徐 暉，陸麗華，劉 琦，董躍濱

(上海市第七人民醫(yī)院，上海 200137)

康復新液對難治性潰瘍患者血管內(nèi)皮生長因子表達的影響

徐 暉，陸麗華，劉 琦，董躍濱

(上海市第七人民醫(yī)院，上海 200137)

目的 探討康復新液對難治性消化性潰瘍患者血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達的影響。方法 將60例難治性消化性潰瘍患者隨機分為對照組和實驗組。對照組給予泮托拉唑膠囊治療，實驗組在對照組治療的基礎(chǔ)上加用康復新液。同時隨機選取同期20例首診為胃潰瘍且經(jīng)胃鏡證實的患者作為對照2組，給予與對照組相同的治療。所有入選者在胃鏡下取潰瘍周邊黏膜組織,進行VEGF免疫組化染色及血管標記；同時進行外周血中VEGF水平的檢測。結(jié)果 實驗組和對照組胃組織VEGF、血清VEGF含量和微血管數(shù)量均較對照2組低(P均<0．01)。治療后實驗組胃組織VEGF和微血管數(shù)量均較對照組高(P均<0.01)；血清VEGF含量雖較對照組高，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0．05)。結(jié)論 在難治性消化性潰瘍的常規(guī)治療中加用康復新液，可提高患者胃組織VEGF表達的陽性率及微血管數(shù)量，有助于難治性消化性潰瘍的治療。

康復新液；難治性消化性潰瘍；血管內(nèi)皮生長因子

消化性潰瘍是世界性的常見病、多發(fā)病，而難治性潰瘍是消化性潰瘍中的一種特殊類型。難治性潰瘍易合并出血、穿孔、梗阻，甚至癌變，其預后嚴重影響患者的生存質(zhì)量。本研究采用免疫組化及酶聯(lián)免疫吸附法檢測難治性消化性潰瘍患者應(yīng)用康復新液治療前后潰瘍周邊黏膜血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)表達及血清中VEGF含量情況，探討康復新液在難治性消化性潰瘍治療中的意義及其作用機制。

1 臨床資料

1.1一般資料 選擇2011年1月—2014年1月在我院就診難治性消化性潰瘍患者60例，年齡18～70歲，患者神志清楚，愿意配合研究并簽署進入研究的知情同意書，均符合《江紹基胃腸病學》[1]中難治性潰瘍的診斷標準：正規(guī)治療8周(十二指腸潰瘍)或12周(胃潰瘍)后，經(jīng)內(nèi)鏡檢查確定潰瘍未愈和/或愈合緩慢、頻繁復發(fā)。因胃潰瘍與十二指腸潰瘍治療療程不同，故本研究選擇的都是胃潰瘍患者。排除病理證實的惡性潰瘍者，不愿意配合實驗者。入選者隨機分為2組：實驗組30例，男17例，女13例；年齡18～68歲。對照組30例，男16例，女14例；年齡19～70歲。2組患者性別、年齡、病情等比較差異無統(tǒng)計學意義，具有可比性。同時隨機選取同期20例首診為胃潰瘍且經(jīng)胃鏡證實的患者作為對照2組，男12例，女8例；年齡20～68歲。

1.2 治療方法 對照組給予泮托拉唑鈉腸溶膠囊(福州閩海藥業(yè)有限公司生產(chǎn))40mg 1次/d口服；實驗組在此基礎(chǔ)上給予康復新液(湖南科倫制藥有限公司生產(chǎn))10mL 3次/d口服。2組服藥4周后復查胃鏡。對照2組給予與對照組相同的治療。3組中合并幽門螺桿菌感染者常規(guī)給予抗幽門螺桿菌治療。

