王凌云，羅倉學(xué)

（陜西科技大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，陜西西安710021）

酸性果肉飲料中菌落總數(shù)檢測方法的探討

王凌云，羅倉學(xué)*

（陜西科技大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，陜西西安710021）

選用獼猴桃、蘋果及梨三種水果制備酸性果肉飲料。分別在這三種酸性果肉飲料不調(diào)節(jié)pH、采用碳酸鈉溶液及氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH后檢測菌落總數(shù)，探討不同處理方法對檢測結(jié)果的影響。研究結(jié)果表明，酸性果肉飲料調(diào)節(jié)pH后，菌落總數(shù)的檢出率較高，采用20%碳酸鈉溶液和12%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH，檢出率無明顯差異，且氫氧化鈉溶液縮短了檢測時(shí)間，減少了細(xì)菌污染，故選用12%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH，使檢測結(jié)果更準(zhǔn)確。

酸性飲料；菌落總數(shù)；檢測

飲料作為人們直接飲用的液體食品，不僅能提供水分，還可提供一定的營養(yǎng)成分，深受人們的喜愛。但近年來送檢飲料被檢測出微生物超標(biāo)的事件時(shí)有報(bào)道，其衛(wèi)生質(zhì)量倍受關(guān)注[1-4]。菌落總數(shù)反映食品的新鮮程度和衛(wèi)生狀況，是食品微生物檢測中最為廣泛的指標(biāo)，它是指被檢樣的食品經(jīng)過處理，在一定條件（培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、pH值、需氧性等）下培養(yǎng)，所取1 mL（g）檢樣中所含菌落的總數(shù)[5-6]。

食品中，常用氫離子活度（pH值亦稱氫離子濃度指數(shù)、酸堿值）來表示有效的酸度，pH值＜7為酸性。水果中的果酸和檸檬酸表現(xiàn)出酸性，一般而言，獼猴桃果肉飲料的pH值在3左右，蘋果果肉飲料的pH值在4左右，梨果肉飲料的pH值在4.5左右。大多數(shù)微生物最適宜生長的pH范圍為6.5～7.5，酸度較大的食品若不調(diào)節(jié)pH值，微生物的生長受到抑制，造成菌落總數(shù)檢出率低。黃維雅[7]指出，酸度較高的食品，如果直接用原液樣來檢測菌落總數(shù)，結(jié)果會(huì)偏低甚至為0。對于酸性的食醋在檢測菌落總數(shù)時(shí)，GB 4789.22—2003《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)調(diào)味品檢驗(yàn)》中明確規(guī)定：需用20%～30%滅菌碳酸鈉溶液將食醋調(diào)pH至中性后檢測[8]。而飲料中菌落總數(shù)的測定，國標(biāo)中并未提到要將酸性飲料調(diào)至中性后檢測[9]，易導(dǎo)致菌落總數(shù)的檢出率降低，不能真實(shí)反映食品被污染的程度。盧崇南等[10]研究發(fā)現(xiàn)，隨著pH的減小，食品中菌落總數(shù)的檢測結(jié)果會(huì)隨之減小，酸性較高的液體食品，需將pH調(diào)至中性，才能提高菌落總數(shù)的檢出率。沈紅[11]認(rèn)為不同pH會(huì)影響細(xì)菌的生長。邵越[12]發(fā)現(xiàn)pH較小的清涼飲料，調(diào)節(jié)pH至中性后，菌落總數(shù)的檢出率高。本試驗(yàn)針對酸性果肉飲料，探討酸性果肉飲料不同處理方式對菌落總數(shù)檢測結(jié)果的影響，為酸性果肉飲料菌落總數(shù)的準(zhǔn)確檢測提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

中華獼猴桃、蘋果和梨：西安市未央?yún)^(qū)湖北莊集貿(mào)市場。

瓊脂、酵母膏和胰蛋白胨（生化試劑）：北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司；葡萄糖（分析純）：天津市福晨化學(xué)試劑廠；磷酸二氫鉀（分析純）：天津市天新精細(xì)化工開發(fā)中心；碳酸鈉、氫氧化鈉（分析純）：天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

SW-CJ-1D型超凈工作臺(tái)：上海精科實(shí)業(yè)有限公司；XFS-280A手提式壓力蒸汽滅菌鍋：浙江新豐醫(yī)療器械有限公司；PHS-2C精密酸度計(jì)：上海三信儀表廠；HPG-280BX光照培養(yǎng)箱：哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司；BS323S電子天平：賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 酸性果肉飲料的制備

