王斌梁 李小波 孔一名 張蓉映

溫州醫(yī)科大學附屬黃巖醫(yī)院浙江省臺州市第一人民醫(yī)院呼吸內科，浙江臺州318020

真核細胞起始因子-4E表達與非小細胞肺癌預后的相關性

王斌梁 李小波 孔一名 張蓉映

溫州醫(yī)科大學附屬黃巖醫(yī)院浙江省臺州市第一人民醫(yī)院呼吸內科，浙江臺州318020

目的探討真核細胞起始因子-4E（eIF-4E）在非小細胞肺癌（NSCLC）組織中的表達情況及其與預后的關系。方法選擇2009年1月～2010年12月溫州醫(yī)科大學附屬黃巖醫(yī)院外科手術切除的NSCLC組織60例以及30例癌旁正常組織樣本作為對照，采用免疫組化法檢測NSCLC組織以及癌旁正常肺組織中elF4E的表達。NSCLC患者術后均接受2周以上的欖香烯聯(lián)合順鉑化療，對所有患者均進行系統(tǒng)地隨訪評價，分析eIF-4E的表達與無瘤生存期（DFS）和總生存時間（OS）的關系。結果eIF-4E在NSCLC癌組織中的表達率為80.00%，顯著高于正常癌旁組織（33.33%），差異有高度統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。年齡≥60歲及TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期患者的eIF-4E高表達率明顯高于年齡＜60歲及分期為Ⅰ～Ⅱ期的患者，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。eIF-4E低表達患者的DFS和OS均顯著高于高表達者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結論eIF-4E基因在NSCLC組織中呈高水平表達，欖香烯聯(lián)合順鉑化療后eIF-4E低表達患者的DFS和OS明顯延長。eIF-4E高表達水平可作為NSCLC不良預后的預測因子。

eIF-4E基因；表達；非小細胞肺癌；預后

目前，肺癌是發(fā)病率和病死率最高的惡性腫瘤，其引起的死亡在各種癌癥導致的死亡中居首位，這與其腫瘤細胞侵襲性和轉移性的生物學特征密切相關［1］。非小細胞肺癌（non-small cell cancer，NSCLS）約占肺癌的80%，大部分患者發(fā)現(xiàn)患有非小細胞肺癌時已屬于晚期，因此化療是治療非小細胞肺癌的主要方法［2］。真核細胞翻譯起始因子-4E（eukaryotic initiation factor-4E，eIF-4E）是相對分子質量25 000、堿基序列＞50 kb、包括7個外顯子和6個內含子的多膚［3］，在許多腫瘤中過度表達，并且與多種惡性腫瘤的發(fā)生、浸潤和轉移密切相關。eIF-4E在諸如甲狀腺癌、食管癌、前列腺癌、膀胱癌、子宮頸癌、肺癌、白血病以及膽管癌等惡性腫瘤和腫瘤旁組織中過度表達并與腫瘤的侵襲轉移能力呈正相關。eIF-4E基因科是肺癌演進過程中重要的標志物，可指導非小細胞肺癌的生物治療并為其臨床分期和預后判斷提供參考價值，在肺癌的復發(fā)和轉移方面有著重要的意義。本研究EIF4E基因在NSCLC的表達及其與療效及預后的關系，現(xiàn)將結果報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2009年1月～2010年12月于溫州醫(yī)科大學附屬黃巖醫(yī)院（以下簡稱“我院”）進行外科手術切除的60例非小細胞肺癌組織樣本，同時收集30例癌旁正常組織（距離癌組織大于5 cm以上的組織）作為對照。所有患者術前均未進行過化療或者靶向治療。根據(jù)2002年美國癌癥聯(lián)合會和國際抗癌聯(lián)盟制訂的TNM分期，Ⅰ～Ⅱ期27例，Ⅲ～Ⅳ期33例，根據(jù)2002年WHO分類標準，60例非小細胞肺癌組織中鱗癌29例，腺癌31例，低分化36例，中高分化24例。60例非小細胞肺癌組織中男31例，年齡35～83歲，平均（56.47±18.85）歲，女29例，年齡32～86歲，平均（58.75± 19.23）歲。30例癌旁正常組織中男18例，年齡34～85歲，平均（58.94±19.62）歲，女12例，年齡33～81歲，平均（55.84±18.52）歲。非小細胞肺癌組織和癌旁正常組織性別、年齡等基本資料比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經我院倫理委員會通過，患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 治療方法60例患者均在術后接受2～4周期的欖香烯（大連金港制藥公司，生產批號：0705131）聯(lián)合順鉑（山東德州制藥廠，生產批號：9050212DC）化療：欖香烯：125 mg/m2，d1、d8；順鉑；30 mg/m2，d1～d3。藥物均靜脈滴注給藥，所有患者均接受至少2周的化療，對于耐受良好患者進行3～4周期的化療。

