彭惠芳 王輝 廖曉棠 潘靜 湖南省藥品審評中心與不良反應監(jiān)測中心 （長沙 410003）

0.引言

急性冠狀動脈綜合征是臨床上常見的心血管急癥，也是造成急性死亡的主要原因。流行病學資料顯示，我國現(xiàn)有高血壓患者達1.6 億，平均每12 秒就有一人死于心血管疾病，心血管疾病已逐漸成為我國城鄉(xiāng)居民的第一位死因。IMA 作為急性心肌缺血的早期、排除ACS 及ACS 危險性分層的輔助診斷指標，心肌缺血IMA 可在數(shù)分鐘內(nèi)升高，缺血緩解后6～12 h 左右回到基礎(chǔ)水平，檢出靈敏度高。目前全國有效注冊證約17 個，目前該產(chǎn)品性能、技術(shù)指標、評價標準及結(jié)果表達不統(tǒng)一，為規(guī)范該產(chǎn)品的注冊申報及技術(shù)審評工作，國家食品藥品監(jiān)督管理局將該指導原則列為2013 年編寫項目。

1.適用范圍

本文缺血修飾白蛋白測定試劑主要針對利用白蛋白鈷結(jié)合試驗（Albumin Cobalt Binding Test, 簡稱ACB 法)間接測算結(jié)果的試劑， 從方法學考慮，本文主要指采用比色法，利用全自動、半自動生化分析儀或分光光度計，在醫(yī)學實驗室對人體血清中缺血修飾白蛋白進行定量檢測的試劑?；谄渌椒▽W的缺血修飾白蛋白測定試劑可參照本指導原則，但應根據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，應另行選擇適用自身方法學特性的研究步驟及方法。

2.命名及檢驗原理

2.1 試劑命名

試劑名稱由三部分組成：被測物名稱：缺血修飾白蛋白；用途：測定試劑；方法或原理：ACB 法。

2.2 檢驗原理

血清白蛋白與Co2+結(jié)合后，剩余的游離Co2+與有機顯色物反應生成紅褐色產(chǎn)物，用特定波長（如：510nm）進行測定，通過吸光度的變化與校準曲線進行比較，當測試結(jié)果以ACB 值表示時，應通過相應公式轉(zhuǎn)換為 IMA 的值。

2.3 預期用途

試劑用于對人體血清中缺血修飾白蛋白進行定量檢測。

2.4 產(chǎn)品適用的相關(guān)標準（1）GB/T 191-2008 包裝儲運圖示標志

（2）GB/T 21415-2008 體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質(zhì)賦值的計量學溯源性

（3）GB/T 26124-2011 臨床化學體外診斷試劑（盒）

（4）YY/T 0316-2008 醫(yī)療器械 風險管理對醫(yī)療器械的應用

（5）YY/T 0466.1-2009 醫(yī)療器械 用于醫(yī)療器械標簽、標記和提供信息的符號

3.產(chǎn)品主要技術(shù)指標

3.1 外觀

目測檢查，符合生產(chǎn)企業(yè)規(guī)定的正常外觀要求。一般要求無雜質(zhì)、外包裝完整無破損。

3.2 凈含量

凈含量不少于標示值。

3.3 試劑空白吸光度

用試劑測定空白樣本，記錄試劑參數(shù)規(guī)定讀數(shù)點主波長下吸光度值（A），應A ≥0.6?？瞻讟颖究梢杂眉兓蛏睇}水。

3.4 分析靈敏度

用試劑測試（73.0～83.0）U/mL 范圍內(nèi)的樣本，記錄在試劑參數(shù)規(guī)定讀數(shù)點下的吸光度差值（△A），換算為78.0 U/mL 的吸光度差值（△A）即為本產(chǎn)品的分析靈敏度。

3.5 準確度

對測量準確度的評價包括：與國家標準品（和/或國際標準品）的偏差分析、方法學比對等方法，企業(yè)可根據(jù)實際情況選擇合理方法進行研究。

3.5.1 方法學比對

采用參考方法或國內(nèi)/國際普遍認為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報試劑同時檢測一批病人樣品，從測定結(jié)果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或在允許的誤差范圍內(nèi)，說明兩檢測系統(tǒng)對病人標本測定結(jié)果基本相符，對同一份臨床樣本的醫(yī)學解釋，擬申報試劑與參比方法相比不會產(chǎn)生差異結(jié)果。

在實施方法學比對前，應分別對擬申報試劑和參比試劑進行初步評估，只有在確認兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標準后方可進行比對試驗。方法學比對時應注意質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結(jié)果進行合理的統(tǒng)計學分析。相關(guān)系數(shù)r2 ≥0.95，相對偏差應不超過±15%。

