王維民,周 炎,金 俊,姚 強(qiáng),湯月華
(江蘇大學(xué)附屬宜興醫(yī)院,江蘇 宜興 214200)
論 著
ERCC1、TS在胃癌組織中的表達(dá)與術(shù)后輔助化療預(yù)后的關(guān)系
王維民,周 炎,金 俊,姚 強(qiáng),湯月華
(江蘇大學(xué)附屬宜興醫(yī)院,江蘇 宜興 214200)
目的探討胃癌術(shù)后患者核苷酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1(ERCC1)、胸苷酸合成酶(TS)表達(dá)與術(shù)后輔助化療預(yù)后的關(guān)系。方法選取86例初次診斷為胃癌行胃癌根治術(shù)、術(shù)后病理診斷為Ⅱ~Ⅲ期的患者,術(shù)后均采用XELOX輔助化療方案化療,并進(jìn)行4年以上隨訪。運(yùn)用免疫組化方法檢測(cè)患者癌組織中ERCC1、TS蛋白表達(dá)情況,分析ERCC1、TS表達(dá)與術(shù)后輔助化療預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果86例胃癌患者癌組織中ERCC1和TS的陽(yáng)性表達(dá)率分別為40%和36%。ERCC1和TS陽(yáng)性表達(dá)率與腫瘤的分化程度相關(guān)。ERCC1陰性表達(dá)者和TS陰性表達(dá)者平均生存期均明顯長(zhǎng)于陽(yáng)性表達(dá)者(P均<0.05)。多因素COX回歸分析表明,ERCC1、TS陽(yáng)性表達(dá)者術(shù)后輔助化療預(yù)后差[HR=0.29,95%CI(0.12,0.69),P=0.006; HR=0.49,95%CI(0.20,0.87),P=0.010]。結(jié)論ERCC1與TS表達(dá)情況可以作為預(yù)測(cè)胃癌術(shù)后輔助化療預(yù)后的分子標(biāo)志物。
胃癌;核苷酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1;胸苷酸合成酶;輔助化療;預(yù)后
胃癌是世界上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,但近年來(lái)其發(fā)病率及病死率在世界范圍內(nèi)有下降趨勢(shì)[1]。胃癌的發(fā)病有著明顯的地域性差異,在歐洲胃癌的病死率位于肺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌之后,位居第4位[2]。2009年的調(diào)查顯示,我國(guó)胃癌的發(fā)病率及病死率均僅次于肺癌,位居第2位[3]。CLASSIC研究結(jié)果顯示,采用希羅達(dá)聯(lián)合奧沙利鉑(XELOX)方案輔助化療不僅可降低胃癌44%的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn),且74%的胃癌患者根治術(shù)后接受XELOX方案輔助化療可獲3年無(wú)病生存[4]。但是,手術(shù)殘留的癌細(xì)胞和處于萌芽狀態(tài)的癌細(xì)胞隨時(shí)有可能復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,為了能更有效地提高術(shù)后輔助化療療效,筆者對(duì)86例胃癌術(shù)后患者組織標(biāo)本中核苷酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1(ERCC1)、胸苷酸合成酶(TS)蛋白表達(dá)情況進(jìn)行了檢測(cè),并分析了它們與臨床病理特征的關(guān)系,旨在探討分子標(biāo)記物聯(lián)合檢測(cè)在預(yù)測(cè)胃癌術(shù)后采用XELOX方案化療療效及預(yù)后中的作用,為胃癌的個(gè)體化治療提供臨床依據(jù)。
1.1一般資料 86例標(biāo)本取自江蘇大學(xué)附屬宜興醫(yī)院2009年1月—2010年12月手術(shù)治療的胃癌患者,均經(jīng)病理證實(shí)。男52例,女34例;年齡33~75歲,中位年齡51歲。按1997年國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)TNM標(biāo)準(zhǔn)分期Ⅱ期31例,Ⅲ期55例。術(shù)后患者均給予XELOX方案(奧沙利鉑130 mg/m2靜脈滴注第1天,希羅達(dá)1 000 mg/m2口服第1—14天)化療,28 d為1個(gè)周期,至少完成6個(gè)周期的化療?;熀笸ㄟ^(guò)上門或電話的方式進(jìn)行隨訪,直至患者死亡,若末次隨訪仍然存活則定為截尾值。隨訪截止時(shí)間2014年12月。