1.2.2 檢測方法將獲得標本制成3μm厚的石蠟切片，常規(guī)脫蠟后使用蘇木精染色和DAB顯色（北京中杉金橋生物科技有限公司），脫水后二甲苯透明并以中性樹脂封固后置于顯微鏡下觀察。

1.2.3 結果判讀方法以細胞中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。免疫組化標準［5］：每例標本均在400倍視野下選取500～1500個腫瘤細胞進行陽性細胞染色強度的觀察并計算陽性細胞的百分數(shù)。按陽性細胞染色強度：無著色為0分；黃色為1分；棕黃色為2分；深棕色或棕褐色為3分。按陽性細胞百分數(shù)：0%～10%為0分，＞10%～25%為1分，＞25%～50%為2分，＞50%～100%為 3分。以按陽性細胞染色強度得分和按陽性細胞百分數(shù)得分之和為最終結果。0～1分：陰性（-），2～3分：弱陽性（+），4～5分：中陽性（++），6分：強陽性（+++）。-～+為低表達，++～+++為高表達。

1.2.4 預后評價方法無瘤生存期（DFS）［4］：從開始化療至轉移、復發(fā)或死亡之間的時間?？偵鏁r間（OS）［4］：從開始化療至死亡或者最后1次隨訪之間的時間，最后1次隨訪時間為2014年3月20日。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差表示，兩組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 真核細胞翻譯起始因子-4E在癌組織以及正常肺組織中的表達

非小細胞肺癌組織中eIF-4E基因的陽性表達率為80.00%（48/60），顯著高于癌旁正常組織的33.33%（10/60），差異有高度統(tǒng)計學意義（χ2=9.38，P＜0.01）。見圖1（封四）。

2.2 真核細胞翻譯起始因子-4E的表達與患者臨床特征的關系

非小細胞肺癌組織中eIF-4E表達與患者的性別、病理類型和分化程度無關（P＞0.05），年齡≥60歲及TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期患者的eIF-4E高表達率明顯高于年齡＜60歲及分期為Ⅰ～Ⅱ期的患者，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。提示IF-4E表達與患者的年齡及臨床病理分期有關。見表1。

2.3 真核細胞翻譯起始因子-4E的表達與患者的無瘤生存期和總生存時間關系分析

與eIF-4E基因高表達患者比較，eIF-4E基因低表達患者的DFS和OS均延長，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見圖2、3。

3 討論

肺癌是發(fā)病率和病死率增長最快的惡性腫瘤，目前在世界范圍內已成為嚴重危害人類生命和健康的主要疾病，肺癌的發(fā)病率和病死率在男性中均占第一位，在女性中，肺癌的發(fā)病率僅次于乳腺癌。腫瘤的形成是一個復雜的多階段連續(xù)過程，受多種因素的影響。目前對肺癌的治療仍缺乏有效的方法，對于失去手術機會的患者來說藥物治療的有效性緊密關聯(lián)著其生存質量及生存期。對肺癌的轉移機制、預后影響因素和藥物對肺癌細胞作用的分子機制的研究可為肺癌的藥物治療提供依據(jù)［6］。eIF-4E是真核細胞翻譯起始和調控的核心成分，它與mRNA 5'端帽子結構結合，在蛋白質翻譯起始過程中發(fā)揮重要作用［7］。有研究進展表明eIF-4E是影響腫瘤的生長、侵襲、演進等生物學行為的腫瘤相關因子，在許多腫瘤中過度表達且與多種惡性腫瘤的發(fā)生、浸潤和轉移密切相關［8］，其過度表達成為腫瘤惡性改變及判斷其惡性程度的一個重要分子標志，可為抗腫瘤治療提供新思路［9-10］。通過反義mRNA介導降低eIF-4E的表達可以抑制癌細胞的腫瘤特性，有研究表明，可以通過降低eIF-4E的表達抑制頭頸部惡性腫瘤細胞、肝癌細胞、乳腺癌細胞等多種腫瘤細胞的生長、侵襲［11-13］。欖香烯是在中藥姜科植物溫莪術的揮發(fā)油中提取的有效成分，是由α-欖香烯、β-欖香烯、δ-欖香烯和γ-欖香烯組成的復合物，是臨床上一種被廣泛應用并取得了治療效果的廣譜抗腫瘤藥物，β-欖香烯通過阻滯細胞周期和誘導細胞凋亡來實現(xiàn)其在甲狀腺癌中的抗腫瘤效果［14］，在臨床上其不僅具有較強的抗腫瘤作用，而且可逆轉化療產生的多藥耐藥性［15］。目前關于eIF-4E基因在非小細胞肺癌細胞內的表達及其與欖香烯聯(lián)合順鉑治療非小細胞肺癌的效果與預后關系的研究甚少，明確eIF-4E基因在非小細胞肺癌細胞內的表達及其與欖香烯聯(lián)合順鉑治療非小細胞肺癌的效果與預后關系可為非小細胞肺癌的治療提供依據(jù)。