1.3 觀察指標

1.3.1 潰瘍周邊黏膜組織血管數(shù)量及VEGF表達情況 實驗組+對照組分別在治療前后進行胃鏡取材(對照2組僅需在治療前進行胃鏡取材)，取材部位為潰瘍邊緣1 cm以內(nèi)組織。將取好的組織常規(guī)石蠟包埋，一部分采用Ⅷ因子法進行血管標記，雙盲法觀察血管并計數(shù)，40倍鏡下選擇8個典型視野，計算每個典型視野的平均血管數(shù)量。另一部分進行連續(xù)切片，切片厚4 μm，采用免疫組化染色法檢測VEGF表達情況。VEGF一抗、即用型SABC免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒均由武漢博士德生物工程有限公司提供，嚴格按試劑盒提供的實驗步驟進行操作。細胞胞漿著棕黃色為陽性細胞。部分切片不加探針，細胞質(zhì)不著色，表明探針特異性強。

1.3.2 外周血中VEGF含量 所有入選者均采用非抗凝管采集空腹靜脈血3 mL(實驗組和對照組分別在治療前后采血，對照2組僅在治療前采血)，室溫靜置30～60min后，3 000r/min離心10min，分離血清，-80℃低溫冷凍保存?zhèn)溆?。提?0min將酶標板從冰箱取出，平衡至室溫，用ELISA試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司提供)，嚴格按照ELISA方法說明書的操作步驟進行測定。用酶標儀比色,波長為450nm。每批標本帶有標準品，濃度分別為0,50,100,250,500,1 000pg/mL,以標準品做吸光度/濃度曲線，通過曲線計算樣本中VEGF含量。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 17.0軟件包進行統(tǒng)計分析，治療前后比較用配對資料t檢驗，2組資料比較用獨立樣本t檢驗。P<0．05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

治療前實驗組和對照組胃組織血管數(shù)量少于對照2組(P<0.01)，胃組織VEGF陽性細胞數(shù)及外周血中VEGF含量低于對照2組(P均<0.01)。治療后實驗組胃組織血管數(shù)量、VEGF陽性細胞數(shù)明顯高于對照組(P均<0.01)，血清VEGF含量2組比較差異無統(tǒng)計學意義。見表1。

3 討 論

表1 各組胃組織血管數(shù)量、胃組織VEGF陽性細胞數(shù)及外周血中VEGF含量比較

注：①與對照2組比較，P<0．01；②與對照組比較，P<0．01。

胃潰瘍實際上就是胃黏膜缺損超過黏膜肌層甚至全層的組織缺損。潰瘍的愈合需要細胞的移行、再上皮化、增生來填補黏膜的缺損以及重新構(gòu)建腺體細胞，而這些都需要新生血管形成，從而提供給細胞增生和分化所必需的營養(yǎng)物質(zhì)。故消化性潰瘍的愈合需要多種生長因子的參與。而難治性潰瘍患者存在某些生長因子及其受體的減少或缺乏[2-4]。

VEGF又稱為血管通透性因子或促血管素，是目前已知的最強的血管生成促進因子。VEGF及其家族成員，在生理性或病理性血管生成中是不可缺少的誘導因子。VEGF在很多正常人和動物組織中表達，但一般表達水平低；在一些代謝旺盛、血供豐富的組織中表達較高。VEGF特異性地作用于血管內(nèi)皮細胞，具有維持血管正常狀態(tài)和完整性，提高血管通透性，促進血管生成的作用。因此在組織修復、血管再生方面引起極大關(guān)注。目前研究證明VEGF在潰瘍的發(fā)病中起著重要的保護作用[5]。Szabo等[6]研究認為它在胃黏膜保護和慢性潰瘍愈合中起雙重作用，既通過增加微血管通透性稀釋胃內(nèi)有害物質(zhì)保護胃黏膜，又通過刺激腺體和血管生成促進潰瘍愈合。Takahashi等[7]應(yīng)用RT-PCR技術(shù)證實在胃潰瘍患者潰瘍組織中的VEGF mRNA水平顯著高于正常胃黏膜組織。Jones等[8]報道局部應(yīng)用VEGF和ang1基因治療可加速潰瘍愈合。李成軍等[9]在動物研究中發(fā)現(xiàn)，隨著潰瘍的愈合，EGF和 VEGF促進了再生的異常胃黏膜向正常胃黏膜轉(zhuǎn)化，并促進了再生胃黏膜功能的恢復。趙志奮[10]在研究中發(fā)現(xiàn)難治性胃潰瘍患者胃組織中VEGF表達水平顯著降低。本研究結(jié)果亦顯示，難治性胃潰瘍患者胃組織VEGF和血清VEGF含量均較對照2組低，提示VEGF含量與難治性胃潰瘍的發(fā)生有關(guān)。應(yīng)用與潰瘍修復密切相關(guān)的生長因子如VEGF，通過重組蛋白或轉(zhuǎn)基因等方式，可以從分子生物學角度來預防和治療消化性潰瘍。但由于VEGF的價格昂貴，目前尚不能廣泛應(yīng)用于臨床。目前眾多研究表明，中西醫(yī)結(jié)合治療難治性消化性潰瘍的效果優(yōu)于單一使用西藥進行治療,治療此病更具有優(yōu)勢[11-12]。

