鄧海峰　孫縵利

微波在PTAH法染心肌細(xì)胞中的應(yīng)用

鄧海峰孫縵利

目的 探索微波在PTAH法染心肌細(xì)胞中的應(yīng)用。方法 一定強(qiáng)度的微波輻射結(jié)合染液對(duì)材料進(jìn)行染色處理，并做石蠟切片觀察。結(jié)果 在硝酸酒精固定液中浸泡一定時(shí)間后用一定強(qiáng)度的微波輻射一定時(shí)間，獲得良好的效果；在蘇木精染液中浸染2 d后，用微波輻射一定時(shí)間（45℃以內(nèi)）心肌結(jié)構(gòu)十分清楚。結(jié)論 利用微波結(jié)合硝酸酒精固定液固定心肌細(xì)胞效果良好,節(jié)省時(shí)間；利用微波結(jié)合蘇木精染液染心肌細(xì)胞效果良好，節(jié)省時(shí)間。

微波；心肌細(xì)胞；閏盤(pán)

微波輻射能使液體中極性分子高頻振動(dòng)，增加液體分子間的碰撞，從而使液體內(nèi)部迅速產(chǎn)熱和某些化學(xué)反應(yīng)加快。許多作者利用此原理進(jìn)行了微波輻射固定組織、微波輻射結(jié)合固定液固定組織[1-2]等，均取得良好的效果，但還沒(méi)發(fā)現(xiàn)用微波輻射結(jié)合固定液固定心肌或用微波輻射結(jié)合染液染心肌具體方法的報(bào)道，為了拓展微波在組織切片的應(yīng)用，進(jìn)一步探討微波輻射在PTAH法染心肌中的作用和應(yīng)用的具體方法，本文具體介紹微波輻射分別結(jié)合固定液和染液在PTAH法染心肌細(xì)胞的過(guò)程中對(duì)材料進(jìn)行固定和染色的方法。

1　材料與方法

1.1材料

取雞心(大小為1 cm×0.5 cm×0.5 cm)作為實(shí)驗(yàn)材料，硝酸酒精固定液[3]，蘇木精染液，海爾牌H-R7751MS 型家用微波爐（750W，分6檔）為微波輻射儀器。

1.2方法

1.2.1取材與固定 將材料分為6個(gè)對(duì)照組，6個(gè)實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照1組固定24 h，對(duì)照2組固定30 min，對(duì)照3組固定24 h，對(duì)照4組固定24 h，對(duì)照5組固定24 h，對(duì)照6組固定24 h；實(shí)驗(yàn)1組固定30 min→微波3 min，實(shí)驗(yàn)2組固定1 h→微波3 min，實(shí)驗(yàn)3組固定24 h，實(shí)驗(yàn)4組，固定24 h，實(shí)驗(yàn)5組固定24 h，實(shí)驗(yàn)6組固定24 h。

1.2.2漂洗 70%酒精4 h→50%酒精4 h→水洗4 h以上。

1.2.3染色 對(duì)照1組浸染10 d，對(duì)照2組浸染10 d，對(duì)照3組浸染5 h，對(duì)照4組浸染1 d，對(duì)照5組浸染2 d，對(duì)照6組浸染3 d；實(shí)驗(yàn)1組浸染10 d，實(shí)驗(yàn)2組浸染10 d，實(shí)驗(yàn)3組浸染5 h→微波達(dá)5 min（低于45℃），實(shí)驗(yàn)4組浸染1 d→微波達(dá)5 min（低于45℃），實(shí)驗(yàn)5組浸染2d→微波達(dá)5 min（低于45℃），實(shí)驗(yàn)6組浸染3d→微波達(dá)5 min（低于45℃）。微波輻射的檔次是根據(jù)微波輻射時(shí)間和最高溫度設(shè)計(jì)并預(yù)先測(cè)試后而選定的。微波輻射方法同固定。對(duì)照3、4、5、6組分別染色5 h、1 d、2 d、3 d，實(shí)驗(yàn)3、4、5、6組分別染色5 h、1 d、2 d、3 d后加低檔微波5 min（溫度低于45℃）。