本研究結果顯示，eIF-4E基因在非小細胞肺癌組織中呈現(xiàn)高表達，提示eIF-4E基因在非小細胞肺癌的發(fā)生發(fā)展過程中可能起著重要的作用。eIF-4E的表達與患者的性別、病理類型和分化程度無關。本研究結果亦發(fā)現(xiàn)，年齡較大以及分化等級較高的非小細胞肺癌患者的eIF-4E陽性表達水平明顯增高，提示非小細胞肺癌患者的eIF-4E基因表達與其年齡和腫瘤分化程度密切相關。欖香烯順鉑聯(lián)合化療后eIF-4E低表達患者的DFS和OS均明顯延長。eIF-4E低表達患者欖香烯順鉑聯(lián)合化療效果較eIF-4E高表達患者明顯提高，提示eIF-4E低表達患者對化療更加敏感，因此eIF-4E的低表達是影響非小細胞肺癌化療效果的重要因素，eIF-4E基因的高表達可能成為非小細胞肺癌治療效果及預后不良的預測因子。欖香烯聯(lián)合順鉑化療可能通過組織有活性的eIF-4E基因的低表達抑制細胞的增長，導致致癌細胞的自我繁殖受阻，從而控制癌細胞進展及擴展eIF-4E復合物的形成，起到抑制腫瘤形成、發(fā)展和轉移的目的。eIF-4E基因表達在肺癌治療效果和預后中的作用可從分子學角度找到肺癌診斷和預后的分子指標。

綜上所述，eIF-4E基因在非小細胞肺癌組織存在過表達。欖香烯聯(lián)合順鉑化療后eIF-4E低表達患者的DFS和OS均明顯延長，因此eIF-4E基因的高表達可能成為非小細胞肺癌治療效果及預后不良的預測因子。

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Expression of eIF-4E in non-small cell lung cancer and its correlation w ith prognosis

WANG Binliang LIXiaobo KONG Yiming ZHANG Rongying
Department of Respiratory Medicine,the Affiliated Huangyan Hospital ofWenzhou Medical University the First People's Hospital of Taizhou City,Zhejiang Province,Taizhou 318020,China

ObjectiveTo investigate eIF-4E expression in patientswith non-small cell lung cancer(NSCLC),and its correlation with prognosis.M ethodsTumor tissueswere collected from 60 NSCLC patients who underwent surgical resection from January 2009 to December 2010 in the Affiliated Huangyan Hospital ofWenzhou Medical University,and 30 adjacent normal tissues sampleswere also collected.The expression level of eIF-4E in NSCLC tissues and adjacent normal tissuesweremeasured by immunohistochemicalmethod.All the NSCLC patients after resection were subject to treatmentwith elemene plus cisplatin formore than 2 weeks.A systematic follow-up evaluation was also performed to investigate the correlation of eIF-4E expression levelwith disease-free survival(DFS)and overall survival(OS).ResultsThe expression rate of eIF-4E in the tumor tissues(80.00%)was significantly higher than that in adjacent normal tissues(33.33%),the difference was statistically significant(P＜0.01).The eIF-4E high expression rate of the patient with age≥60 years and clinical stage ofⅢ-Ⅳwas higher than whose age＜60 years and clinical stage ofⅠ-Ⅱ,the differences were statistically significant(P＜0.05).The DFS and OS values of patients with low eIF-4E expression levelwere significantly larger than those of patientswith high eIF-4E expression level,the differenceswere statistically significant(P＜0.05).ConclusioneIF-4E is highly expressed in NSCLC tissues;the DFS and OS values of patients with low eIF-4E expression level are significantly larger.High eIF-4E expression levelmay be an independent predictor of poor NSCLC prognosis.

eIF-4E gene;Expression;NSCLC;Prognosis

R734 [

]A [

]1673-7210（2015）01（a）-0012-04

2014-07-11本文編輯：任念）

浙江省臺州市黃巖區(qū)科技局基金資助項目（編號2012038）。