康復新液是從生物蜚鐮分離提取精制而成的一種生物制劑。其有效成分為黏糖氨酸、多元醇類和肽類等活性物質(zhì)，可通過提高T 淋巴細胞數(shù)量和活性調(diào)節(jié)免疫功能[13-14]，加快組織修復，促進潰瘍愈合，且不易復發(fā)。劉童婷等[15]在研究中發(fā)現(xiàn)，康復新液促進慢性胃潰瘍的愈合可能與潰瘍局部 NO、Gln的合成和表達有關(guān)，為潰瘍的修復提供良好的環(huán)境和營養(yǎng)狀態(tài)，作用強于西藥治療組。另外王秀蓉[16]、鄧宜楚[17]、閔賢英[18]發(fā)現(xiàn)在常規(guī)制酸+抗幽門螺桿菌治療的基礎(chǔ)上聯(lián)合應(yīng)用康復新液可提高難治性消化性潰瘍的療效。本研究發(fā)現(xiàn)，治療后實驗組胃組織VEGF和微血管數(shù)量均較對照組高，說明在消化性潰瘍的常規(guī)治療中加用康復新液，可提高患者胃組織VEGF表達的陽性率、微血管數(shù)量。提示康復新液在提高患者抗?jié)兡芰?、促進潰瘍愈合方面有一定作用，康復新液有助于難治性消化性潰瘍的治療。

[1] 莫劍忠，江石湖，蕭樹東.江紹基胃腸病學[M].2版.上海：上?？茖W技術(shù)出版社，2014:526

[2] Palomino A,Hernandez-Bernal F,Haedo W，et al． A multicenter, randomized, double-blind clinical trial examining the effect of oral human recombinant epidermal growth factor on the healing of duodenal ulcers[J].Scand J Gastroenterol,2000，35(10):1016-1022

[3] Tomasetto C,Masson R,Linares JL，et al． pS2/TFF1 interacts directly with the VWFC cysteine-rich domains of mucins[J].Gastroenterology,2000，118(1):70-80

[4] Ernst H,Konturek PC,Hahn EG，et al． Effect of local injection with basic fibroblast growth factor (BFGF) and neutralizing antibody to BFGF on gastric ulcer healing,gastric secretion,angiogenesis and gastric blood flow[J].J Physiol Pharmacol，2001，52(3):377-390

[5] Szabo S,Folkman J,Vattay P，et al． Accelerated healing of duodenal ulcers by oral administration of a mutein of basic fibroblast growth factor in rats[J].Gastroenterology,1994，106(4):1106-1111

[6] Szabo S,Vincze A,Sandor Z，et al． Vascular approach to gastroduodenal ulceration:new studies with endothelins and VEGF[J].Dig Dis Sci,1998，43(9 Suppl):40S-45S

[7] Takahashi M,Kawabe T,Ogura K，et al． Expression of vascular endothelial growth factor at the human gastric ulcer margin and in cultured gastric fibroblasts:a new angiogenic factor for gastric ulcer healing[J].Biochem Biophys Res Commun，1997，234(2)：493-498

