利基林 馮 雁 寧淑芳 韋文娥 蔡政民 張力圖

磷脂酶C-ε1基因單核苷酸多態(tài)性及基因表達與胃癌發(fā)病風險相關(guān)性探討

利基林 馮 雁 寧淑芳 韋文娥 蔡政民 張力圖

目的 探究磷脂酶C-ε1(PLCE1)基因單核苷酸多態(tài)性及基因表達和胃癌發(fā)病風險相關(guān)性。方法 選取300例胃癌患者及同期300例正常人群, 對其DNA進行提取以及測定。結(jié)果 經(jīng)研究結(jié)果表明其PLCE1基因和胃癌存在一定的易感性相關(guān)。結(jié)論 經(jīng)研究PLCE1基因單核苷酸多態(tài)性及基因表達與胃癌發(fā)病具有一定的相關(guān)性, 并為胃癌以及相關(guān)組織來源腫瘤的預警起到了一定的作用。

磷脂酶C-ε1；單核苷酸多態(tài)性；基因表達；胃癌

就目前而言, 我國胃癌的發(fā)病率逐年呈上升趨勢, 其發(fā)生會給我國人民帶來一定的負擔, 對胃癌防治的主要方法則是及早診斷、及早治療、及早預防, 因此需要找到可以適用于臨床的腫瘤標志物［1］。本次研究對本院2005年2月～2015年3月收治的300例胃癌患者的臨床資料進行分析, 現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2005年2月～2015年3月收治的300例胃癌患者, 將其設(shè)為觀察組, 所有患者經(jīng)診斷后均為胃癌；選擇同期300例正常人群, 將其設(shè)為對照組。觀察組中男192例, 女108例, 年齡42～68歲, 平均年齡(52.7±6.7)歲；對照組中男188例, 女112例, 年齡43～69歲, 平均年齡(53.2±7.8)歲。所有研究對象均簽署了知情同意書。兩組研究對象的一般資料比較, 差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),具有可比性。

1.2 方法 選用羅氏480PGR儀對受試者的DNA進行提取,震蕩混勻裝有血液的凍存管, 時間為10 s, 隨后將其轉(zhuǎn)入到離心管中, 并向離心管中增加CL, 在對其震蕩20 s之后將上清液舍去。并向離心管中加入CL(5 ml), 并用振蕩器將其充分混勻, 使其能夠溶解, 并將上清液進行舍去, 并將離心管倒扣放置在吸水紙?zhí)帯?/p>

制備FG：蛋白酶K工作液, 使其在低溫下進行工作。同時向每個樣本離心管中加入2.5 ml FG&PK工作液, 隨后選用渦旋振蕩器將其均勻混合。在65℃恒溫進行30 min水浴,使得蛋白酶能夠發(fā)揮自身的作用。隨后對核算進行相應(yīng)的沉淀工作, 在對其進行沉淀的過程中應(yīng)先用手指進行敲打, 隨后進行5 s震蕩, 并將上清液進行舍去, 并將離心管倒扣放置在吸水紙?zhí)帯＿x用空氣干燥DNA沉淀, 時間為5 min。當核酸沉淀完成后, 選擇65℃水浴將DNA進行溶解, 時間為60 min, 從而完成核酸溶解。并通過分光光度計對DNA進行定量提取。

1.3 選取SNP位點 選擇Y、C2以及RA結(jié)構(gòu)域, 按照HapMap 數(shù)據(jù)庫所提供的SNP位點基因型頻率分布, 將最小等位基因頻率以及＜0.05的位點進行刪除后, 獲取了7個候選標簽SNP(tSNP)位點, 位于Y結(jié)構(gòu)域的則是rs3765524、rs3818432 , 位于C2結(jié)構(gòu)域的是rs2274223、rs10509670 , 位于RA結(jié)構(gòu)域的則是rs11187852、rs3781264、 rs11187866。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差s)表示, 采用t檢驗；計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 統(tǒng)計兩組間頻數(shù) 經(jīng)研究后, 其SNP片段呈現(xiàn)增大趨勢, 并選用飛行時間質(zhì)譜生物芯片系統(tǒng)對其SNP位點進行檢查, 具有較高的檢測成功率。利用HWE對SNP位點進行檢查后能夠看出, 其SNP位點的分布具有一定隨機性, 因此遵循了遺傳學定律, 兩組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05), 從而證實了分析結(jié)果較為準確。對比兩組患者的rs10509670位點基因分布, 差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05), 且兩組間rs3765524、 rs3818432位點基因分布差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05), 由此說明PLCE1基因和胃癌存在一定的易感性相關(guān)。

