姚 莉 許 博

免疫組化指標在卵巢支持-間質(zhì)細胞瘤與卵巢子宮內(nèi)膜樣腺癌鑒別診斷中的意義

姚 莉 許 博

目的 探討免疫組化指標在卵巢腫瘤診斷中的應(yīng)用價值。方法 選取病理診斷為支持-間質(zhì)細胞瘤、卵巢子宮內(nèi)膜樣腺癌的石蠟標本各44例，分別為實驗組和對照組，進行常規(guī)石蠟制片，用肌酸激酶(CK)、波形蛋白(Vimentin)、CD99、抑制素-α(Inhibin-α)進行免疫組化染色并對染色結(jié)果進行鏡下觀察分析。結(jié)果 CK、Inhibin-α及CD99在兩種不同腫瘤細胞中的表達率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，而Vimentin表達率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論 CD99、CK、Inhibin-α在卵巢支持-間質(zhì)細胞瘤和卵巢子宮內(nèi)膜樣腺癌的診斷及鑒別診斷中具有重要意義和臨床應(yīng)用價值，而Vimentin意義不大。

CD99；肌酸激酶；免疫組化

支持細胞-間質(zhì)細胞瘤又稱為卵巢睪丸母細胞瘤或者卵巢男性母細胞瘤，屬于一類較為罕見的卵巢間質(zhì)細胞腫瘤,根據(jù)腫瘤細胞類型可以分為純支持細胞腫瘤、純間質(zhì)細胞腫瘤和支持細胞-間質(zhì)細胞腫瘤三種。卵巢子宮內(nèi)膜樣腺癌是發(fā)生于卵巢的與子宮體的子宮內(nèi)膜樣癌相似的惡性腫瘤。在臨床的病理分析中有少數(shù)卵巢子宮內(nèi)膜樣癌出現(xiàn)局灶或廣泛的、與支持-間質(zhì)細胞瘤類似的區(qū)域，表現(xiàn)為小的、分化良好的、中空性的、實性的小管，或與性索類似的細胞索，容易造成診斷上的困難，特別是當腫瘤間質(zhì)黃素化且患者有男性化表現(xiàn)時常易誤診為支持-間質(zhì)細胞瘤，一旦出現(xiàn)誤診會延誤治療時間造成病情拖延。單單靠普通HE染色進行病理診斷結(jié)果并不十分準確，對于有些不典型的病例應(yīng)運用特定的敏感性高以及特異性強的免疫組化標記物來增加診斷及鑒別診斷的準確性，因此如何準確找到標記物對醫(yī)療工作者來說就是重中之重。本實驗旨在探討CK、Vimentin、CD99、Inhibin-α在卵巢支持-間質(zhì)細胞瘤與卵巢子宮內(nèi)膜樣腺癌診斷中的應(yīng)用價值及鑒別診斷意義，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 選取山東省棗莊市立醫(yī)院病理科2008年1月～2011年12月常規(guī)石蠟切片病理診斷為支持-間質(zhì)細胞瘤的石蠟標本44例，作為實驗組，選取病理診斷為子宮內(nèi)膜樣腺癌的石蠟標本44例，作為對照組，進行常規(guī)石蠟制片和免疫組織化學(xué)染色。