挑選新鮮的水果（獼猴桃、蘋果、梨），清洗干凈后，切成3 cm左右的塊狀，放入打漿機(jī)中打漿，加水和糖調(diào)至適宜的口感（感官評定確定），分裝于食品級小燒杯中（每杯50 g），保鮮膜封口置于冰箱4℃保存。

1.3.2 pH的預(yù)調(diào)節(jié)

用pH計(jì)分別測定獼猴桃、蘋果、梨果肉飲料的pH值，并用20%碳酸鈉溶液及氫氧化鈉溶液（7.5%、10%、12%）將以上3種果肉飲料調(diào)至中性，記錄所需的碳酸鈉溶液和氫氧化鈉溶液的用量。

1.3.3 菌落總數(shù)的測定

待測樣品（獼猴桃、蘋果、梨果肉飲料）的處理：第一個(gè)樣不調(diào)節(jié)pH；第二個(gè)樣用碳酸鈉溶液調(diào)節(jié)pH至中性；第三個(gè)樣用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至中性。其他步驟遵循GB/T 4789.2—2010《食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測定》進(jìn)行檢測。

2 結(jié)果與分析

2.1 酸性果肉飲料調(diào)至中性時(shí)碳酸鈉和氫氧化鈉的消耗量

將50g（獼猴桃、蘋果、梨）酸性果肉飲料調(diào)至中性（pH= 6.8～7.0）所消耗的碳酸鈉和氫氧化鈉的量如表1所示。因選用堿液的濃度較大，調(diào)節(jié)pH時(shí)容易過量，實(shí)際操作中可預(yù)調(diào)pH。即先取50 mL酸性果肉飲料，記錄所消耗堿液的量，正式調(diào)節(jié)樣品時(shí)，可直接加入所需的量，再適當(dāng)調(diào)節(jié)，以縮短調(diào)節(jié)pH的時(shí)間，減少污染的機(jī)會(huì)，提高檢測準(zhǔn)確率。

由表1可知，20%的碳酸鈉溶液和12%氫氧化鈉溶液調(diào)整pH所消耗的量較小，且用量基本一致便于換算原液的稀釋度。因此試驗(yàn)中選用20%碳酸鈉溶液和12%的氫氧化鈉調(diào)整酸性果肉飲料的pH。

2.2 不同酸性果肉飲料自然pH值下菌落總數(shù)的檢測結(jié)果

不同酸性果肉飲料自然pH不同，菌落總數(shù)檢測結(jié)果也不同（見表2）。不同果肉飲料間，隨著pH的降低，菌落總數(shù)的檢出率低，說明pH會(huì)影響菌落總數(shù)的測定結(jié)果。這與崔雅君等[13]研究的結(jié)果一致。

2.3 不同處理方式對菌落總數(shù)檢測結(jié)果的影響

酸性果肉飲料（獼猴桃、蘋果、梨）中菌落總數(shù)的檢測結(jié)果見表3，A～C分別代表被檢樣品未調(diào)節(jié)pH、用20%碳酸鈉調(diào)節(jié)pH及用12%的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH。由表3可知，獼猴桃和蘋果酸性較高（pH＜4）的果肉飲料調(diào)節(jié)pH后的菌落總數(shù)檢測結(jié)果明顯高于未調(diào)節(jié)pH的樣品，采用20%的碳酸鈉溶液和12%的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH檢測結(jié)果無明顯差異。

酸性果肉飲料在檢測菌落總數(shù)時(shí)，稀釋液雖能調(diào)節(jié)pH，但對于高酸性的樣品（pH為3左右），稀釋液稀釋1 000倍才能調(diào)至中性左右。A中稀釋1 000倍雖有利于細(xì)菌生長，但樣品本身的菌數(shù)可能達(dá)不到103，因而稀釋1 000倍后可能無菌落或只有幾個(gè)菌落生長。且在菌落總數(shù)計(jì)數(shù)時(shí)，若最高稀釋度的平板菌落數(shù)小于30 CFU/mL，則其菌落總數(shù)不參與最終的計(jì)算[6]，從而出現(xiàn)菌落總數(shù)結(jié)果偏低的情況。所以對于酸性較高的液體食品、食醋或飲料，需要用堿液調(diào)節(jié)pH至中性才能保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。且在采用碳酸鈉調(diào)節(jié)樣品pH時(shí)，會(huì)產(chǎn)生一定量的氣泡，影響溶液的吸取，氣泡消泡時(shí)間長，而氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH時(shí)，處理樣無氣泡，吸取量準(zhǔn)確，縮短樣品處理的時(shí)間，可減少細(xì)菌污染，這與林吉年等[14-15]的研究結(jié)果一致。因此，在測定酸性果肉飲料中的菌落總數(shù)時(shí)，選用12%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH，使檢測結(jié)果更準(zhǔn)確。

