周洪彬 潘艷東 張宏宇

白細(xì)胞介素-17與原發(fā)性腎病綜合征相關(guān)性實(shí)驗(yàn)研究

周洪彬 潘艷東 張宏宇

目的 探討白細(xì)胞介素-17(IL-17)與原發(fā)性腎病綜合征(PNS)的相關(guān)性。方法 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測35例PNS患者(腎病綜合征組)和36例健康體檢者(對照組)外周靜脈血IL-17水平, 比較兩組IL-17水平均數(shù), 再對腎病綜合征組外周靜脈血IL-17與其尿蛋白水平進(jìn)行直線相關(guān)分析。結(jié)果 腎病綜合征組外周靜脈血IL-17高于對照組［(50.77±7.16)ng/L VS (33.83±6.23) ng/L］, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=10.52, P＜0.01)；腎病綜合征組外周靜脈血IL-17與其尿蛋白水平呈直線正相關(guān)(r=0.72, P＜0.01)。結(jié)論 原發(fā)性腎病綜合征的發(fā)病可能與體內(nèi)IL-17水平的異常存在相關(guān)性。

原發(fā)性腎病綜合征； 白細(xì)胞介素-17； 尿蛋白

腎病綜合征(nephrotic syndrome, NS)是由多種原因引起、以腎小球基膜通透性增加伴腎小球?yàn)V過率降低等腎小球病變?yōu)橹鞯囊唤M腎臟疾病綜合征, 該綜合征不是獨(dú)立的疾病, 而是多種腎臟疾病的共同表現(xiàn), 典型臨床表現(xiàn)為高蛋白尿(24 h尿蛋白 ＞3.5 g)、低蛋白血癥(血漿白蛋白 ＜30 g/L) 、高度水腫、高脂血癥, 其中以高蛋白尿最具特征性；腎病綜合征臨床上分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩大類型, 原發(fā)性腎病綜合征(primary nephrotic syndrome, PNS)是其中較為多見的一類, 且多發(fā)于青少年人群, 對患者的健康常常帶來嚴(yán)重的危害［1,2］。PNS發(fā)病原因一直未完全明確, 學(xué)者們普遍認(rèn)為［3,4］：PNS是一組常見的免疫反應(yīng)介導(dǎo)性疾病, 它的發(fā)病與機(jī)體細(xì)胞免疫功能紊亂密切相關(guān)。具有強(qiáng)致病性的免疫細(xì)胞因子IL-7在PNS中所起的作用目前的研究不多, 僅少有報(bào)道提示IL-17 在PNS中有重要作用［5,6］。為此, 作者采用成組設(shè)計(jì)和直線相關(guān)性分析對35例PNS患者外周靜脈血IL-17和24 h尿蛋白進(jìn)行研究, 以探討IL-17與PNS發(fā)病的相關(guān)性?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年2月～2015年1月廣州市白云區(qū)人民醫(yī)院綜合科門診和病房就診患者, 經(jīng)臨床和實(shí)驗(yàn)室確診PNS患者35例(腎病綜合征組), 自愿參與本研究, 均符合PNS診斷標(biāo)準(zhǔn)［2］；其中男21例, 女14例, 年齡9～26 歲,平均年齡(11.54±6.23)歲；病程48 d～3年, 平均病程1.13年；所有患者受試前1個(gè)月內(nèi)均未接受系統(tǒng)治療, 亦無合并其他急、慢性疾病。另選擇同期健康體檢者(對照組)36例, 均自愿參與本研究, 男23例, 女13例, 年齡10～24 歲, 平均年齡(12.83±4.36)歲, 近1個(gè)月內(nèi)均無服藥史, 無急、慢性疾病。兩組受試對象性別構(gòu)成、年齡等一般資料比較, 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 研究方法 ①主要儀器和試劑：IL-17酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒(美國Sigma公司)、酶標(biāo)儀(奧地利ANTHOS2010型)。②標(biāo)本收集：收集兩組受試對象外周靜脈血(EDTA抗凝)各2 ml, 均3000 r/min離心20 min, 取上清液, -30℃條件保存?zhèn)溆谩＂跧L-17測定［7］：測試時(shí)將-30℃保存血漿標(biāo)本取出, 解凍復(fù)融至室溫并充分混勻, 3000 r/min離心5 min, 取其上清液血漿；采用ELISA法測定IL-17水平, 具體測定程序和方法嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。④24 h尿蛋白測定［8］：收集腎病綜合征組受試者24 h 尿(甲苯防腐, 以防尿液中細(xì)菌生長、影響檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性), 送醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測, 24 h尿蛋白定量采用終點(diǎn)法檢測, 具體操作與檢測由檢驗(yàn)科協(xié)助完成。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用直線相關(guān)分析。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組受試對象IL-17水平均數(shù)比較 腎病綜合征組與對照組測定的外周靜脈血IL-17數(shù)據(jù)均呈正態(tài)分布且方差齊,腎病綜合征組外周靜脈血IL-17水平高于對照組, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=10.52, P＜0.01)。見表1。

