劉俊澤

對遺傳性腎病綜合征的基因診斷研究與討論

劉俊澤

研究討論遺傳性腎病綜合征的基因診斷。采用靶序列捕獲測序技術(shù)對遺傳性腎病的病癥進行診斷與治療。遺傳性腎病綜合征的治療方案較為復(fù)雜，而常規(guī)的治療方案沒有明顯的效果，如激素和免疫抑制劑。所以，對該類疾病的定義、分子遺傳學(xué)分類、臨床特征以及腎臟病理等相關(guān)進展需要進行理解和明確。采用靶序列捕獲測序技術(shù)，可以一次性對遺傳性NS進行檢測、診斷和治療。采用靶序列捕獲測序技術(shù)對遺傳性腎病進行診斷，可以幫助對遺傳性腎病綜合征的常見分子生物學(xué)、臨床及病理特征等進行研究，并且為建立遺傳性腎病綜合征的基因提供診斷依據(jù)。

遺傳性；腎病綜合征；基因診斷

腎小球濾過屏障組成蛋白的編碼基因或其他相關(guān)基因突變所致的腎病綜合征稱為遺傳性腎病綜合征，在臨床上大多表現(xiàn)為激素耐藥型腎病綜合征，大約在10年以后有30%～40%患兒的病情會發(fā)展為終末期腎病。隱居有無家族史，可以將疾病分為家族性和散發(fā)性兩類，依據(jù)發(fā)病年齡可以分為先天型、嬰兒型、兒童型、青少年型和成人型腎病綜合征，依據(jù)有無其他系統(tǒng)受累則可分為非系統(tǒng)性（又稱孤立性）和系統(tǒng)性腎病綜合征。此類疾病的病理類型主要為：局灶節(jié)段性腎小球硬化以及彌漫性系膜硬化。

近些年來，隨著經(jīng)濟和科技的發(fā)展，促進了分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，現(xiàn)階段，大約有18個與遺傳性腎病綜合征有關(guān)的基因被克隆和定位，在這些基因編碼蛋白中，存在大量的腎小球裂孔膈膜蛋白分子或足細胞分子。其中一些基因編碼蛋白為腎小球基膜結(jié)構(gòu)分子，另外還有一些基因編碼蛋白是足細胞發(fā)育和維持功能所必需的轉(zhuǎn)錄因子或蛋白酶，除此之外還存在一些基因編碼產(chǎn)物為溶酶體、線粒體蛋白或DNA核小體重組調(diào)節(jié)子。截止目前為止，18個與遺傳性腎病綜合征有關(guān)的基因中，有7個基因的突變被證實與非系統(tǒng)性或稱孤立性遺傳性腎病綜合征有關(guān)系，有10個基因的突變被證實與系統(tǒng)性遺傳性腎病綜合征有關(guān)系。其中腫瘤基因突變除可以引起Denys-Drash綜合征和Frasier綜合征之外，還可能引起孤立性先天性腎病綜合征或者激素耐藥型腎病綜合征[1-3]。而LAMB2的突變不但可以引起Pierson綜合征，而且可以引發(fā)孤立性先天性腎病綜合征。所以，明確不同基因突變導(dǎo)致的遺傳性腎病綜合征，可以根據(jù)不同致病基因判斷遺傳性腎病綜合征，從而可以進一步進行分子分型，有助于在臨床中對此類疾病進行正確的診斷，同時制定出有針對性的治療方法。

1　遺傳性腎病綜合征主要組成

非系統(tǒng)性又稱孤立性遺傳性腎病綜合征，主要包括：先天性腎病綜合征、嬰兒型腎病綜合征、兒童型腎病綜合征、青少年型腎病綜合征、以及成人型腎病綜合征。系統(tǒng)性遺傳性腎病綜合征主要包括：Denys-Drash綜合征、Frasier綜合征、Pierson綜合征、指甲髕骨綜合征、Fabry病、Schimke免疫－骨發(fā)育不良以及肌陣攣－腎衰綜合征。傳性腎病綜合征的治療方案較為復(fù)雜，而常規(guī)的治療方案沒有明顯的效果，所以，對該類疾病的定義、分子遺傳學(xué)分類、臨床特征以及腎臟病理等相關(guān)進展需要進行理解和明確。采用靶序列捕獲測序技術(shù)，可以一次性對遺傳性NS進行檢測、診斷和治療。

2　遺傳性腎病綜合征的檢測、診斷

2.1遺傳性腎病綜合征檢測

采用靶序列捕獲測序技術(shù)，可以一次性對遺傳性NS進行檢測、診斷和治療。2013年首次采用靶序列捕獲測序技術(shù)進行檢測SRNS的致病基因。這項研究通過PCR和Sanger測序法檢測基因變異，結(jié)果顯示，采用靶序列捕獲測序技術(shù)可以檢測出遺傳性腎病綜合征的致病基因變異，具有良好的敏感度[4]。在檢測中因為篩選標(biāo)準(zhǔn)過于嚴(yán)格，導(dǎo)致有1個基因變異被排出，但是實際上被排出的基因也屬于遺傳性腎病綜合征的致病變異基因。除此之外，采用靶序列捕獲測序技術(shù)篩選出來的可能致病的基因變異經(jīng)過研究和檢驗，全部被證實為屬于致病的基因變異，同時檢測結(jié)果顯示無假陽性。靶序列捕獲測序技術(shù)主要是針對全部的靶基因進行設(shè)計互補探針，之后通過利用探針進行捕獲靶基因，最后利用二代測序技術(shù)對捕獲的靶基因進行更深層次的測序。靶序列捕獲測序技術(shù)可以對NPHSl、NPHS2、CD2AP等多個遺傳性腎病綜合證致病變異基因進行檢測，檢測的時間在48小時以下，因此采用靶序列捕獲測序技術(shù)不但準(zhǔn)確性高而且費用較低。

