李小江 廣東省食品藥品監(jiān)督管理局審評(píng)認(rèn)證中心 （廣東 510000）

0.前言

膠體金試劑由于其快速、便捷、不需特殊設(shè)備、結(jié)果判斷直觀使其在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域得到了迅猛的發(fā)展，特別是在床旁診斷和家庭使用中發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用。該類產(chǎn)品生產(chǎn)廠家眾多，大小參差不齊，產(chǎn)品質(zhì)量水平差距也較大。該類產(chǎn)品審評(píng)目前在國(guó)內(nèi)沒(méi)有統(tǒng)一的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和相關(guān)指南，下面結(jié)合筆者多年的審評(píng)經(jīng)驗(yàn)對(duì)審評(píng)中的重點(diǎn)問(wèn)題進(jìn)行分析。

1.適用范圍

本文所述適用于依據(jù)《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5 號(hào)）（以下簡(jiǎn)稱《辦法》）管理類別為Ⅱ類的、基于抗原抗體反應(yīng)原理的膠體金免疫層析法進(jìn)行定性檢測(cè)的體外診斷試劑（盒）。其中所述“定性”是指只給出陰性或陽(yáng)性（有反應(yīng)或無(wú)反應(yīng)、是或非、有或無(wú)、正?；虍惓＃﹥煞N可能的結(jié)果。至于定量、半定量檢測(cè)試劑（盒）不在本文討論范圍之內(nèi)。

2.產(chǎn)品技術(shù)要求

產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》和《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫(xiě)指導(dǎo)原則》的相關(guān)規(guī)定。試劑（盒）性能指標(biāo)主要包括：外觀、膜條寬度、液體移行速度、最低檢測(cè)限（分析靈敏度）、特異性、重復(fù)性、批間差等。檢驗(yàn)方法中應(yīng)明確說(shuō)明采用的參考品/標(biāo)準(zhǔn)品、樣本制備方法、使用的試劑批次和數(shù)量、試驗(yàn)次數(shù)、計(jì)算方法。下面對(duì)幾個(gè)關(guān)鍵性能指標(biāo)的關(guān)注點(diǎn)進(jìn)行說(shuō)明：

2.1 最低檢測(cè)限（分析靈敏度）

檢出限是定性檢測(cè)試劑(盒)的一項(xiàng)關(guān)鍵指標(biāo)，其濃度點(diǎn)的選擇應(yīng)符合臨床實(shí)際診斷意義。為了避免在臨床應(yīng)用時(shí)出現(xiàn)過(guò)多的“假陽(yáng)性”結(jié)果，企業(yè)在確定該產(chǎn)品的檢出限時(shí)應(yīng)結(jié)合其實(shí)際的臨界值，建議不應(yīng)把兩者濃度差設(shè)定的過(guò)大。在評(píng)價(jià)該項(xiàng)指標(biāo)時(shí)，不但要驗(yàn)證檢出限濃度點(diǎn)的陽(yáng)性符合率情況，還要驗(yàn)證陰性參考品的符合情況。如申報(bào)產(chǎn)品有相應(yīng)的國(guó)家參考品，則企業(yè)內(nèi)部陽(yáng)性/陰性參考品應(yīng)參考國(guó)家參考品的項(xiàng)目設(shè)置。在不低于國(guó)家參考品要求的前提下，申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品性能驗(yàn)證的實(shí)際情況自行設(shè)置合理的企業(yè)內(nèi)部參考品。申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)內(nèi)部陽(yáng)性/陰性參考品的來(lái)源、抗體濃度等信息進(jìn)行精確的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，并提交詳細(xì)的驗(yàn)證資料。

2.2 分析特異性

（1）交叉反應(yīng)

對(duì)抗原結(jié)構(gòu)相近或臨床癥狀相似的其他相關(guān)抗體血清進(jìn)行交叉反應(yīng)研究。申請(qǐng)人應(yīng)提交所有用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體來(lái)源、濃度確認(rèn)等信息。

（2）干擾物質(zhì)

對(duì)樣本中常見(jiàn)的內(nèi)源性干擾物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，如溶血、高脂、黃疸等，說(shuō)明樣本的制備方法及干擾實(shí)驗(yàn)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，確定可接受的干擾物質(zhì)極限濃度。

2.3 重復(fù)性

檢測(cè)重復(fù)性指標(biāo)時(shí)建議采用臨界值附近的樣品進(jìn)行多次檢測(cè)，然后計(jì)算同一份樣品多次檢測(cè)的結(jié)果或其精確性。在分析試劑重復(fù)性時(shí)，不應(yīng)使用強(qiáng)陽(yáng)性樣品或明顯陰性的樣品，否則無(wú)法客觀地評(píng)價(jià)其檢測(cè)效果。

2.4 批間差

取三個(gè)批號(hào)的試紙，每個(gè)批號(hào)抽取相同數(shù)量，按照說(shuō)明書(shū)步驟操作，對(duì)重復(fù)性進(jìn)行檢測(cè)，三個(gè)批號(hào)測(cè)試條的結(jié)果應(yīng)一致，顯色度均一。