1.2.4水洗、脫水、透明、浸蠟、包埋 流水沖洗24 h，各級(jí)酒精脫水。常規(guī)透明與浸蠟，石蠟包埋。

1.2.5切片、貼片、烤片、脫蠟、封片 切片的厚度為6 μm，浮漂法貼片，二甲苯中脫蠟，中性樹(shù)膠封片。

2　結(jié)果

2.1對(duì)照組結(jié)果

對(duì)照1組組織染色深，細(xì)胞結(jié)構(gòu)完好，閏盤(pán)和環(huán)紋不清楚。對(duì)照2組組織染色深，細(xì)胞有收縮嚴(yán)重。對(duì)照3組組織染色淺且不均勻。細(xì)胞的各部分結(jié)構(gòu)模糊不清。對(duì)照4、5、6組組織染色淺但較為均勻，在目鏡為10倍物鏡為40時(shí)可以清楚的看到細(xì)胞核、核仁，無(wú)閏盤(pán)，環(huán)紋不清楚。

2.2實(shí)驗(yàn)組結(jié)果

實(shí)驗(yàn)1、2組細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整無(wú)損傷和收縮，閏盤(pán)清楚，環(huán)紋不清楚，實(shí)驗(yàn)2組結(jié)果比實(shí)驗(yàn)1組更理想。實(shí)驗(yàn)3、4、5、6組組織染色較深且比較均勻，細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，無(wú)損傷和收縮，細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)的分化十分明顯，在目鏡為10倍物鏡為40時(shí)可以清楚的看到細(xì)胞核、核仁等結(jié)構(gòu)，但實(shí)驗(yàn)3、4組看不到閏盤(pán)，實(shí)驗(yàn)5、6組可以清楚的看見(jiàn)閏盤(pán)，以實(shí)驗(yàn)5組效果最佳。

3　討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示染色不足的對(duì)照組無(wú)閏盤(pán),環(huán)紋不清楚，而用相同時(shí)間進(jìn)行染色然后用一定強(qiáng)度的微波進(jìn)行處理的實(shí)驗(yàn)組不僅環(huán)紋清楚，有的閏盤(pán)也比較清楚，這說(shuō)明微波對(duì)組織的染色具有促進(jìn)作用，即在PTAH法染心肌細(xì)胞中利用微波結(jié)合硝酸酒精固定液固定心肌細(xì)胞效果良好,節(jié)省時(shí)間；在PTAH法染心肌細(xì)胞中利用微波結(jié)合蘇木精染液染心肌細(xì)胞效果良好，節(jié)省時(shí)間。

[1] Loqin GR，Leonard JB，Dvorak AM. Calibration and standardization of microwave ovens for fixation of brain and peripheral nerve tissue[J]. Methods，1998，15(2)：107-117.

[2] 楚德昌. 微波在Cajal染色中的應(yīng)用[J]. 生物學(xué)雜志，2003，20(2)：35-36.

[3] 杜卓民. 實(shí)用組織學(xué)技術(shù)[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社，1998：136-137.

Application of Microwave to Stain the Myocardial Cells in the Method of PTAH

DENG Haifeng SUN Manli, Department of Physiology, Luohe Medical College, Luohe 462000, China

Objective To explore the application of microwave to stain the myocardial cells in the method of PTAH. Methods Using a certain intensity microwave combining with the stainning radiation stain the tissue, then observe the results. Results The tissues which ware soaked in nitrate alcohol fixative a certain period of time then using a certain intensity of microwave radiation a certain period of time, got good results .The tissues which ware in soaked in HE Ranye disseminated of the 2 days then using microwave radiation a certain period of time (45℃less), got good results and the structure of myocardial cells is very Clear. Conclusion Using a certain intensive microwave combination of nitric acid alcohol fixative fixing myocardial cells, got good effects and save time; using a intensive microwave combination HE Ranye staining the myocardial cells , got good effects and save time.

Microwave, Myocardial Cells, Intercalary Plate

R35

B

1674-9308（2015）09-0183-01

10.3969/j.issn.1674-9308.2015.09.157

462000 漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校生理學(xué)教研室

孫縵利，E-mail：smlsmile@163.com