[8] Jones MK，Kawanaka H，Baatar D,et al． Gene therapy for gastric ulcers with single local injection of naked DNA encoding VEGF and angiopoietin-1[J].Gastroenterology，2001，121(5)：1040-1047

[9] 李成軍，王麗萍，夏立丁，等． 大鼠乙酸胃潰瘍愈合過程中EGF和VEGF對胃粘膜組織形態(tài)的影響[J]． 醫(yī)學研究雜志，2010，39(8)：56-69

[10] 趙志奮.難治性胃潰瘍組織中VEGF表達的檢測及意義[J].中外醫(yī)療，2008，27(19):11-13

[11] 許忠康.中西醫(yī)結(jié)合治療難治性消化性潰瘍36例[J].新中醫(yī),2010,42(3):70-71

[12] 王華瓏.中西醫(yī)結(jié)合治療難治性消化性潰瘍療效觀察[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2013,22(26):2910-2912

[13] 黎琮毅，梁英，黃寧生． 康復新液治療老年人消化性潰瘍35例[J]． 臨床醫(yī)學，2011，31(11)：13-14

[14] 代文潔，鄭麗麗，王馨宇． 康復新液聯(lián)合西藥保留灌腸治療潰瘍性結(jié)腸炎40例[J]． 中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2011，19(1)：52-53

[15] 劉童婷，黃秀深，陳瑾，等.康復新液對慢性胃潰瘍愈合環(huán)境和營養(yǎng)的影響[J].中成藥，2013,35(12)：2738-2740

[16] 王秀蓉.泮托拉唑聯(lián)合康復新液治療難治性消化性潰瘍療效觀察[J]． 臨床醫(yī)藥實踐雜志，2009，18(2):110-111

[17] 鄧宜楚.康復新液聯(lián)合蘭索拉唑三聯(lián)療法治療消化性巨大潰瘍36例[J].中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2008，16(2):127-128

[18] 閔賢英.康復新聯(lián)合雷貝拉唑治療消化性潰瘍的臨床研究[J].實用中西醫(yī)結(jié)合臨床,2012,12(4):62

Effect of Kangfuxin liquid on VEGF expression in patients with refractory peptic ulcer

XU Hui， LU Lihua， LIU Qi， DONG Yuebin

(Shanghai Seventh People’s Hospital, Shanghai 200137, China)

Objective It is to explore the effect of Kangfuxin liquid on VEGF expression in patients with refractory peptic ulcer.Methods Sixty patients with refractory peptic ulcer were randomly divided into the control group and the study group.The patients in the control group1 were treated with pantoprazole sodium, while the patients in the study group were treated with Kangfuxin liquid on the base of medication of the control group.At the same time 20cases who firstly were diagnosed as the gastric ulcer and confirmed by gastroscope in the same period were randomly selected and as control group Ⅱ and were given the same therapy as the control group.All the selected patients were taken mucosal tissue surrounding the ulcer under gastroscope.All the biopsy samples were stained by VEGF immunohistochemical and vascular tagged.Meanwhile,the serum contents of VEGF of the patients were detected.Results The gastric body tissue VEGF, serum contents of VEGF and capillary number of the patients with refractory peptic ulcer were lower than that of the control group Ⅱ(P<0.01)；After treated with Kangfuxin liquid，the gastric tissue VEGF and capillary number of the study group were higher than that of the control group (P<0.01), the serum contents of VEGF of those were higher than the control group ,but the difference was not statistically significant(P>0．05).Conclusion Application of kangfuxin liquid in the routine treatment of refractory peptic ulcer can increase VEGF expression positive rate and the numbers of capillaries in gastric tissue, and is helpful for the treatment of refractory peptic ulcer.

Kangfuxin liquid；refractory peptic ulcer；VEGF

徐暉，女，主治醫(yī)師，碩士，從事胃腸病及胰腺疾病的研究。

董躍濱，E-mail:yuebindong@126.com

上海市第七人民醫(yī)院基金資助項目(SQKT2011-05)

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.10.003

R573.1

A

1008-8849(2015)10-1035-03

2014-11-05