研究，取得了顯著進(jìn)展?，F(xiàn)將近年來旱獺實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化研究進(jìn)展綜述如下。

1 背景

1.1 旱獺的分類地位與分布

在分類學(xué)上旱獺（Marmota）屬于嚙齒目（Rodentia）松鼠科（Rciuride）旱獺屬（Marmota）。1968年，Hoffmann和Nadler基于形態(tài)學(xué)和染色體特征以及化石紀(jì)錄，認(rèn)為旱獺是由早更新世紀(jì)初期的北美地松鼠進(jìn)化而來。此物種在北美分化形成了monax，flaviventris和caligata三個(gè)種群；此物種的另一個(gè)種群在早更新世紀(jì)晚期經(jīng)過白令海峽遷徙入歐亞大陸，在更新世紀(jì)遷徙入西歐亞大陸，分化形成了marmota和亞洲化土撥鼠（包括bobak種群，menzbieri和caudata）；在更新世紀(jì)晚期歐亞大陸的土撥鼠重新通過白令海峽回遷到阿拉斯加州一帶，分化形成了broweri種群［3］。目前，學(xué)者認(rèn)為全世界旱獺種類共有14種，我國目前已發(fā)現(xiàn)5種（含亞種），分別為長尾旱獺、喜馬拉雅旱獺和草原旱獺的西伯利亞亞種、阿爾泰亞種和天山亞種，主要分布于我國西北地區(qū)［4］。

1.2 美洲旱獺（Marmota monax）

又稱東方土撥鼠（eastern woodchuck），分布于美國和加拿大。1978年Summers等在費(fèi)城動(dòng)物園肝癌發(fā)生頻率很高的美洲旱獺的血清中發(fā)現(xiàn)土撥鼠肝炎病毒（woodchuck hepatitis virus，WHV）的存在，并分離出WHV病毒株，由于WHV在流行狀況、感染后的自然史和致病性等方面與人類乙肝病毒（HBV）極為相似，WHV已經(jīng)被廣泛應(yīng)用到乙肝病毒感染和抗病毒治療的模型中；土撥鼠也已經(jīng)成為研究嗜肝病毒感染的發(fā)病和致癌機(jī)制以及篩選治療性疫苗和藥物的有效動(dòng)物模型［5-6］。1998年Tennant等人第一次采用美洲旱獺乙肝動(dòng)物感染模型研究非阿尿苷（fialuridine，F(xiàn)IAU）抗病毒與藥理毒性發(fā)現(xiàn)，旱獺表現(xiàn)出的FIAU誘導(dǎo)的線粒體毒性臨床表征，如肝衰竭，乳酸血癥，肝脂肪變性與FIAU在慢性治療中誘發(fā)人肝衰竭癥狀相類似，表明美洲旱獺對開展核苷酸類藥物的臨床前評價(jià)以及探討核苷酸類藥物的分子機(jī)制具有很好的應(yīng)用價(jià)值［7］。目前土撥鼠是國際公認(rèn)的核苷酸類抗病毒藥物臨床前線粒體毒性評價(jià)模型。因此，美洲旱獺在醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究領(lǐng)域有較多的應(yīng)用。但由于土撥鼠僅產(chǎn)于北美，且價(jià)格昂貴，難以在國內(nèi)廣泛應(yīng)用。

1.3 喜馬拉雅旱獺（Marmota himaluyana）

我國分布最為廣泛、數(shù)量最多的一種旱獺，分布在青藏高原及其毗鄰地區(qū)，東至甘肅南部和四川西部，南至西藏和云南西北部，北至祁連山北部。在我國因喜馬拉雅旱獺屬于青藏高原鼠疫自然疫源性宿主動(dòng)物而倍受關(guān)注。1987年劉壽鵬等證實(shí)在喜馬拉雅旱獺中存在類似于土撥鼠肝炎病毒（類人乙型肝炎病毒）的感染，并且顯示喜馬拉雅旱獺能人工感染土撥鼠肝炎病毒，已被當(dāng)作研究人類乙型肝炎病毒（HBV）感染的最理想模型動(dòng)物［8-9］。因其為青藏高原土生特有種，所以它和高原鼠兔、藏羚羊等動(dòng)物一樣也是研究高原醫(yī)學(xué)理想的模型動(dòng)物［10］。旱獺的冬眠習(xí)性，應(yīng)用于肥胖癥與能量平衡、內(nèi)分泌與代謝機(jī)能、中樞神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)控機(jī)制以及心血管疾病、腦血管疾病和腫瘤形成等方面的研究［11］。目前，國內(nèi)外用于實(shí)驗(yàn)的旱獺絕大多數(shù)是野外捕捉，來源困難，背景不詳，健康狀況未知，無法滿足生命科學(xué)研究的需要。因此，將野生旱獺進(jìn)行人工馴化、飼養(yǎng)、繁殖與規(guī)范化管理，建立達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)要求的種群，解決喜馬拉雅旱獺的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化等一系列基礎(chǔ)科學(xué)問題，使其成為新的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品種勢在必行，具有重大的科學(xué)意義。