2.2 分析單個SNP位點遺傳模型 選取基因型、顯性以及等位基因三種模型, 從而創(chuàng)建模型并對其進行分析。在基因模型中, 其rs3765524、rs2274223、rs10509670 所存在相關(guān)的雜合基因和胃癌發(fā)病風險存在一定的相關(guān)性。而經(jīng)過顯性模型檢測后, 均確定了上述三個位點和胃癌所具有的關(guān)聯(lián)性。而經(jīng)過等位基因模型分析后, 其rs3765524 中的T等位基因以及rs10509670 中的G等位基因和胃癌發(fā)病存在一定的風險關(guān)系。除此之外, 其rs3818432中的CA 基因型也可能和胃癌發(fā)病存在一定的關(guān)系。但上述數(shù)據(jù)差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。由此能夠看出, 在創(chuàng)建遺傳模型構(gòu)建的過程中,其PLCE1基因中的rs3765524、rs2274223、rs10509670三個SNP位點多態(tài)性和胃癌易感性存在一定的關(guān)系。

3 討論

對于SNP技術(shù)而言, Massarry是采用質(zhì)譜檢測方法來對其核酸進行探究, 同時將PCR技術(shù)自身所具有靈敏度以及質(zhì)譜技術(shù)進行相互結(jié)合, 從而提升了準確度［2］。此項技術(shù)能夠靈活的選取位點, 檢測的最終結(jié)果較為準確, 且具備較高的檢測通量, 完全適應(yīng)當前醫(yī)學對基因疾病研究的發(fā)展趨勢。與此同時, 此研究選取了部分病例來對其進行檢驗, 進而確定了Massarry的真實性。

PLCE1是磷脂酶C中的一種, 在其蛋白分子中包含了Y以及C2共同的結(jié)構(gòu)域, 還包含了2個PLCE1中的RA結(jié)構(gòu)域［3］。其Y結(jié)構(gòu)域能利用折疊方法逐漸形成酶催化活動位置, C2結(jié)構(gòu)域則是磷脂結(jié)合所形成的結(jié)構(gòu)域。然而激活PLCE1蛋白的方法較多, 因此受到作用的結(jié)構(gòu)域也存在相應(yīng)的差異性。

經(jīng)過分析發(fā)現(xiàn), rs2274223是PLCE1基因中的第26外顯子, 能夠引發(fā)PLCE1蛋白在此位點所產(chǎn)生的突變現(xiàn)象。rs3765524則是PLCE1基因中的第24外顯子, 會形蘇氨酸直至異亮氨酸產(chǎn)生相應(yīng)的突變現(xiàn)象。與此同時, 此研究還找出rs10509670 位點多態(tài)性和胃癌風險所存在的關(guān)系。

綜上所述, 采用創(chuàng)建模型方法所獲取與胃癌發(fā)病風險的相關(guān)因素和PLCE1基因中的SNP位點存在一定的差異性。但將PLCE基因中的SPN位點進行聯(lián)合分析, 能夠為防治胃癌提供相關(guān)臨床依據(jù)。

［1］ 周廣宇, 孫延霞, 周立祥, 等.特發(fā)性膜性腎病與M型磷脂酶A2受體基因多態(tài)性的相關(guān)性.中華腎臟病雜志, 2013, 29(1): 1-5.

［2］ 岳志紅, 菅廣敏, 賈玫, 等.脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2酶活性水平及其I198T基因多態(tài)性與冠心病的相關(guān)性研究.中華檢驗醫(yī)學雜志, 2013, 36(2):156-160.

［3］ 顏懷軍, 周越球, 徐超, 等.中國浙江漢族成年男性Apo C-1基因型與脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2活性的關(guān)系.檢驗醫(yī)學, 2010, 25(11):879-882.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.30.015

2015-05-25］

530021 廣西醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院