3 結(jié)論

pH值的大小會(huì)影響食品中菌落總數(shù)檢測的結(jié)果，對于酸性較高（pH＜4）的果肉飲料中菌落總數(shù)的檢測，需要將待測溶液調(diào)節(jié)pH至中性，才能得到較準(zhǔn)確的檢測結(jié)果。采用12%的氫氧化鈉調(diào)節(jié)避免了氣泡導(dǎo)致的取樣不準(zhǔn)確，操作更簡單、快捷，且測定結(jié)果與20%的碳酸鈉溶液調(diào)節(jié)的無明顯差異。因此測定酸性果肉飲料的菌落總數(shù)選用12%的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH，使檢測結(jié)果更準(zhǔn)確。

[1]劉日岫，梁學(xué)軍.送檢飲料中檢出蠟樣芽胞桿菌報(bào)告[J].內(nèi)蒙古預(yù)防醫(yī)學(xué)，1996，21（3）：121.

[2]史煜曼.2003～2004年揭陽市冷凍飲品、飲料微生物檢測結(jié)果分析[J].公共衛(wèi)生，2005，5（6）：1387-1388.

[3]王洋，蔣榮榮，周幗萍.我國首例因Asaiasp.污染而導(dǎo)致含果汁及果肉飲料變質(zhì)的案例分析[J].中國釀造，2012，31（11）：138-141.

[4]王洋，周幗萍.飲料中腸桿菌科細(xì)菌污染情況分析[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2011，37（12）：162-165.

[5]李志明.影響菌落總數(shù)測定結(jié)果的特殊因素[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2008，18（2）：371-372.

[6]中華人民共和國衛(wèi)生部.GB 4789.2—2010食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測定[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2010.

[7]黃維雅.食品中菌落總數(shù)的國標(biāo)法測定注意事項(xiàng)及快速檢測技術(shù)[J].臺(tái)灣農(nóng)業(yè)探索，2012（3）：56-59.

[8]北京市衛(wèi)生防疫站.GB/T 4789.22—2003食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn).調(diào)味品檢驗(yàn)[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003.

[9]北京市衛(wèi)生防疫站.GB/T 4789.21—2003食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn).冷凍飲品、飲料檢驗(yàn)[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003.

[10]盧崇南，劉毅，吳達(dá)勇.pH值對菌落總數(shù)檢測結(jié)果的分析[J].國際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào)，2005（15）：121-122.

[11]沈紅.細(xì)菌菌落總數(shù)檢測中存在的若干問題之探討[J].疾病監(jiān)測，2006，21（7）：388-389.

[12]邵越.影響清涼飲料菌落總數(shù)測定因素的實(shí)驗(yàn)報(bào)告[J].上海預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，1996，8（6）：256.

[13]崔雅君，楊佳玲，王洪.pH值對食醋微生物檢驗(yàn)的影響[J].檢疫檢驗(yàn)，2002（7）：22-24.

[14]林吉年.食醋在微生物檢驗(yàn)中快速調(diào)節(jié)pH值的實(shí)驗(yàn)研究[J].職業(yè)與健康，2006，22（3）：191-192.

[15]楊波，李援.食醋中菌落總數(shù)測定方法探討[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2011，21（4）：1029-1030.

Detection methods of total bacterial counts in acid pulp beverage

WANG Lingyun,LUO Cangxue*
(College of Food and Biological Engineering,Shaanxi University of Science and Engineering,Xi'an 710021,China)

Acid pulp beverages were prepared using kiwi,apple and pear.The effect of different treatments(without pH adjustment,with pH adjustment by sodium carbonate solution and sodium hydroxide solution)on the total bacterial counts of beverages was investigated.The results showed that the detection rates of total bacterial counts were higher with pH adjustment,and there was no significant difference between adjustment by 20% sodium carbonate solution and 12%sodium hydroxide solution.The detection was more accurate with pH adjustment to neutral with 12%sodium hydroxide solution as the detection time was shortened and bacterial contamination was reduced.

acid beverage;total bacterial count;detection

TS201.3

A

0254-5071（2015）06-0154-03

10.11882/j.issn.0254-5071.2015.06.034

2015-04-28

西安市科技局農(nóng)業(yè)攻關(guān)項(xiàng)目（XnG2013-11-1）

王凌云（1989-），女，碩士研究生，研究方向?yàn)槭称房茖W(xué)。

*通訊作者：羅倉學(xué)（1959-），男，副教授，碩士，研究方向?yàn)槭称芳庸ぜ百Y源綜合開發(fā)利用。