將石蠟標本冷卻處理后切片，每個標本分別切取用于常規(guī)HE染色的片子一張和用于免疫組化染色的片子八張以備用。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法 ①常規(guī)制片：第一步是烤片：將用于HE染色的玻璃片插入至染色架中于80℃烘箱0.5 h進行烤片使石蠟溶化組織牢固貼于載玻片上；第二步是脫蠟：0.5 h后從烘箱取出，為了避免石蠟在室溫中再次凝固影響脫蠟效果必須迅速將染色架放入二甲苯中進行脫蠟5 min共三缸；第三步是水化：將脫蠟后的組織依次浸入濃度梯度分別為100%、95%、85%、75%和50%的乙醇，最后用水洗去殘余乙醇；第四步是蘇木染色：先用哈氏蘇木素染色10 min，清洗洗去殘余蘇木染料，將染色架放入濃度為0.4%鹽酸酒精中進行分化，除去胞漿中的蘇木染色和細胞核上過多的蘇木染料，迅速入水洗去鹽酸以防過度脫色，流水中沖洗10 min進行返藍處理，然后入伊紅浸泡10 s，75%乙醇浸泡10 s使伊紅均勻著色；第五步是脫水：依次進入85%、95%、95%、100%、100%的乙醇中各3 min；第六步是透明：最后浸泡三缸二甲苯透明；第七步是中性樹脂封片。②免疫組化：第一步烤片：將常規(guī)石蠟切片插入至染色架中，放入溫度為60℃的烘箱40 min；第二步脫蠟：40 min后從烘箱取出，將染色架放入三缸二甲苯中進行脫蠟各5 min；第三步水化：將脫蠟后的組織依次浸入與常規(guī)制片水化步驟相同濃度梯度的乙醇，最后用水洗去殘余乙醇，最后用蒸餾水洗滌3次；第四步抗原修復(fù)：將切片轉(zhuǎn)移小盒內(nèi)并放入檸檬酸三鈉溶液,煮沸水浴99℃ 10 min，保溫10 min；第五步加入一抗：自然冷卻后用TBS溶液洗滌3～5次，將載玻片上組織周圍的水分擦干后放入濕盒內(nèi)，加入第一抗體，要注意抗體的加入量應(yīng)該比組織面積稍大一點，目的是防止組織干燥產(chǎn)生非特異性染色，蓋上濕盒蓋子并孵育1 h；第六步加入二抗：1 h后用TBS溶液沖洗掉組織切片上的第一抗體，然后繼續(xù)用TBS洗滌3次，將組織周圍水分擦干后加入第二抗體并孵育40 min；第七步DAB顯色：用TBS沖洗掉第二抗體，繼續(xù)洗滌3次,將組織周圍擦干后加入DAB顯色劑，肉眼結(jié)合鏡下檢查控制顯色；第八步觀察：對比觀察各種免疫組化指標在卵巢支持-間質(zhì)細胞瘤和卵巢子宮內(nèi)膜樣腺癌細胞中的染色情況并記錄陽性表達率。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差(s)表示，采用t檢驗；計數(shù)資料以率(%)表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

