王斌梁+李小波+孔一名+張蓉映

[摘要] 目的 探討真核細(xì)胞起始因子-4E（eIF-4E）在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）組織中的表達(dá)情況及其與預(yù)后的關(guān)系。 方法 選擇2009年1月～2010年12月溫州醫(yī)科大學(xué)附屬黃巖醫(yī)院外科手術(shù)切除的NSCLC組織60例以及30例癌旁正常組織樣本作為對(duì)照，采用免疫組化法檢測NSCLC組織以及癌旁正常肺組織中elF4E的表達(dá)。NSCLC患者術(shù)后均接受2周以上的欖香烯聯(lián)合順鉑化療，對(duì)所有患者均進(jìn)行系統(tǒng)地隨訪評(píng)價(jià)，分析eIF-4E的表達(dá)與無瘤生存期（DFS）和總生存時(shí)間（OS）的關(guān)系。 結(jié)果 eIF-4E在NSCLC癌組織中的表達(dá)率為80.00%，顯著高于正常癌旁組織（33.33%），差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）。年齡≥60歲及TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期患者的eIF-4E高表達(dá)率明顯高于年齡<60歲及分期為Ⅰ～Ⅱ期的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。eIF-4E低表達(dá)患者的DFS和OS均顯著高于高表達(dá)者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。 結(jié)論 eIF-4E基因在NSCLC組織中呈高水平表達(dá)，欖香烯聯(lián)合順鉑化療后eIF-4E低表達(dá)患者的DFS和OS明顯延長。eIF-4E高表達(dá)水平可作為NSCLC不良預(yù)后的預(yù)測因子。

[關(guān)鍵詞] eIF-4E基因;表達(dá);非小細(xì)胞肺癌;預(yù)后

[中圖分類號(hào)] R734 ? ? ? ? ?[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A ? ? ? ? ?[文章編號(hào)] 1673-7210（2015）01（a）-0012-04

Expression of eIF-4E in non-small cell lung cancer and its correlation with prognosis

WANG Binliang ? LI Xiaobo ? KONG Yiming ? ZHANG Rongying

Department of Respiratory Medicine， the Affiliated Huangyan Hospital of Wenzhou Medical University ? the First People's Hospital of Taizhou City， Zhejiang Province， Taizhou ? 318020， China

[Abstract] Objective To investigate eIF-4E expression in patients with non-small cell lung cancer （NSCLC）， and its correlation with prognosis. Methods Tumor tissues were collected from 60 NSCLC patients who underwent surgical resection from January 2009 to December 2010 in the Affiliated Huangyan Hospital of Wenzhou Medical University， and 30 adjacent normal tissues samples were also collected. The expression level of eIF-4E in NSCLC tissues and adjacent normal tissues were measured by immunohistochemical method. All the NSCLC patients after resection were subject to treatment with elemene plus cisplatin for more than 2 weeks. A systematic follow-up evaluation was also performed to investigate the correlation of eIF-4E expression level with disease-free survival （DFS） and overall survival （OS）. Results The expression rate of eIF-4E in the tumor tissues （80.00%） was significantly higher than that in adjacent normal tissues （33.33%）， the difference was statistically significant （P < 0.01）. The eIF-4E high expression rate of the patient with age≥60 years and clinical stage of Ⅲ-Ⅳ was higher than whose age<60 years and clinical stage ofⅠ-Ⅱ， the differences were statistically significant （P < 0.05）. The DFS and OS values of patients with low eIF-4E expression level were significantly larger than those of patients with high eIF-4E expression level， the differences were statistically significant （P < 0.05）. Conclusion eIF-4E is highly expressed in NSCLC tissues; the DFS and OS values of patients with low eIF-4E expression level are significantly larger. High eIF-4E expression level may be an independent predictor of poor NSCLC prognosis.