3.產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

3.1 產(chǎn)品名稱

試劑（盒）通用名稱由三部分組成：被測(cè)物名稱、用途、方法或原理。例如：人絨毛膜促性腺激素（HCG）檢測(cè)試劑（膠體金法）。

3.2 預(yù)期用途

第一段內(nèi)容詳細(xì)說(shuō)明產(chǎn)品的預(yù)期用途，如試劑（盒）用于體外定性檢測(cè)人血清、血漿、全血、尿液等樣本的被測(cè)物水平，適用的樣本類型應(yīng)結(jié)合實(shí)際的臨床研究情況進(jìn)行確認(rèn)。

第二段內(nèi)容說(shuō)明與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥及背景情況，說(shuō)明相關(guān)的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法等。

3.3 主要組成成分

（1）應(yīng)說(shuō)明試劑(盒)包含組分名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息。（2）試劑(盒)中不包含但對(duì)該項(xiàng)檢測(cè)必須的組分，企業(yè)應(yīng)明確其相關(guān)信息。（3）試劑(盒)中各組分不同批號(hào)間如果可以互換，應(yīng)明確說(shuō)明并提交相關(guān)驗(yàn)證材料。

3.4 儲(chǔ)存條件及有效期

（1）對(duì)試劑(盒)的效期穩(wěn)定性、開(kāi)封穩(wěn)定性等信息做詳細(xì)介紹。包括環(huán)境溫濕度、避光條件等。（2）開(kāi)封后未使用產(chǎn)品允許暴露于空氣中的溫濕度及期限等條件予以明確。（3）不同組分保存條件及有效期不同時(shí)，應(yīng)分別說(shuō)明，產(chǎn)品總有效期以其中最短的為準(zhǔn)。

注：保存條件不應(yīng)有模糊表述，如“常溫”、“室溫”。穩(wěn)定期限建議以月或日為單位。

3.5 樣本要求

重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：（1）樣本采集前對(duì)患者的要求：如采集時(shí)間、采集順序等，是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響。（2）樣本采集：說(shuō)明采集方法及樣本類型，如有血漿或全血樣本，應(yīng)注明對(duì)抗凝劑的要求。（3）樣本處理及保存：樣本處理方法、保存條件及期限、運(yùn)輸條件等。冷藏/冷凍樣本檢測(cè)前是否須恢復(fù)室溫、凍融次數(shù)、對(duì)儲(chǔ)存樣本的添加劑要求等。（4）已知的干擾物。

3.6 檢驗(yàn)方法

（1）詳細(xì)說(shuō)明試驗(yàn)原理、方法，必要時(shí)可采用圖示方法描述。（2）應(yīng)明確試驗(yàn)環(huán)境溫濕度、測(cè)試時(shí)間(如觀察時(shí)間、失效時(shí)間等)，以及樣本的復(fù)溫要求等試驗(yàn)過(guò)程中的注意事項(xiàng)。不同型號(hào)產(chǎn)品，加樣方法如有差異，建議分別以圖示方式描述清楚。

3.7 檢驗(yàn)結(jié)果的解釋

詳細(xì)描述對(duì)檢測(cè)結(jié)果的判定(無(wú)效、陰性、陽(yáng)性等)，建議結(jié)合不同情況加以圖示說(shuō)明。

3.8 檢驗(yàn)方法局限性

綜合產(chǎn)品的預(yù)期用途、臨床背景、檢測(cè)方法及適用范圍等信息，對(duì)可能出現(xiàn)的局限性進(jìn)行相關(guān)說(shuō)明，舉例如下：

（l）本產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，不應(yīng)作為臨床診治的唯一依據(jù)，對(duì)患者的臨床管理應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室檢查、治療反應(yīng)等信息綜合考慮。（2）本產(chǎn)品檢測(cè)原理為基于抗原抗體反應(yīng)的膠體金免疫層析法，可能會(huì)受到一些特殊樣本的影響而導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。（3）高濃度樣本可能會(huì)出現(xiàn)H00K 效應(yīng)而導(dǎo)致假陰性，應(yīng)將其稀釋后再檢測(cè)。應(yīng)注明對(duì)稀釋液的要求、最佳或最大稀釋比例。（4）建議對(duì)申報(bào)試劑臨床研究中的病例人群特征進(jìn)行說(shuō)明，并對(duì)適用人群的性別、年齡、地域等特征進(jìn)行明示。

3.9 注意事項(xiàng)

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：（1）本試劑(盒)的檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。（2）由于方法學(xué)或抗體特異性等原因，使用不同生產(chǎn)商的試劑對(duì)同一份樣本進(jìn)行檢測(cè)可能會(huì)得到不同的測(cè)試結(jié)果，因此，在病程監(jiān)測(cè)過(guò)程中，用不同試劑檢測(cè)所得結(jié)果不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯(cuò)誤的醫(yī)學(xué)解釋，建議實(shí)驗(yàn)室在發(fā)給臨床醫(yī)生的檢測(cè)報(bào)告注明所用試劑特征。（3）樣本：采集時(shí)間要求、與用藥的先后順序或用藥后時(shí)間間隔等；對(duì)所有樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對(duì)待。