實驗組卵巢支持-間質(zhì)細胞瘤中CD99表達陽性36例，占81.8%，陰性8例，占18.2%；CK表達陽性25例，占56.8%，陰性19例，占43.2%；Inhibin-α表達陽性26例,占59.1%，陰性18例，占40.9%；Vimentin表達陽性42例,占95.5%，陰性2例，占4.5%。對照組卵巢子宮內(nèi)膜樣腺癌細胞中CD99、Inhibin-α表達均呈陰性，CK均呈彌漫胞漿陽性表達，Vimentin表達陽性38例，占86.4%，陰性6例，占13.6%。結(jié)果顯示CK、Inhibin-α及CD99在兩種不同腫瘤細胞中的表達率比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，而Vimentin表達率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

3 討論

本次試驗研究選取4種常見免疫組化指標，對符合診斷標準的病理切片進行免疫組化染色，然后對染色結(jié)果進行鏡下觀察和記錄，統(tǒng)計和分析各指標的陽性率并對常見的與支持-間質(zhì)細胞瘤容易在形態(tài)學(xué)上相互混淆的內(nèi)膜樣腺癌的相同免疫組化指標的表達情況進行對比，明確這些免疫指標在兩種不同腫瘤診斷及鑒別診斷中的意義。支持-間質(zhì)細胞瘤即卵巢支持-間質(zhì)細胞瘤，最早被命名為男性母細胞瘤，是一種顯示向睪丸方向分化的性索間質(zhì)細胞瘤，瘤細胞的細胞學(xué)特征和生長方式與睪丸支持細胞和睪丸間質(zhì)細胞相類似［1］。其發(fā)病率不超過所有卵巢腫瘤的0.5%，而且大多數(shù)是良性,局限于單側(cè)。在顯微鏡下腫瘤組織結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜，可見不同分化程度的支持細胞及間質(zhì)細胞。卵巢子宮內(nèi)膜樣腺癌在臨床上較為罕見，屬于卵巢上皮性腫瘤，其組織學(xué)和子宮內(nèi)膜癌相類似，大約占卵巢惡性腫瘤的3.1%～24.4%，且大部分合并子宮內(nèi)膜癌。在臨床上及病理學(xué)上均很難鑒別原發(fā)癌或轉(zhuǎn)移癌。卵巢子宮內(nèi)膜樣腺癌主要包括以下幾種分型：①單純型卵巢子宮內(nèi)膜樣腺癌，腫瘤細胞形態(tài)可為單層立方或柱狀或者為復(fù)層，細胞核深染，多呈圓形或卵圓形，核染色質(zhì)較粗，分布不均勻，核膜增厚不規(guī)則，可見核分裂象，胞質(zhì)豐富、嗜堿性，高分化的卵巢子宮內(nèi)膜樣腺癌間質(zhì)細胞為棱形，胞質(zhì)豐富，核多為圓形，低分化的卵巢子宮內(nèi)膜樣腺癌間質(zhì)細胞數(shù)量變少，偶可在腫瘤間質(zhì)中見到砂粒體；②復(fù)合型子宮內(nèi)膜樣腺癌，在區(qū)域內(nèi)可見鱗狀上皮化生，也可以稱為角化腺癌或腺棘癌，有時也可見灶性腺鱗癌成分；③混合型子宮內(nèi)膜樣腺癌，包括：純型子宮內(nèi)膜樣癌可同時混合黏液性癌、漿液性癌、未分化癌、透明細胞癌的一種或幾種癌成分，子宮內(nèi)膜樣腺癌伴有梭形細胞，梭形細胞成分達到1/3以上可診斷為此種類型，可見呈閱兵樣或編織狀排列的梭形細胞,類似于神經(jīng)鞘瘤或者纖維瘤的病理圖像；④類似性索間質(zhì)腫瘤的卵巢子宮內(nèi)膜樣腺癌，對于低分化的卵巢子宮內(nèi)膜樣癌,由于腫瘤細胞體積較小而均勻很難確定是否有核溝，腫瘤細胞可以呈現(xiàn)出酷似支持細胞腫瘤的條索、小梁或小管狀結(jié)構(gòu),若是伴有微腺腔，類似于粘層細胞的call-Exner小體，如果仔細尋找常可發(fā)現(xiàn)純型子宮內(nèi)膜樣腺癌；⑤卵巢嗜酸細胞型子宮內(nèi)膜樣腺癌，腫瘤細胞嗜酸性變，細胞肥大呈柱狀或多角形，細胞核位于中央或偏位，核仁明顯，胞漿豐富嗜酸性,核分裂象較多見。有研究證實子宮內(nèi)膜腺癌與高濃度雌激素的刺激有關(guān)。卵巢子宮內(nèi)膜樣腺癌是否與子宮內(nèi)膜癌相同,增生和惡變也受雌激素影響，對于卵巢子宮內(nèi)膜樣腺癌中雌激素受體的表達情況研究較少。

在本次實驗研究中免疫組化指標CD99、CK、Inhibin-α在卵巢支持-間質(zhì)細胞瘤和卵巢子宮內(nèi)膜樣腺癌細胞的表達率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，而Vimentin在以上兩種腫瘤細胞的表達率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，換而言之，從應(yīng)用免疫組化鑒定兩種細胞的來源上CD99、CK、Inhibin-α可以作為免疫指標，在兩種不同腫瘤診斷及鑒別診斷中具有重要意義和潛在應(yīng)用價值。通過以上討論和分析，利用免疫組化方法通過測定免疫指標的表達情況，對鑒別和診斷卵巢支持-間質(zhì)細胞瘤和卵巢子宮內(nèi)膜樣腺癌具有重要的臨床應(yīng)用價值。之后可以通過增加符合診斷標準的標本數(shù)量來進行大樣本的研究，以取得更加準確并讓人滿意的結(jié)果，借此在臨床上更好的鑒別這兩種卵巢惡性腫瘤，以降低臨床誤診率,提高患者的生存質(zhì)量，改善預(yù)后情況。

［1］ 龐曉燕，張頤.卵巢支持-間質(zhì)細胞瘤的臨床分析.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2009，19(19):2968-2971.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.29.014

2015-05-20］

276000 棗莊市立醫(yī)院