[Key words] eIF-4E gene; Expression; NSCLC; Prognosis

目前，肺癌是發(fā)病率和病死率最高的惡性腫瘤，其引起的死亡在各種癌癥導(dǎo)致的死亡中居首位，這與其腫瘤細(xì)胞侵襲性和轉(zhuǎn)移性的生物學(xué)特征密切相關(guān)[1]。非小細(xì)胞肺癌（non-small cell cancer，NSCLS）約占肺癌的80%，大部分患者發(fā)現(xiàn)患有非小細(xì)胞肺癌時(shí)已屬于晚期，因此化療是治療非小細(xì)胞肺癌的主要方法[2]。真核細(xì)胞翻譯起始因子-4E（eukaryotic initiation factor-4E，eIF-4E）是相對(duì)分子質(zhì)量25 000、堿基序列>50 kb、包括7個(gè)外顯子和6個(gè)內(nèi)含子的多肽[3]，在許多腫瘤中過度表達(dá)，并且與多種惡性腫瘤的發(fā)生、浸潤和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。eIF-4E在諸如甲狀腺癌、食管癌、前列腺癌、膀胱癌、子宮頸癌、肺癌、白血病以及膽管癌等惡性腫瘤和腫瘤旁組織中過度表達(dá)并與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移能力呈正相關(guān)。eIF-4E基因科是肺癌演進(jìn)過程中重要的標(biāo)志物，可指導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌的生物治療并為其臨床分期和預(yù)后判斷提供參考價(jià)值，在肺癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移方面有著重要的意義。本研究EIF4E基因在NSCLC的表達(dá)及其與療效及預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2009年1月～2010年12月于溫州醫(yī)科大學(xué)附屬黃巖醫(yī)院（以下簡稱“我院”）進(jìn)行外科手術(shù)切除的60例非小細(xì)胞肺癌組織樣本，同時(shí)收集30例癌旁正常組織（距離癌組織大于5 cm以上的組織）作為對(duì)照。所有患者術(shù)前均未進(jìn)行過化療或者靶向治療。根據(jù)2002年美國癌癥聯(lián)合會(huì)和國際抗癌聯(lián)盟制訂的TNM分期，Ⅰ～Ⅱ期27例，Ⅲ～Ⅳ期33例，根據(jù)2002年WHO分類標(biāo)準(zhǔn)，60例非小細(xì)胞肺癌組織中鱗癌29例，腺癌31例，低分化36例，中高分化24例。60例非小細(xì)胞肺癌組織中男31例，年齡35～83歲，平均（56.47±18.85）歲，女29例，年齡32～86歲，平均（58.75±19.23）歲。30例癌旁正常組織中男18例，年齡34～85歲，平均（58.94±19.62）歲，女12例，年齡33～81歲，平均（55.84±18.52）歲。非小細(xì)胞肺癌組織和癌旁正常組織性別、年齡等基本資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)通過，患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 ?60例患者均在術(shù)后接受2～4周期的欖香烯（大連金港制藥公司，生產(chǎn)批號(hào)：0705131）聯(lián)合順鉑（山東德州制藥廠，生產(chǎn)批號(hào)：9050212DC）化療：欖香烯：125 mg/m2，d1、d8;順鉑;30 mg/m2，d1～d3。藥物均靜脈滴注給藥，所有患者均接受至少2周的化療，對(duì)于耐受良好患者進(jìn)行3～4周期的化療。

1.2.2 檢測方法 ?將獲得標(biāo)本制成3 μm厚的石蠟切片，常規(guī)脫蠟后使用蘇木精染色和DAB顯色（北京中杉金橋生物科技有限公司），脫水后二甲苯透明并以中性樹脂封固后置于顯微鏡下觀察。

1.2.3 結(jié)果判讀方法 ?以細(xì)胞中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。免疫組化標(biāo)準(zhǔn)[5]：每例標(biāo)本均在400倍視野下選取500～1500個(gè)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度的觀察并計(jì)算陽性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。按陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度：無著色為0分;黃色為1分;棕黃色為2分;深棕色或棕褐色為3分。按陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)：0%～10%為0分，>10%～25%為1分，>25%～50%為2分，>50%～100%為3分。以按陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度得分和按陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)得分之和為最終結(jié)果。0～1分：陰性（-），2～3分：弱陽性（+），4～5分：中陽性（++），6分：強(qiáng)陽性（+++）。-～+為低表達(dá)，++～+++為高表達(dá)。

1.2.4 預(yù)后評(píng)價(jià)方法 ?無瘤生存期（DFS）[4]：從開始化療至轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)或死亡之間的時(shí)間?？偵鏁r(shí)間（OS）[4]：從開始化療至死亡或者最后1次隨訪之間的時(shí)間，最后1次隨訪時(shí)間為2014年3月20日。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 真核細(xì)胞翻譯起始因子-4E在癌組織以及正常肺組織中的表達(dá)

非小細(xì)胞肺癌組織中eIF-4E基因的陽性表達(dá)率為80.00%（48/60），顯著高于癌旁正常組織的33.33%（10/60），差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=9.38，P < 0.01）。見圖1（封四）。

2.2 真核細(xì)胞翻譯起始因子-4E的表達(dá)與患者臨床特征的關(guān)系

非小細(xì)胞肺癌組織中eIF-4E表達(dá)與患者的性別、病理類型和分化程度無關(guān)（P > 0.05），年齡≥60歲及TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期患者的eIF-4E高表達(dá)率明顯高于年齡<60歲及分期為Ⅰ～Ⅱ期的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。提示IF-4E表達(dá)與患者的年齡及臨床病理分期有關(guān)。見表1。

2.3 真核細(xì)胞翻譯起始因子-4E的表達(dá)與患者的無瘤生存期和總生存時(shí)間關(guān)系分析

與eIF-4E基因高表達(dá)患者比較，eIF-4E基因低表達(dá)患者的DFS和OS均延長，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見圖2、3。