2 喜馬拉雅旱獺的人工飼養(yǎng)研究

2.1 種群動(dòng)物質(zhì)量控制

在非鼠疫疫區(qū)，采取圈套活捕法捕捉體格健壯、肥瘦適中、四肢有力、反應(yīng)敏感、行動(dòng)活潑的亞成體和成體旱獺。要求被毛光亮，眼睛鮮亮有神、無分泌物；鼻孔干凈，呼吸正常；肛門干凈，糞粒均勻，并進(jìn)行體內(nèi)外寄生蟲的驅(qū)治和檢疫，驅(qū)除旱獺蛔蟲和螨、蜱、虱等旱獺攜帶的常見體內(nèi)外寄生蟲，排除旱獺嗜肝病毒、弓形體、鼠疫、布氏菌等主要傳染病原體和人獸共患病原體［11］。

2.2 主要環(huán)境指標(biāo)和籠具

3月～11月（非冬眠期）室內(nèi)最適溫度18～20℃；相對濕度40％～50％；光照可以為自然光照和日光燈，照度控制在60Lx以下；室內(nèi)風(fēng)速小于0.2m/s；室內(nèi)氨氣濃度小于10mg/m3；噪音小于50dB。研制了4種不同用途的專用籠具［12-13］，并取得國家專利，分別為：喜馬拉雅旱獺室外人工繁殖籠具（專利號(hào)：ZL 2011 2 0074289.3）；喜馬拉雅旱獺人工室內(nèi)繁殖池（專利號(hào)：ZL 2011 2 0074075.6）；喜馬拉雅旱獺人工室內(nèi)繁殖籠具（專利號(hào)：ZL 2011 2 0074213.0）；喜馬拉雅旱獺實(shí)驗(yàn)用籠具（專利號(hào)：ZL 2011 2 0074194.1）。

2.3 人工全價(jià)營養(yǎng)顆粒飼料的研制和飲水

選用苜蓿粉、麩皮、玉米粉為基礎(chǔ)日糧，添加食鹽、復(fù)合維生素和微量元素等添加劑制成了旱獺配合飼料，配方為苜蓿粉48％，麩皮30％，玉米粉20％，鹽1％，酵母粉0.95％，微量元素0.05％，性狀為干燥顆粒飼料，直徑0.5cm，長度3～5cm，呈棒狀。每天6：00、12：00、18：00定時(shí)飼喂。飲水為pH2.5～2.8的酸化水［14］。

2.4 人工飼養(yǎng)條件下旱獺的繁殖特性

直流電源作為輔助工作電源和穩(wěn)定電壓電源，在交流電源停電后，能繼續(xù)為重要負(fù)荷供電，如醫(yī)院、鐵路、電廠等重要場所。直流系統(tǒng)的可靠、安全運(yùn)行，直接影響重要場所的正常生產(chǎn)。本文將對實(shí)際應(yīng)用較多電壓等級(jí)的220V直流電源接地回來進(jìn)行分析，并對接地后的處理進(jìn)行敘述。

人工飼養(yǎng)的親本旱獺性成熟年齡為2周歲，體重2.5～3.0kg；體成熟年齡為3周歲，體重3.5～5.0kg；繁殖年齡3～6周歲，每年3月份出蟄后進(jìn)入繁殖期，3月中旬開始交配；發(fā)情周期1年，1公1母配對；旱獺的妊娠期為33～37d，平均哺乳期為47d；平均繁殖率32.4％，平均胎仔數(shù)為4.4只，性比約為1：1，平均離乳數(shù)為3.95只，離乳率為89.7％，平均產(chǎn)仔數(shù)4只，哺乳期35d左右，離乳率92％，幼獺成活率為90.8％［13］。初生旱獺全身裸露無毛，背部黑紅色，腹部粉紅色，皮膚帶皺紋、半透明，耳殼緊貼顱部，匍伏，體重35.5～51.5g，體長9～11cm，胸圍3～4cm，尾長1.2～1.5cm；成體體重4800～5600g，體長480～550cm，胸圍30～40cm，尾長12～15cm。生長發(fā)育快速期在1周歲～2周歲期間。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，不同性別旱獺的體重、體長、胸圍和尾長等生長發(fā)育指標(biāo)無顯著性差異。