3.5.2 測試白蛋白濃度

測試白蛋白濃度在（43～47）g/L 區(qū)間內(nèi)的40份健康人血清樣本的IMA 值，計算各樣本IMA/ALB(白蛋白)的值，比值的95%在1.4～1.8 范圍內(nèi)即符合要求；當比值中有3 個或3 個以上數(shù)值不在1.4～1.8 范圍內(nèi)時，應進行120 份健康人血清樣本的實驗，比值的95%在1.4～1.8 范圍內(nèi)即符合要求。

3.6 精密度

測量精密度的評估應至少包括兩個濃度水平的樣本進行，兩個濃度都應在試劑的測量范圍內(nèi)且有一定的臨床意義（醫(yī)學決定水平）。通常選用該檢測指標的正常參考值（范圍）附近和高值樣本（兩個濃度都選用高值樣品，可能致CV 偏小，也不能選用接近最低檢出限的樣品，可能致CV偏大）。

測量精密度的評價方法并無統(tǒng)一的標準可依，可根據(jù)不同的試劑特征或企業(yè)的研究習慣進行，前提是必須保證研究的科學合理性。具體實驗方法可以參考相關(guān)的CLSI-EP 文件或國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件進行。

3.7 線性范圍

建立試劑線性范圍所用的樣本基質(zhì)應盡可能與臨床實際檢測的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度達到預期測定上限的樣本，且應充分考慮多倍稀釋對樣本基質(zhì)的影響。一般在預期測定范圍內(nèi)選擇5-7 個濃度水平進行測試，線性區(qū)間應覆蓋試劑的測定范圍。

3.8 分析特異性

對樣本中常見干擾物質(zhì)，如抗凝物質(zhì)、 溶血（血紅蛋白）、高脂、高膽紅素等進行檢測，確定可接受干擾物質(zhì)的最高限值。

穩(wěn)定性研究主要包括實時穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性、機載穩(wěn)定性等，企業(yè)可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應包括研究方法的確定依據(jù)、具體方法及過程。對于實時穩(wěn)定性研究，應提供至少3 批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

本試劑用于對心肌缺血性疾病的輔助判斷，而心肌缺血時，IMA 可在數(shù)分鐘內(nèi)升高，缺血緩解后6～12 h 左右回到基礎(chǔ)水平，故樣本穩(wěn)定性的研究對于實驗的成敗也至關(guān)重要，因此，應提供對樣本貯存條件、存放時間等方面的詳細研究資料。適于冷凍保存的樣本還應對凍融次數(shù)進行評價。

3.9 校準品溯源及質(zhì)控品賦值

應參照GB/T 21415-2008《 體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質(zhì)賦值的計量學溯源性》的要求，提供企業(yè)（工作）校準品及試劑盒配套校準品定值及不確定度計算記錄，提供質(zhì)控品賦值及其靶值范圍確定的記錄。

3.10 其他需注意問題

對于適用多個機型的產(chǎn)品，應提供如產(chǎn)品說明書適用機型項中所列的所有型號儀器的性能評估資料。

4.臨床試驗要求

試劑應按照《體外診斷試劑注冊管理辦法》及《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導原則》進行臨床研究。

4.1 應選擇至少兩家省級衛(wèi)生醫(yī)療機構(gòu)

4.2 選擇境內(nèi)已批準上市的性能相近的同類產(chǎn)品作為參比試劑，采用擬申報產(chǎn)品與之進行對比試驗研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。建議企業(yè)盡量選擇方法學相同、線性范圍及精密度等性能接近的同類試劑作為參比試劑

4.3 應考慮到不同人群的差異，盡量覆蓋各類適用人群

在進行結(jié)果統(tǒng)計分析時，建議對各類人群分別進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析?？傮w樣本數(shù)不少于200 例。

4.4 樣本選擇應覆蓋線性范圍并充分考慮異常值，建議不少于80 例

血清應明確存儲條件、可否凍融等要求及避免使用的樣本。實驗中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存，如無法避免使用貯存樣品時，注明貯存條件及時間，在數(shù)據(jù)分析時應考慮其影響。

樣本中待測物濃度應覆蓋考核試劑線性范圍，且盡可能均勻分布。

另外，建議在臨床試驗中選擇部分含干擾物質(zhì)的標本進行對比研究，以從臨床角度驗證試劑的特異性。

4.5 統(tǒng)計學分析

對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應選擇合適的統(tǒng)計方法，如相關(guān)分析、線性回歸等。建議統(tǒng)計學負責人選擇合理的統(tǒng)計學方法進行分析，統(tǒng)計分析應可以證明兩種方法的檢測結(jié)果無統(tǒng)計學差異。在臨床研究方案中應明確統(tǒng)計檢驗假設(shè)，即評價考核試劑與參比試劑是否等效的標準。