4.臨床評(píng)價(jià)資料

生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按照《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》及《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》的要求進(jìn)行產(chǎn)品臨床試驗(yàn)，應(yīng)注意以下要求：

4.1 研究方法

有同類產(chǎn)品上市的一般選擇與已上市的同類產(chǎn)品進(jìn)行臨床研究。對(duì)比產(chǎn)品應(yīng)選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。研究對(duì)象應(yīng)包括兩組，一組是用對(duì)比試劑確定為陽(yáng)性的異常組，另一組是用對(duì)比試劑確定為陰性的對(duì)照組。

對(duì)于新研制體外診斷試劑而言，選擇適當(dāng)?shù)氖茉囌?，采用試?yàn)用體外診斷試劑與診斷該疾病的“金標(biāo)準(zhǔn)”進(jìn)行盲法同步比較。

4.2 臨床研究單位的選擇

第二類體外診斷試劑申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)選定不少于2 家（含2 家）臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)，按照有關(guān)規(guī)定開(kāi)展臨床試驗(yàn)，臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)獲得國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局資質(zhì)認(rèn)可。

4.3 病例選擇及樣本類型

4.3.1 臨床試驗(yàn)樣本量的確定：注冊(cè)申請(qǐng)人（簡(jiǎn)稱申請(qǐng)人）或/臨床研究者應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品臨床使用目的，與該產(chǎn)品相關(guān)疾病的臨床發(fā)生率確定臨床研究的樣本量。在符合指導(dǎo)原則有關(guān)最低樣本量要求的前提下，還應(yīng)符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。

①臨床研究的總樣本數(shù)至少為200 例（新研制體外診斷試劑產(chǎn)品的臨床試驗(yàn)樣本量要求同第三類產(chǎn)品）。②陽(yáng)性樣本不少于總樣本的30%。包含陽(yáng)性、陰性樣本，樣本數(shù)目應(yīng)盡可能原分布，盡可能收集/獲取臨界值的樣本，并考慮弱陽(yáng)性樣本。

4.3.2 應(yīng)明確臨床樣本的采集要求。

①盡可能采用新鮮樣品，避免貯存。②對(duì)檢測(cè)結(jié)果有明顯干擾作用的樣本，如溶血、脂血、黃疸樣本盡量避免使用。

4.3.3 試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例或樣本納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例或樣本再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說(shuō)明原因。

4.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

對(duì)臨床試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法，如陰/陽(yáng)性符合率、檢測(cè)結(jié)果一致性分析等。

對(duì)于本類產(chǎn)品對(duì)比實(shí)驗(yàn)的等效性研究，常選擇交叉四格表的形式總結(jié)兩種試劑的定性檢測(cè)結(jié)果，對(duì)定性結(jié)果進(jìn)行四格表卡方或kappa 檢驗(yàn)以驗(yàn)證兩種試劑定性結(jié)果的一致性，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測(cè)結(jié)果無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)假設(shè)，即評(píng)價(jià)考核試劑與參比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。

如直接與臨床金標(biāo)準(zhǔn)比對(duì)，則除了進(jìn)行上述統(tǒng)計(jì)分析外，還應(yīng)進(jìn)行臨床特異性、敏感性的相關(guān)分析。

4.5 結(jié)果差異樣本的驗(yàn)證

在數(shù)據(jù)收集過(guò)程中，對(duì)兩種試劑檢測(cè)結(jié)果不一致的樣本，應(yīng)采用“金標(biāo)準(zhǔn)”方法或臨床上普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的第三種同類試劑進(jìn)行復(fù)核，同時(shí)結(jié)合患者的臨床病情對(duì)差異原因及可能結(jié)果進(jìn)行分析。

5.結(jié)語(yǔ)

膠體金法定性檢測(cè)試劑審評(píng)的規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化，將幫助相關(guān)審評(píng)人員更深入地了解該類產(chǎn)品的性能特點(diǎn)，把握技術(shù)審評(píng)工作的基本要求和尺度，對(duì)產(chǎn)品安全性、有效性作出更全面系統(tǒng)的評(píng)價(jià)。同時(shí)也更有利于指導(dǎo)生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品注冊(cè)工作，促進(jìn)產(chǎn)品安全有效上市。

[1] 《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》,(國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令 第5 號(hào)),2014 年7 月30 日.

[2] 《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》，（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014 年 第16 號(hào)），2014 年9 月11 日.

[3] 《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則的通道》，（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014 年 第17 號(hào)），2014年9 月11 日.

[4] 《關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫(xiě)指導(dǎo)原則的通過(guò)》,( 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014 年 第9 號(hào)), 2014年5 月30 日.

[5] 《關(guān)于公布醫(yī)療器械注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》,( 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014 年第43 號(hào) ) , 2014 年9 月5 日.

[6] YY/T 1164-2009, 人絨毛膜促性腺激素（HCG）檢測(cè)試紙（膠體金免疫層析法）[s]. 北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2011.

[7] 中國(guó)生物制品規(guī)程[M]. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社. 2000.