劉艷春 (唐山市工人醫(yī)院血液科，河北 唐山 063000)

急性淋巴細(xì)胞白血病老年發(fā)病率僅占14%〔1〕。由于老年人主動(dòng)接受診斷的人較少，且缺乏快速準(zhǔn)確的診斷方法，故老年急性淋巴細(xì)胞白血病常常被人們忽視。急性淋巴細(xì)胞白血病免疫分型包括B型、T型和B/T混合型，不同年齡階段細(xì)胞表面分子特征不一樣，可為老年急性淋巴細(xì)胞白血病診斷提供依據(jù)〔2〕。本文擬分析老年急性淋巴細(xì)胞白血病患者外周血淋巴細(xì)胞表型，從中找出老年患者的發(fā)病特征，為臨床診斷提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 資料和標(biāo)本 選擇2011年1月至2013年11月來(lái)我院接受治療的老年急性白血病患者55例，納入標(biāo)準(zhǔn)〔3〕:(1)骨髓穿刺，骨髓涂片結(jié)果為陽(yáng)性;(2)免疫分型檢測(cè)診斷為急性白血病;(3)生化檢查血清乳酸蛋白和血尿酸水平均升高;(4)外周血涂片以原始和幼稚淋巴細(xì)胞為主，骨髓象有白血病細(xì)胞;(4)年齡≥60歲。排除標(biāo)準(zhǔn)〔4〕:(1)年齡＜60歲;(2)伴發(fā)其他類(lèi)型的白血病;(3)有家族遺傳史;(4)外周血涂片未見(jiàn)原始和幼稚淋巴細(xì)胞。男27例，女28例，平均年齡(68.2±11.7)歲。抽取所有患者靜脈血，并且分離外周血淋巴細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞儀分析。

1.2 外周血淋巴細(xì)胞制備 將外周血用完全1640按1∶2稀釋?zhuān)缓筝p輕加到分離液(貨號(hào):170891-01，Pharmacia)上，注意不要將兩者混合，比例是2∶1。1 500 r/min離心10 min，20℃ ～25℃。可見(jiàn)分為三層，中間一層白色為淋巴細(xì)胞。輕輕吸取淋巴細(xì)胞層(不吸取下面的分離液)，加入到6～8 ml 1640中洗脫;1 500 r/min離心10 min;去掉上清，加6～8 ml 1640再洗脫;1 500 r/min離心10 min，去上清，用磷酸鹽緩沖液(PBS)重懸底部細(xì)胞即為外周血淋巴細(xì)胞。

1.3 流式細(xì)胞檢測(cè) 所有患者的細(xì)胞用PBS重懸使細(xì)胞濃度為1×106/ml，然后用3%的甲醛固定，PBS洗滌3次后，按照一定體積加入相應(yīng)的抗體，37℃孵育1 h，然后PBS洗滌3次后上機(jī)檢測(cè)。所有熒光標(biāo)記的抗CD3(貨號(hào):ab1669)、CD2(貨號(hào):ab131276)、CD4(貨號(hào):ab25475)、CD7(貨號(hào):ab3121)、CD5(貨號(hào):ab24873)、CD19(貨號(hào):ab31947)、CD79a(貨號(hào):ab3121)、CD20(貨號(hào):ab9475)和 CD10(貨號(hào):ab951)、Ig(SmIg)(貨號(hào):ab10558)單克隆抗體均購(gòu)于Abcam公司。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料均采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 淋巴細(xì)胞免疫表型情況 55例老年急性白血病患者中有35例(63.64%)是B型淋巴細(xì)胞白血病，9例(16.36%)T型(CD4)淋巴細(xì)胞白血病，11例(20.00%)B/T混合型淋巴細(xì)胞白血病，其中B型顯著多于T型(χ2=25.606，P=0.000)。