4.6 結(jié)果差異樣本的驗證

在數(shù)據(jù)收集過程中，對于兩種試劑的檢測結(jié)果有明顯差異的樣本，應采用臨床上普遍認為質(zhì)量較好的第三種同類試劑進行驗證試驗，同時結(jié)合患者的臨床病情對差異原因及可能結(jié)果進行分析。

4.7 臨床試驗總結(jié)報告撰寫

根據(jù)《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導原則》的要求，臨床試驗報告應該對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并應包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。建議在臨床總結(jié)報告中對以下內(nèi)容進行詳述。

4.7.1 臨床試驗總體設(shè)計及方案描述

（1） 臨床試驗的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹；

（2）病例納入/排除標準、不同病種的預期選擇例數(shù)及健康人群的選擇標準；（3）樣本類型，樣本的收集、處理及保存等；（4）統(tǒng)計學方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結(jié)果的標準。

4.7.2 具體的臨床試驗情況

（1）考核試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機型等信息；

（2）對各研究單位的病例數(shù)、病種分布情況進行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比；

（3）質(zhì)量控制，試驗人員培訓、儀器日常維護、儀器校準、質(zhì)控品運行情況，對檢測精密度、質(zhì)控品、測量值、抽查結(jié)果評估；

（4）具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本保存、結(jié)果不一致樣本的校驗等。

4.7.3 統(tǒng)計學分析

（1）數(shù)據(jù)預處理、對異常值或離群值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改；

（2）定量值相關(guān)性和一致性分析。

4.7.4 討論和結(jié)論

對總體結(jié)果進行總結(jié)性描述并簡要分析試驗結(jié)果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結(jié)論。

5.試劑說明書、標簽、包裝標識

5.1 試劑說明書

5.1.1 產(chǎn)品名稱

（1）試劑名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。例如：缺血修飾白蛋白測定試劑（ACB 法）。

（2）英文名稱（如有）應當正確、完整、直譯，不宜只寫縮寫。

5.1.2 包裝規(guī)格

（1）不得多于標準中所列的包裝規(guī)格；

（2）注明裝量或可測試的樣本數(shù)，如××測試/盒、××ml。

5.1.3 預期用途應至少包括以下幾部分內(nèi)容

（1）說明試劑用于對人體血清中缺血修飾白蛋白進行定量檢測；

（2）強調(diào)：主要用于對心肌缺血性疾病的輔助判斷，不能作為急性心肌梗死早期識別或確診的依據(jù)。

5.1.4 檢驗原理

血清白蛋白與Co2+結(jié)合后，剩余的游離Co2+與有機顯色物反應生成紅褐色產(chǎn)物，用特定波長（如：510nm）進行測定，通過吸光度的變化與校準曲線進行比較，當測試結(jié)果以白蛋白鈷離子結(jié)合能力（ACB 值）表示時，應通過相應公式轉(zhuǎn)換為 IMA 的值。

5.1.5 主要組成成分

（1）說明試劑包含組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息，如果對于正確的操作很重要，應提供其生物學來源及其他特性；明確說明不同批號試劑中各組分是否可以互換；

（2）試劑內(nèi)如包含校準品和/或質(zhì)控品，應說明其主要組成成分及其生物學來源，校準品應注明其定值及溯源性，質(zhì)控品應有合適的靶值范圍。

5.1.6 樣本要求重點明確以下內(nèi)容

（1）樣本采集前對患者的要求：如采集時間、采集順序等，是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響；

（2）樣本采集：說明采集方法、樣本類型（血清）及添加物等；

（3）樣本處理及保存：樣本處理方法、保存條件及期限、運輸條件等。冷藏/冷凍樣本檢測前是否須恢復室溫，凍融次數(shù)等。

5.1.7 儲存條件及有效期

（1）對試劑的效期穩(wěn)定性、復溶穩(wěn)定性（如有）、開瓶穩(wěn)定性等信息做詳細介紹。包括環(huán)境溫濕度、避光條件等；

（2）不同組分保存條件及有效期不同時，應分別說明，產(chǎn)品總有效期以其中效期最短的為準。

注：保存條件不應有模糊表述，如“常溫”、“室溫”。穩(wěn)定期限應以月或日為單位。

5.1.8 適用機型

（1）說明可適用的儀器，并提供與儀器有關(guān)的必要信息以便用戶能夠作出最好的選擇；

（2）應寫明具體適用儀器的型號，不能泛指某一系列儀器。

5.1.9 檢驗方法 詳細說明試驗操作的各個步驟（1）試劑配制方法、注意事項；

（2）試驗條件：溫度、時間、儀器波長等以及試驗過程中的注意事項；

（3）校準：校準品的使用方法、注意事項，應注明推薦的儀器校準周期，以及何種情況須重新校準；

（4）質(zhì)量控制：質(zhì)控品的使用方法、對質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等。