圖2 ? 真核細(xì)胞翻譯起始因子-4E的表達(dá)與患者無瘤生存期的關(guān)系

圖3 ? 真核細(xì)胞翻譯起始因子-4E的表達(dá)與患者總生存時(shí)間的關(guān)系

3 討論

肺癌是發(fā)病率和病死率增長最快的惡性腫瘤，目前在世界范圍內(nèi)已成為嚴(yán)重危害人類生命和健康的主要疾病，肺癌的發(fā)病率和病死率在男性中均占第一位，在女性中，肺癌的發(fā)病率僅次于乳腺癌。腫瘤的形成是一個(gè)復(fù)雜的多階段連續(xù)過程，受多種因素的影響。目前對(duì)肺癌的治療仍缺乏有效的方法，對(duì)于失去手術(shù)機(jī)會(huì)的患者來說藥物治療的有效性緊密關(guān)聯(lián)著其生存質(zhì)量及生存期。對(duì)肺癌的轉(zhuǎn)移機(jī)制、預(yù)后影響因素和藥物對(duì)肺癌細(xì)胞作用的分子機(jī)制的研究可為肺癌的藥物治療提供依據(jù)[6]。eIF-4E是真核細(xì)胞翻譯起始和調(diào)控的核心成分，它與mRNA 5'端帽子結(jié)構(gòu)結(jié)合，在蛋白質(zhì)翻譯起始過程中發(fā)揮重要作用[7]。有研究進(jìn)展表明eIF-4E是影響腫瘤的生長、侵襲、演進(jìn)等生物學(xué)行為的腫瘤相關(guān)因子，在許多腫瘤中過度表達(dá)且與多種惡性腫瘤的發(fā)生、浸潤和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[8]，其過度表達(dá)成為腫瘤惡性改變及判斷其惡性程度的一個(gè)重要分子標(biāo)志，可為抗腫瘤治療提供新思路[9-10]。通過反義mRNA介導(dǎo)降低eIF-4E的表達(dá)可以抑制癌細(xì)胞的腫瘤特性，有研究表明，可以通過降低eIF-4E的表達(dá)抑制頭頸部惡性腫瘤細(xì)胞、肝癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞等多種腫瘤細(xì)胞的生長、侵襲[11-13]。欖香烯是在中藥姜科植物溫莪術(shù)的揮發(fā)油中提取的有效成分，是由α-欖香烯、β-欖香烯、δ-欖香烯和γ-欖香烯組成的復(fù)合物，是臨床上一種被廣泛應(yīng)用并取得了治療效果的廣譜抗腫瘤藥物，β-欖香烯通過阻滯細(xì)胞周期和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來實(shí)現(xiàn)其在甲狀腺癌中的抗腫瘤效果[14]，在臨床上其不僅具有較強(qiáng)的抗腫瘤作用，而且可逆轉(zhuǎn)化療產(chǎn)生的多藥耐藥性[15]。目前關(guān)于eIF-4E基因在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)及其與欖香烯聯(lián)合順鉑治療非小細(xì)胞肺癌的效果與預(yù)后關(guān)系的研究甚少，明確eIF-4E基因在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)及其與欖香烯聯(lián)合順鉑治療非小細(xì)胞肺癌的效果與預(yù)后關(guān)系可為非小細(xì)胞肺癌的治療提供依據(jù)。

本研究結(jié)果顯示，eIF-4E基因在非小細(xì)胞肺癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá)，提示eIF-4E基因在非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生發(fā)展過程中可能起著重要的作用。eIF-4E的表達(dá)與患者的性別、病理類型和分化程度無關(guān)。本研究結(jié)果亦發(fā)現(xiàn)，年齡較大以及分化等級(jí)較高的非小細(xì)胞肺癌患者的eIF-4E陽性表達(dá)水平明顯增高，提示非小細(xì)胞肺癌患者的eIF-4E基因表達(dá)與其年齡和腫瘤分化程度密切相關(guān)。欖香烯順鉑聯(lián)合化療后eIF-4E低表達(dá)患者的DFS和OS均明顯延長。eIF-4E低表達(dá)患者欖香烯順鉑聯(lián)合化療效果較eIF-4E高表達(dá)患者明顯提高，提示eIF-4E低表達(dá)患者對(duì)化療更加敏感，因此eIF-4E的低表達(dá)是影響非小細(xì)胞肺癌化療效果的重要因素，eIF-4E基因的高表達(dá)可能成為非小細(xì)胞肺癌治療效果及預(yù)后不良的預(yù)測因子。欖香烯聯(lián)合順鉑化療可能通過組織有活性的eIF-4E基因的低表達(dá)抑制細(xì)胞的增長，導(dǎo)致致癌細(xì)胞的自我繁殖受阻，從而控制癌細(xì)胞進(jìn)展及擴(kuò)展eIF-4E復(fù)合物的形成，起到抑制腫瘤形成、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的目的。eIF-4E基因表達(dá)在肺癌治療效果和預(yù)后中的作用可從分子學(xué)角度找到肺癌診斷和預(yù)后的分子指標(biāo)。

綜上所述，eIF-4E基因在非小細(xì)胞肺癌組織存在過表達(dá)。欖香烯聯(lián)合順鉑化療后eIF-4E低表達(dá)患者的DFS和OS均明顯延長，因此eIF-4E基因的高表達(dá)可能成為非小細(xì)胞肺癌治療效果及預(yù)后不良的預(yù)測因子。

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（收稿日期：2014-07-11 ?本文編輯：任 ?念）