2.2 B型免疫表型分化抗原情況 55例老年急性白血病患者中有46例表現(xiàn)出B型淋巴細(xì)胞分化抗原表達(dá)異常，B型淋巴細(xì)胞分化抗原表達(dá)異?；颊咧杏?3例(71.74%)CD19陽(yáng)性，18例(39.13%)CD79a陽(yáng)性，2例(4.35%)CD20陽(yáng)性和3例(6.52%)CD10陽(yáng)性。

2.3 T型免疫表型分化抗原情況 55例老年急性白血病患者中有20例表現(xiàn)出T型淋巴細(xì)胞分化抗原表達(dá)異常。T型淋巴細(xì)胞分化抗原表達(dá)異?；颊咧杏?例(25.00%)CyCD3陽(yáng)性，19例(95.00%)CD2陽(yáng)性，18例(90.00%)CD4陽(yáng)性，2例(10.00%)CD7陽(yáng)性，2例(10.00%)CD5陽(yáng)性。

3 討論

臨床上，急性淋巴細(xì)胞白血病典型病例的診斷主要是通過(guò)病史、血象(粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞比例)和骨髓象(骨髓涂片和細(xì)胞化學(xué))等進(jìn)行〔5〕，但有些病例常常被誤診，特別是老年淋巴細(xì)胞白血病病例〔4〕。不易確診的病例常與貧血、惡性腫瘤骨髓瘤、風(fēng)濕性類(lèi)風(fēng)濕、傳染性單核細(xì)胞增多癥、傳染性淋巴細(xì)胞增多癥等疾病難以區(qū)分，誤診率較高。近年來(lái)，免疫分型成為診斷急性細(xì)胞白血病的一種新的有效診斷方法，根據(jù)免疫分型，可將急性淋巴細(xì)胞白血病分成B型急性淋巴細(xì)胞白血病(CD19、CD22、CD79a、CD10陽(yáng)性)和T型急性淋巴細(xì)胞白血病(CD3、CD7、CD4、CD8陽(yáng)性)，且這種診斷方法已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用〔6～8〕。此外，以往骨髓象診斷的標(biāo)本是通過(guò)骨髓穿刺取骨髓標(biāo)本進(jìn)行分析，給患者帶來(lái)巨大痛苦;而免疫分型只需要抽取外周血進(jìn)行分析，簡(jiǎn)單易行，在很大程度上減少了患者的疼痛。

免疫系統(tǒng)中淋巴細(xì)胞(B和T細(xì)胞)除在脾和淋巴系統(tǒng)外，還大量游離于外周血中，這提示外周血淋巴細(xì)胞表型可能也能反映淋巴細(xì)胞免疫分型。陶慧等〔9〕發(fā)現(xiàn)B類(lèi)型和T類(lèi)型比例無(wú)顯著差異，且CD34表型為主。馬順高等〔10〕分析所有淋巴細(xì)胞均表達(dá)淋巴系抗原。巫翠萍等〔7〕對(duì)35例急性淋巴細(xì)胞白血病患者研究發(fā)現(xiàn)22例為B型，13例為T(mén)型，且B型主要以CD19為主，T型主要以CD7為主。但較少人對(duì)老年急性淋巴細(xì)胞白血病淋巴細(xì)胞表型特征進(jìn)行分析，本研究發(fā)現(xiàn)老年急性淋巴細(xì)胞白血病主要以B型類(lèi)型為主，且以CD19和CD79a陽(yáng)性為主。揭示了老年急性白血病患者免疫表型特征，為老年急性白血病診斷提供了科學(xué)參考。

綜上所述，本文較系統(tǒng)地分析出了老年急性淋巴細(xì)胞白血病淋巴細(xì)胞免疫表型特征，但研究對(duì)象數(shù)量較少，還需要收集更多患者的外周血淋巴細(xì)胞進(jìn)行分析。但可初步表明對(duì)老年患者外周血淋巴細(xì)胞免疫表型的檢測(cè)分析可能會(huì)成為一種快速老年急性淋巴細(xì)胞白血病的潛在診斷方法。

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