2.5 旱獺生物學(xué)特性研究

建立形態(tài)學(xué)、生理學(xué)、血液學(xué)和血液生化、行為學(xué)、解剖學(xué)等方面系統(tǒng)的數(shù)據(jù)庫，取得完整的生物學(xué)特性資料，建立旱獺種質(zhì)資源評價(jià)體系。測定了人工飼養(yǎng)條件下健康旱獺白細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)百分率、紅細(xì)胞、血小板和血紅蛋白等7項(xiàng)常用血液生理指標(biāo)［14］；谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、血清總膽紅素（TB）、總蛋白（TP）、堿性磷酸酶（ALP）、總膽固醇、甘油三酯、高密度和低密度脂蛋白、空腹血糖、尿素氮（BUN）和4種離子濃度（K+、Na+、Cl-、Ca2+）常用正常血液生化值15項(xiàng)［15］；血液流變學(xué)指標(biāo)和血脂水平［16-17］；主要臟器重量和臟器系數(shù)［18］；麻醉狀態(tài)下的心電圖［19］等喜馬拉雅旱獺各項(xiàng)生物學(xué)指標(biāo)，為喜馬拉雅旱獺人工飼養(yǎng)繁殖、疾病診斷等提供了相應(yīng)的參考依據(jù)，也豐富了喜馬拉雅旱獺生物學(xué)特性的資料。

2.6 旱獺遺傳學(xué)研究

賀學(xué)等［20］采集喜馬拉雅、西伯利亞、灰旱獺和長尾旱獺等四種旱獺肌肉材料，應(yīng)用微衛(wèi)星遺傳標(biāo)記檢測技術(shù)，通過計(jì)算有效等位基因數(shù)、生物多樣性Shannon指標(biāo)、期望雜合度值等估計(jì)種群的遺傳多樣性，計(jì)算各位點(diǎn)的多態(tài)信息含量、中國四種旱獺和青海玉樹、同仁、烏蘭三個(gè)地區(qū)旱獺等位基因頻率、雜合度、多態(tài)性信息含量、Shannon指數(shù)、遺傳相似度和遺傳距離，并繪制出遺傳發(fā)生樹分析了四種旱獺的遺傳多態(tài)性，確定喜馬拉雅旱獺遺傳結(jié)構(gòu)。結(jié)果顯示，喜馬拉雅旱獺種群為獨(dú)立分支；蒙古旱獺、灰旱獺和長尾旱獺為一支，蒙古旱獺和灰旱獺血緣關(guān)系較近，與長尾旱獺較遠(yuǎn)。青海省喜馬拉雅旱獺種群分兩個(gè)分支：烏蘭和同仁地區(qū)旱獺種群為一支；玉樹地區(qū)旱獺種群為另一支。

2.7 喜馬拉雅旱獺白化種群的培育

陶元清等［21-23］在青海地區(qū)發(fā)現(xiàn)罕見的白化喜馬拉雅旱獺種群，開展了人工白化種群的培育，擬將野外白化喜馬拉雅旱獺培育成為帶有特定遺傳標(biāo)志的白化品系，建立白化旱獺封閉群，以區(qū)別于野生旱獺，最終培育具有我國知識(shí)產(chǎn)權(quán)的新型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。

3 喜馬拉雅旱獺動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù)和方法

陶元清、范微、王忠東等［24-28］對旱獺飼養(yǎng)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)期間的飼養(yǎng)管理、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本技術(shù)等方面進(jìn)行了探索，建立了包括抓取、固定、普通標(biāo)記、電子芯片標(biāo)記、分組、麻醉、取材、肝穿刺技術(shù)、給藥、處死等規(guī)范的實(shí)驗(yàn)技術(shù)和方法規(guī)范，為各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的順利開展提供了技術(shù)保證和技術(shù)支撐條件。