2.2 腎病綜合征組外周靜脈血IL-17與24 h尿蛋白的相關(guān)性分析 PNS患者外周靜脈血IL-17與自身24 h尿蛋白水平兩組數(shù)據(jù)經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)、等級相關(guān)分析及直線相關(guān)分析, 兩者呈直線相關(guān)(t=5.91, P＜0.01)和正相關(guān)(r=0.72)。

3 討論

該研究發(fā)現(xiàn), PNS患者外周靜脈血IL-17水平要高于健康人, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01), 與文獻(xiàn)報(bào)道一致［6］。細(xì)胞免疫功能的紊亂是PNS 的重要發(fā)病機(jī)制之一, 這已成為不爭的共識。Th17和Treg細(xì)胞在PNS患者體內(nèi)的平衡失調(diào)伴隨著PNS具有明顯的腎小管上皮細(xì)胞和腎間質(zhì)病變, Th17和Treg細(xì)胞之間動態(tài)的相互作用可能對PNS的病情發(fā)展變化非常重要［9］, Th17細(xì)胞分泌的IL-17 是一種具有代表性和多效性的細(xì)胞因子, 在許多炎癥性疾病如自身免疫性疾病、感染性疾病等發(fā)病中起著重要的推動作用, 尤其在自身免疫性疾病模型中的致病性已被確認(rèn), IL-17能誘導(dǎo)促炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生, 增強(qiáng)T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)和Th1型反應(yīng)［10］, IL-17在復(fù)發(fā)期PNS患者體內(nèi)的血漿濃度要高于緩解期和健康人,血漿中IL-17的濃度可能反映的是PNS疾病活動的情況［6］。這說明IL-17在PNS的發(fā)病過程中起著重要作用。

該研究還發(fā)現(xiàn), PNS患者外周靜脈血IL-17與24 h尿蛋白呈直線正相關(guān)關(guān)系, 說明血中IL-17濃度增大, 24 h尿蛋白增高, 與文獻(xiàn)報(bào)道一致［6］。PNS是一組由多種原因引起的腎小球基底膜通透性增加, 導(dǎo)致血漿內(nèi)大量蛋白質(zhì)從尿液中流失的腎臟疾病綜合征, 其發(fā)病機(jī)制尚不明確［1］。研究發(fā)現(xiàn), PNS 患者的血漿及尿液中IL-17水平在復(fù)發(fā)期明顯增高, 在緩解期降至基線水平, 且與尿蛋白呈正相關(guān)［6］；在阿霉素腎病大鼠硬化的腎組織中有IL-17表達(dá)明顯增加, 可能在阿霉素腎病大鼠發(fā)生腎小球硬化過程中起了一定的作用［5］。鐘桴等［11］研究發(fā)現(xiàn), PNS患者體內(nèi)核因子-кB(NF-кB)活性高于正常兒童, 提示PNS NF-кB信號途徑過度活化。而IL-17正是通過活化的NF-кB信號途經(jīng)發(fā)揮其促進(jìn)免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)等作用［10］。因此機(jī)體內(nèi)高水平的IL-17與過度活化的NF-кB的結(jié)合必將引發(fā)腎臟組織的病理改變和尿蛋白的升高。

雖然國內(nèi)少有報(bào)道, 但以上所述還是說明了IL-17與原發(fā)性腎病綜合征發(fā)病有著重要的相關(guān)作用。

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Experimental research of correlation between interleukin-17 and primary nephrotic syndrome

ZHOU Hong-bin, PAN Yan-dong, ZHANG Hong-yu.General Department, Guangzhou City Baiyun District People’s Hospital, Guangzhou 510500, China

Objective To investigate correlation between interleukin-17 (IL-17) and primary nephrotic syndrome(PNS).Methods Enzyme-linked immuno sorbent assay (ELISA) was applied for detecting IL-17 levels in peripheral venous blood of 35 PNS patients (nephrotic syndrome group) and 36 healthy people (control group).IL-17 meal levels were compared between the two groups.Linear correlation analysis was made on IL-17 level in peripheral venous blood of nephrotic syndrome patients and their urinary protein level.Results The nephrotic syndrome group had much higher IL-17 level in peripheral venous blood than the control group ［(50.77±7.16) ng/L VS (33.83±6.23) ng/L］, and their difference had statistical significance (t=10.52, P＜0.01).IL-17 levelin peripheral venous blood of nephrotic syndrome patients had positive linear correlation with their urinary protein level (r=0.72, P＜0.01).Conclusion Morbidity of primary nephrotic syndrome may have correlation with abnormal IL-17 level.

Primary nephrotic syndrome; Interleukin-17; Urine protein

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.19.002

2015-03-09］

2012年廣東省社會發(fā)展領(lǐng)域科技計(jì)劃(項(xiàng)目編號：20120318087)

510500 廣州市白云區(qū)人民醫(yī)院綜合科(周洪彬 潘艷東), 皮膚科(張宏宇)

張宏宇