2.2遺傳性腎病綜合征診斷

隨著社會經(jīng)濟的發(fā)展和科技水平的不斷進步，推動了全基因組測序、全外顯子組測序、靶序列捕獲測序技術(shù)和生物信息學(xué)分析技術(shù)的不斷發(fā)展和進步，未來將會有越來越多的遺傳性腎病綜合征的致病基因被發(fā)現(xiàn)[5]。對遺傳性腎病綜合征的基因診斷，需要將傳統(tǒng)的策略與新策略進行有效的結(jié)合，傳統(tǒng)的策略與新策略的結(jié)合不但可以幫助提高遺傳性腎病綜合征基因診斷的敏感度和特異度，而且可以節(jié)省時間，降低經(jīng)濟費用，最大限度地滿足臨床的需要。

采用靶序列捕獲測序技術(shù)對遺傳性腎病綜合征的基因進行診斷，雖然具有較高的敏感度和特異度，可以節(jié)省時間，降低經(jīng)濟費用，最大限度地滿足臨床的需要，但是靶序列捕獲測序技術(shù)只能對已知的致病基因進行檢測，而無法對未知的致病基因進行檢測。采用靶序列捕獲測序技術(shù)進行檢測，對靶區(qū)域不能進行完全的覆蓋。靶序列捕獲測序技術(shù)雖然可以對大部分靶序列進行快速的檢測，但是不能對全部的靶序列進行檢測。在檢測異常的基因拷貝數(shù)或者結(jié)構(gòu)異常的染色體時，檢測的效率較低。采用靶序列捕獲測序技術(shù)對遺傳性腎病綜合征的致病基因進行診斷時，會有假陽性結(jié)果的存在。主要是因為，雖然靶序列捕獲測序技術(shù)可以檢測出數(shù)量較多的致病基因變異，但是通過使用生物信息學(xué)分析技術(shù)進行層層篩選，可過濾掉大部分基因變異，從而篩選出可能具有致病性的基因變異。所以，只需要對篩選出的可能具有致病性的基因變異使用PCR和Sanger測序法進行驗證。經(jīng)過PCR和Sanger測序證實，部分致病基因的變異是不存在。

3　結(jié)束語

近些年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，在一定程度上提高了人們對遺傳性腎病綜合征的遺傳學(xué)特征以及分子發(fā)病機制的了解?，F(xiàn)階段采用激素以及免疫抑制劑對大部分已知的由單基因突變導(dǎo)致的遺傳性腎病綜合征患兒進行治療，但是治療的效果并不明顯。目前國內(nèi)和國外對已經(jīng)確診的遺傳性腎病綜合征，都主張不采用激素或者免疫抑制劑進行治療，而對擬診的病例必須要謹(jǐn)慎的使用激素和免疫抑制劑。所以對于早發(fā)的遺傳性腎病綜合征，例如先天性腎病綜合征、嬰兒性腎病綜合征，要對其相關(guān)的基因進行及時的檢測，保證早發(fā)的遺傳性腎病綜合征可以及時的得到明確的診斷，避免進行不必的治療和過度的治療，對患者的身體健康和身心健康造成更多的傷害。與此同時要對已經(jīng)明確的遺傳性腎病綜合征家屬提供相關(guān)的遺傳咨詢，其中包括對產(chǎn)前的基因診斷。

[1] 陳銳. 原發(fā)性腎病綜合征臨床路徑(2010年版)[J]. 中國社區(qū)醫(yī)師，2011，12(12)：16.

[2] 張宏文，張琰琴，王芳，等. WT1基因突變致慢性腎功能衰竭1例家系的遺傳咨詢和產(chǎn)前基因診斷[J]. 中國實用兒科雜志，2011，10(2)：115-117.

[3] 張宏文，丁潔. 先天性腎病綜合征的治療進展[J]. 實用兒科臨床雜志，2011，13(5)：373-374.

[4] 趙亮，丁潔，聶紅平，等. 兒童Alport綜合征眼部表現(xiàn)[J]. 眼科，2011，11(4)：271-274.

[5] 張宏文，丁潔. 遺傳性腎病綜合征的基因診斷[J]. 臨床兒科雜志，2011，12(10)：990-994.

The Discussion of Genetic Research and Diagnosis of Nephrotic Syndrome

LIU Junze, Clinical Laboratory Department of Jilin City Fengman District Hospital, Jilin 132000, China

Study and discuss genetic diagnosis of hereditary nephrotic syndrome. Target sequence capture using genetic sequencing technology nephropathy diagnosis and treatment of disease. Regimen hereditary nephrotic syndrome is more complex, while the conventional regimen no significant effects, such as hormone therapy and immunosuppressive hair hair, so the definition of the class of diseases, molecular genetics classification, clinical features, and kidneys pathology and other related developments need to be understood and clear. Target sequence capture using sequencing techniques, can make a one-time NS for genetic testing, diagnosis and treatment. Using molecular biological methods for the diagnosis of hereditary kidney disease, help biology, clinical and pathological features and other common molecular genetic study of nephrotic syndrome, to establish genetic nephrotic syndrome diagnostic thinking.

Hereditary, Nephrotic syndrome, Genetic diagnosis

R392.1

B

1674-9308（2015）09-0170-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2015.09.147

132000 吉林市豐滿區(qū)醫(yī)院檢驗科