4 喜馬拉雅旱獺應(yīng)用研究

在實(shí)現(xiàn)喜馬拉雅旱獺人工飼養(yǎng)基地的基礎(chǔ)上，與多家合作單位展開人類疾病喜馬拉雅旱獺模型的研究，證實(shí)喜馬拉雅旱獺是理想的人類乙肝、高原病、心血管疾病、肥胖癥、癌癥、抗乙肝和艾滋病新藥毒性評價(jià)的動(dòng)物模型動(dòng)物，具有廣泛的應(yīng)用前景。

4.1 野生喜馬拉雅旱獺自然感染旱獺嗜肝病毒的驗(yàn)證

旱獺與土撥鼠同屬松鼠科旱獺屬，大量分布在我國西北地區(qū)，其中喜馬拉雅旱獺為青藏高原特有品系，經(jīng)線粒體DNA分析發(fā)現(xiàn)旱獺與土撥鼠親緣關(guān)系很近。王寶菊等研究發(fā)現(xiàn)：青海地區(qū)喜馬拉雅旱獺自然感染W(wǎng)HV感染率0～26％［29］，旱獺的重要免疫分子包括IFN、IFNR、IL-6、10、15、CD4、PD-1、PD-L2以及MHC-I類分子的保守區(qū)與土撥鼠同類分子具有高度的同源性（95％～100％）［30-32］。

4.2 喜馬拉雅旱獺人類乙肝動(dòng)物模型的建立研究

王寶菊等將WHV病毒接種成年喜馬拉雅旱獺后出現(xiàn)急性感染經(jīng)過，感染旱獺血清中檢測到病毒血癥（WHsAg和WHV DNA）的出現(xiàn)和病毒特異性抗體的產(chǎn)生（WHcAb），在肝組織中檢測到WHV的復(fù)制（WHV復(fù)制中間體和轉(zhuǎn)錄子）和病毒抗原的表達(dá)，形成病毒血癥及引起感染動(dòng)物的肝臟出現(xiàn)組織病理學(xué)改變。部分旱獺的病毒血癥持續(xù)時(shí)間超過24周，其中最長的持續(xù)時(shí)間接近2年，表明我國喜馬拉雅旱獺對WHV易感，而成功建立了急性WHV感染旱獺模型，并應(yīng)用WHV感染旱獺模型研究了HBV感染的發(fā)病機(jī)制和評價(jià)新的免疫治療策略［33-34］。

4.3 抗核苷酸病毒藥物線粒體毒性模型研究

張?jiān)u滸等［35-36］觀察了喜馬拉雅旱獺喂服抗病毒核苷類藥物齊多夫定后藥物對旱獺線粒體的毒性，結(jié)果提示喜馬拉雅旱獺對陽性藥物線粒體毒性的反應(yīng)與美洲旱獺一致，初步提示喜馬拉雅旱獺可以替代美洲旱獺作為我國抗乙肝和艾滋病藥物的毒性評價(jià)動(dòng)物，有望成為具有我國知識(shí)產(chǎn)權(quán)的新的動(dòng)物模型。

4.4 喜馬拉雅旱獺心血管疾病模型研究

李亞芬等［37］連續(xù)16周給喜馬拉雅旱獺喂養(yǎng)高膽固醇飼料后誘導(dǎo)高膽固醇血癥和動(dòng)脈粥樣硬化，觀察喂養(yǎng)HCD后喜馬拉雅旱獺血脂、脂蛋白和apo的影響、主動(dòng)脈、腦動(dòng)脈和冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積和組織病灶特征、免疫組化分研究動(dòng)脈粥樣硬化病灶部位巨噬細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞α肌動(dòng)蛋白變化。研究結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組旱獺體重和總膽固醇水平明顯高于對照組（P＜0.05），但是甘油三酯水平兩組之間沒有差異；主動(dòng)脈未發(fā)現(xiàn)明顯病變。本研究提示，喜馬拉雅旱獺對高膽固醇、高脂飼料誘導(dǎo)的動(dòng)脈粥樣硬化病變具有抵抗力。

