張靜 張亞靜830000新疆醫(yī)科大學附屬中醫(yī)醫(yī)院病理科

CD34、α-SMA在宮頸鱗狀上皮內(nèi)瘤變間質(zhì)中的表達及意義

張靜 張亞靜
830000新疆醫(yī)科大學附屬中醫(yī)醫(yī)院病理科

目的：探討CD34、α-SMA宮頸鱗狀上皮內(nèi)瘤變間質(zhì)中的表達及意義。方法：用免疫組化方法檢測CINⅠ組15例，CINⅡ組28例，CINⅢ組34例，正常宮頸組織23例中CD34、α-SMA的表達情況。結(jié)果：CD34陽性表達率正常宮頸組織100％（23/23）、CINⅠ100％（15/15）、CINⅡ82.14％（23/28）、CINⅢ79.41％（27/34），CINⅢ、CINⅡ的CD34陽性表達率低于CINⅠ及正常宮頸組織（P＜0.05）。α-SMA陽性表達率正常宮頸組織0％（0/23）、CINⅠ13.33％（2/15）、CINⅡ78.57％（22/28）、CINⅢ88.24％（30/34）。CINⅢ、CINⅡ組織中α-SMA的陽性表達率高于CINⅠ、正常宮頸組織（P＜0.01）。結(jié)論：宮頸腫瘤形成過程中，腫瘤的間質(zhì)發(fā)生了變化。檢測CD34和α-SMA有助于宮頸鱗狀上皮內(nèi)瘤變的診斷。

宮頸鱗狀上皮內(nèi)瘤變；CD34、α-SMA；免疫組化

最新研究表明，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展并非由腫瘤實質(zhì)單方面決定，而是由腫瘤實質(zhì)、間質(zhì)兩者相互作用決定的，腫瘤性間質(zhì)細胞有免疫細胞、肌纖維母細胞等很多種，在這些間質(zhì)細胞中，最重要的是肌纖維母細胞。研究表明，腫瘤性間質(zhì)的肌纖維母細胞主要來自于活化的獲得平滑肌表型的纖維母細胞，纖維母細胞是組織間質(zhì)細胞中的未定向細胞，能夠向腫瘤相關(guān)纖維母細胞分化。CD34是標記纖維母細胞的，α-SMA是標記肌纖維母細胞的。本研究對宮頸鱗狀上皮內(nèi)瘤變間質(zhì)中的CD34、α-SMA進行檢測，觀察腫瘤形成過程間質(zhì)是否發(fā)生變化，研究其意義。

資料與方法

本院活檢及手術(shù)切除宮頸組織標本，其中CINⅠ15例，CINⅡ28例，CINⅢ34例，正常宮頸組織23例。

方法：標本收集后，首先使用10％甲醛固定，然后進行石蠟包埋，包埋完成后將其切成4 μm切片，連續(xù)切成3張，行免疫組化染色及HE染色。免疫組化染色采用S-P法，在操作的過程中嚴格按照操作規(guī)范進行，以PBS代替一抗作為陰性對照，以已知陽性的腫瘤標本作為陽性對照。免疫組化染色主要步驟：①石蠟切片脫蠟至蒸餾水。②PBS 洗3 min×2。③3％H2O2室溫孵育5～10 min，消除內(nèi)源性H2O2酶活性。④蒸餾水洗，PBS浸泡5 min。⑤切片抗原修復。⑥滴加封閉用血清（5％～10％正常三羊血清）。室溫10 min。⑦傾出血清，加入一抗或一抗工作液，4℃水箱過夜和37℃孵育60 min。⑧PBS沖洗3 min× 2。⑨加生物素標記二抗，37℃孵育10～30 min。⑩PBS沖洗3 min×2?！?1每張切片加鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶溶液，10 min?！?2PBS沖洗，3 min× 3。○13每張切片加新鮮配制的DAB溶液，顯微鏡下觀察3～10 min?！?4自來水充分洗蒸餾水洗5～10 s?！?5蘇木素復染?！?6梯度乙醇脫水、二甲苯透明，樹膠封固。

結(jié)果判定：在實驗結(jié)果中，如果發(fā)現(xiàn)間質(zhì)細胞胞質(zhì)內(nèi)有棕黃色顆粒，則表示結(jié)果為陽性，如果沒有發(fā)現(xiàn)棕黃色顆粒，則結(jié)果為陰性，CD34主要表達在纖維母細胞，α-SMA主要表達在肌纖維母細胞。

統(tǒng)計學方法：對本研究中所獲得的所有數(shù)據(jù)資料均使用SPSS 15統(tǒng)計包進行統(tǒng)計學分析和處理，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié)果