5.1.10 產(chǎn)品性能指標

產(chǎn)品性能指標應符合企業(yè)標準要求。說明該產(chǎn)品主要性能指標，應至少包括：試劑空白吸光度、分析靈敏度、線性范圍、準確度、精密度、特異性等。

5.1.11 參考值（范圍）

（1）應注明常用樣本類型的正常參考值（范圍），并簡要說明參考值確定的方法；

（2）簡單介紹設(shè)定該參考值（范圍）所選健康人群的區(qū)域特征，建議注明以下字樣“由于地理、人種、性別及年齡等差異，建議各實驗室建立自己的參考值（范圍）”。

5.1.12 檢驗結(jié)果的解釋

說明可能對試驗結(jié)果產(chǎn)生影響的因素；說明在何種情況下需要進行試驗。

5.1.13 注意事項應至少包括以下內(nèi)容

（1） 本試劑的檢測結(jié)果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查等情況綜合考慮；

（2）使用不同生產(chǎn)商的試劑對同一份樣本進行檢測可能會存在差異；

（3）樣本：對所有樣本和反應廢棄物都應視為傳染源對待，提示操作者采取必要的防護措施；

（4）干擾因素：明確常見干擾物質(zhì)如：抗凝物質(zhì)、 溶血（血紅蛋白）、高脂、高膽紅素等對檢測結(jié)果的影響，并注明可接受的最高限值。

5.1.14 參考文獻

注明引用參考文獻，其書寫應清楚、易查詢且格式規(guī)范統(tǒng)一。

5.1.15 生產(chǎn)企業(yè)

（1）包括企業(yè)名稱、地址（注冊地址和生產(chǎn)地址不同的應分別列出）、郵政編碼、電話和傳真號碼、網(wǎng)址等；

（2）醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)許可證編號、醫(yī)療器械注冊證書編號、產(chǎn)品標準編號等。

5.2 外包裝標簽

5.2.1 生產(chǎn)企業(yè)名稱和地址

5.2.2 試劑名稱

5.2.3 批號

如試劑包含不同批號的組件，外包裝的批號應能保證每個組件的批號可從生產(chǎn)企業(yè)的生產(chǎn)記

錄中溯源。

5.2.4 包裝規(guī)格

應包含體積或復溶后的體積。

5.2.5 預期用途如試劑名稱不能反映試劑的預期用途，應提供簡要的預期用途說明。

5.2.6 體外診斷用途

儲存和處置條件。應提供在未開封狀態(tài)下可保證試劑的穩(wěn)定狀態(tài)的必要儲存條件；應規(guī)定影響穩(wěn)定性的其他條件（如適用）；應規(guī)定產(chǎn)品處置時所采取的所有其他特殊措施（如適用）。

5.2.7 失效期

應明示在規(guī)定儲存條件下的失效期；失效期應以年、月，適當時以日表示；如僅給出年月，失效期應為指定月最后一天；外包裝標簽上明示的失效期應為最早到期組件的失效期。

5.2.8 警告和預防措施

如體外診斷試劑被認為有危險性（例如：化學或生物危害性），外包裝應標有適當?shù)木疚ｋU的文字或符號，YY/T 0316 的要求適用；對于化學危害，如試劑沒有隨帶含有適當?shù)奈ｋU和安全性說明的使用說明，則應在外包裝的標簽上進行說明。

6.結(jié)語

指導原則起草過程中廣泛征求了國家局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心、相關(guān)?。ㄊ校┚?、有關(guān)醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)和臨床使用單位的意見，以充分利用各方面的信息和資源，綜合考慮指導原則的內(nèi)容，盡量保證指導原則可操作性和指導性。產(chǎn)品性能指標參考了《缺血修飾白蛋白測定試劑（盒）》行業(yè)標準報批稿。本指導原則幫助審評人員把握技術(shù)審評工作基本要求和尺度，同時為企業(yè)注冊申報提供參考。特別是該產(chǎn)品無國際標準品和國家標準品，本原則解決了部分關(guān)鍵指標定義及試驗方法。