5 展望

5.1 喜馬拉雅旱獺雖屬青藏高原鼠疫自然疫源性宿主動(dòng)物，野生喜馬拉雅旱獺經(jīng)過嚴(yán)格的檢疫、驅(qū)蟲等有效的監(jiān)測和防疫措施，引入到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行人工飼養(yǎng)和繁育，經(jīng)過一個(gè)冬眠周期，從鼠疫防治學(xué)科理論和實(shí)踐上都證明人工飼養(yǎng)的旱獺不會(huì)發(fā)生鼠疫的染疫和傳播。另外，科學(xué)證實(shí)鼠疫不會(huì)發(fā)生垂直傳播，人工飼養(yǎng)條件下親獸繁育的后代旱獺就不會(huì)發(fā)生鼠疫。因此，只要建立科學(xué)的旱獺飼養(yǎng)繁育規(guī)范，就可以保證不會(huì)引發(fā)鼠疫的生物安全問題；從鼠疫防治的長遠(yuǎn)意義上，旱獺人工飼養(yǎng)繁育并實(shí)行特許經(jīng)營許可管理，實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化后，可以滿足市場對旱獺產(chǎn)品的需求，人類再不會(huì)去捕捉和獲取野外的旱獺，從而切斷了鼠疫傳染病發(fā)生的傳播途徑，扭轉(zhuǎn)當(dāng)前鼠疫防治工作中禁捕旱獺但禁而不止的被動(dòng)局面，將從根本上對我國防治鼠疫工作做出極大的貢獻(xiàn)。

5.2 喜馬拉雅旱獺作為青藏高原特有野生動(dòng)物，在生命科學(xué)領(lǐng)域具有特別的科學(xué)研究價(jià)值，尤其在人類乙肝、艾滋病、鼠疫等重大傳染病的動(dòng)物模型、肝癌研究、新藥研發(fā)等方面具有重大的應(yīng)用前景，對我國重大傳染病防治工作的基礎(chǔ)研究具有重要的支撐作用，有必要對其進(jìn)行系統(tǒng)地人工飼養(yǎng)繁育、純系培育及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化研究，最終培育具有我國知識(shí)產(chǎn)權(quán)的新型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。

5.3 美洲旱獺已在美國和歐洲成功進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化，也已成功建立了人類乙肝的動(dòng)物模型，但由于乙肝已在歐美國家得到了有效控制，已經(jīng)不再是歐美國家的醫(yī)學(xué)研究重點(diǎn)，歐美國家已逐漸削減了投入，因此我國作為乙肝大國，乙肝的防治研究工作在今后二十年至三十年間，將是我國面臨的重大問題，只有依靠我國的自主研發(fā)，才能解決。美洲旱獺作為抗核苷酸藥物線粒體毒性的評價(jià)模型，由于美洲旱獺也存在鼠疫問題，在動(dòng)物進(jìn)出口方面，受到極大的限制。我國是乙肝和艾滋病等重大傳染病的高發(fā)國家，在對此類疾病的基礎(chǔ)研究和新藥研發(fā)等方面受到技術(shù)制約，造成了我國至今尚無任何一種具有獨(dú)立自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的用于乙肝、艾滋病等重大傳染病的藥物，完全依賴國外進(jìn)口，給國家利益和人民的健康保護(hù)造成巨大損害。經(jīng)過對喜馬拉雅旱獺多年的研究，我國已經(jīng)具備了打破此種技術(shù)壟斷的資源優(yōu)勢和技術(shù)力量，喜馬拉雅旱獺的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化研究完成后可以替代美洲旱獺開展人類乙肝、艾滋病、鼠疫等重大傳染病的基礎(chǔ)和應(yīng)用研究。因此，開展喜馬拉雅旱獺的人工飼育和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化研究、建立產(chǎn)學(xué)研一體化的科技服務(wù)平臺(tái)等具有重大意義。

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Research progress on domestication of Marmota himalayana

LIU Hai-qing，F(xiàn)AN Wei，ZHANG Jing-xiao，LIU Ba-rui，ZHANG Fa-rong，JIA Luo，TAO Yuan-qing
（Qinghai Institute for Endemic Disease Prevention and Control，Xi’ning 811602，China）

The Himalayan marmot is unique wildlife resources of the Qinghai-Tibet plateau，because of its biological characteristics is widely used in biomedical research.According to the biological characteristics of the Himalayan marmot and quality control standards of laboratory animals，it was domesticated on the continuous research.This paper reviews research progress in recent years，to improve the understanding of the Himalayan marmot and promote its basic and applied research，let it become a laboratory animals recently.

Marmota himalayana；Domestication；Method and technique；HBV

R332

A

1671-7856（2015）11-0064-05

10.3969.j.issn.1671-7856.2015.11.014

國家自然科學(xué)地區(qū)基金（31160436）。

劉海青（1971-），女，主管醫(yī)師，學(xué)士，主要研究方向：醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，E-mail：415328482@qq.com。

陶元清，研究方向：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理和動(dòng)物質(zhì)量控制及野生動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化研究，E-mail：tyq001@126.com。

﹞2015-10-10