CD34陽性細胞主要位于間質(zhì)內(nèi)的纖維母細胞的胞質(zhì)內(nèi)，其CD34陽性率在正常組100％（23/23）、CINⅠ100％（15/15）、CINⅡ82.14％（23/28）、CINⅢ79.41％（27/ 34）。CINⅢ、CINⅡ的陽性率低于CINⅠ及正常組（P＜0.05）。α-SMA陽性細胞主要位于間質(zhì)內(nèi)的肌纖維母細胞，陽性率正常組0％（0/23）、CINⅠ 13.33％（2/ 15）、 CIN Ⅱ 78.57％（22/28）、 CIN Ⅲ88.24％（30/34）。CINⅢ、CINⅡ的陽性率高于CINⅠ、正常組（P＜0.01）。

討論

腫瘤間質(zhì)肌纖維母細胞可促進永生上皮的轉(zhuǎn)化，會刺激上皮的增殖和惡性轉(zhuǎn)化，促進腫瘤生長[1]，促進腫瘤血管形成。肌纖維母細胞的免疫學表型為α-SMA[2]，多在創(chuàng)傷、炎癥、腫瘤等病理狀態(tài)下發(fā)生活化[3]。有學者通過研究發(fā)現(xiàn)，與正常的前列腺間質(zhì)相比，在前列腺癌反應性間質(zhì)中，超過50％的細胞為肌纖維母細胞。

在本研究中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CD34陽性細胞主要位于間質(zhì)內(nèi)的纖維母細胞胞質(zhì)內(nèi)（屬于未活化狀態(tài)），隨著宮頸癌由CINⅠ→CINⅡ→CINⅢ→宮頸癌的逐漸進展，CD34表達缺失。α-SMA陽性細胞主要位于間質(zhì)內(nèi)的肌纖維母細胞（屬于活化狀態(tài)），而隨著病變進展，α-SMA表達獲得。所以可以觀察到隨著病變的進展，間質(zhì)中的纖維母細胞和肌纖維母細胞的一種轉(zhuǎn)化過程，有助于宮頸鱗狀上皮內(nèi)瘤變的診斷。

綜上所述，成熟的肌纖維母細胞能夠分泌細胞因子及產(chǎn)生細胞外基質(zhì)形成腫瘤生長所必需的微環(huán)境，從而促進腫瘤的生長、浸潤、轉(zhuǎn)移，肌纖維母細胞對腫瘤的早期診斷具有重要的意義[4-5]。

[1]衣明，黃榮，張金鋒，等，肌纖維母細胞及在腫瘤間質(zhì)中激活的纖維母細胞[J].中國組織工程研究與臨床康復，2011，15 （10）：1871-1874.

[2]王行富，張聲.腫瘤間質(zhì)纖維母細胞的促血管形成作用[J].國際病理科學與臨床雜志，2008，28（1）：49-52.

[3]居杰，邱雙健.腫瘤相關(guān)纖維母細胞的研究進展[J].中國癌癥雜志，2007，17（10）： 819-823.

[4]Farrow B，Rowley D，Dang T，et al.Characterization of tumor-derived pancreatic stellate cells[J].J Surg Res，2009，157（1）：96-102.

[5]Paner GP，Shen SS，Lapetino S，et al.Diagnostic utility of antibody to smoothelin in the distinction of muscularis propria from muscularis mucosae of the urinary bladder：a potential ancillary tool in the pathologic staging of invasive urothelial carcinoma[J].Am J Surg Pathol，2009，33（1）：91-98.

Expression and significance of CD34，α-SMA in mesenchyme of cervical squamous intraepithelial neoplasia

Zhang Jing，Zhang Yajing
Department of Pathology，the Traditional Chinese Medicine Hospital Affiliated to Xinjiang Medical University 830000

Objective：To explore the expression and significance of CD34，α-SMA in mesenchyme of cervical squamous intraepithelial neoplasia.Methods：Immunohistochemical method was applied to detect the expression of CD34，α-SMA in CINⅠGroup of 15 cases，CINⅡgroup of 28 cases，CINⅢgroup of 34 cases and normal cervical tissues of 23 cases.Results：The positive expression rates of CD34 in normal cervical tissues was 100％（23/23），CINⅠwas 100％（15/15），CINⅡwas 82.14％（23/28），CIN Ⅲwas 79.41％（27/34），the positive expression rate of CD34 in CINⅢand CINⅡwas lower than CINⅠand normal cervical tissues（P＜0.05）.The positive expression rate of α-SMA in normal cervical tissue was 0％（0/23），CINⅠwas 13.33％（2/15），CIN Ⅱwas 78.57％（22/28），CINⅢwas 88.24％（30/34）.The positive expression rate of α-SMA in CINⅢ，CINⅡwas higher than CINⅠand the normal cervical tissues（P＜0.01）.Conclusion：In the forming process of cervix neoplasms，tumor interstitial was changed.Detection of CD34 and α-SMA was helpful in the diagnosis of cervical squamous intraepithelial neoplasia.

Cervical squamous intraepithelial neoplasia；CD34，α-SMA；Immunohistochemistry

10.3969/j.issn.1007-614x.2015.16.72