1.2主要儀器及試劑 鼠抗人ERCC1、TS單克隆抗體購(gòu)自Santa Cruz生物工程公司,二步法免疫組織化學(xué)試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司,石蠟切片機(jī)及漂片處理儀、圖文分析系統(tǒng)為日本萊卡公司產(chǎn)品。
1.3實(shí)驗(yàn)方法 標(biāo)本用4%甲醛固定,石蠟包埋,常規(guī)切片,厚度4 μm。采用二步法免疫組化檢測(cè)結(jié)腸癌組織ERCC1、TS蛋白的表達(dá)。常規(guī)脫蠟、水化后進(jìn)行預(yù)處理,3%H202室溫培育10 min,蒸餾水洗3次,每次2 min,分別滴加1∶100稀釋的抗ERCC1、TS單克隆抗體,室溫培育20 min,DAB顯色,蘇木精對(duì)比染色、脫水,二甲苯透明,中性樹(shù)脂封固,光學(xué)顯微鏡下觀察。
1.4免疫組化結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) ERCC1、TS蛋白陽(yáng)性染色者均在細(xì)胞核和/或細(xì)胞漿呈棕黃色沉著。在光鏡下(400倍視野)計(jì)數(shù)1 000個(gè)腫瘤細(xì)胞中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),視野中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≥10%為陽(yáng)性,不表達(dá)或<10%為陰性。病理結(jié)果由2位病理科醫(yī)生在未獲知臨床資料及預(yù)后的情況下獨(dú)立閱片判定。
1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用STATA 10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。定性資料比較采用Fisher 確切概率法,總體生存分析采用Kaplan-Meier生存曲線表示,生存率的比較采用log-rank檢驗(yàn),影響因素分析采用COX多因素回歸模型。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,雙側(cè)P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1ERCC1、TS在胃癌組織中的表達(dá)及與臨床特征的關(guān)系 86例胃癌患者中,ERCC1蛋白陽(yáng)性表達(dá)34例(40%),陰性表達(dá)52例(60%);TS蛋白陽(yáng)性表達(dá)31例(36%),陰性表達(dá)55例(64%)。ERCC1、TS蛋白表達(dá)與患者臨床分期、年齡、性別均無(wú)明顯相關(guān)性(P均>0.05),但兩者陽(yáng)性表達(dá)率均隨著腫瘤的分化程度降低而明顯增高(P均<0.05)。見(jiàn)表1。
表1 ERCC1與TS蛋白表達(dá)與臨床特征的關(guān)系 例(%)
2.2ERCC1與TS蛋白表達(dá)與生存期的關(guān)系 ERCC1陰性表達(dá)者平均生存期為42.8個(gè)月[95%CI(39.95,45.63)],而ERCC1陽(yáng)性表達(dá)者平均生存期為33.4個(gè)月[95%CI(28.76,38.06)],2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);TS陰性表達(dá)者平均生存期為41.6個(gè)月[95%CI(38.54,44.59)],而TS陽(yáng)性表達(dá)者平均生存期為34.7個(gè)月[95%CI(29.84,39.51)],2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲線顯示:ERCC1陰性表達(dá)者和TS蛋白陰性表達(dá)者3年生存期均明顯長(zhǎng)于陽(yáng)性表達(dá)者(P均<0.05)。見(jiàn)圖1及圖2。多因素COX回歸模型分析表明,ERCC1陽(yáng)性表達(dá)者和TS陽(yáng)性表達(dá)者預(yù)后均較差,且分化程度越高的患者預(yù)后越好。見(jiàn)表2。
圖1 ERCC1蛋白表達(dá)與生存期之間的關(guān)系
圖2 TS蛋白表達(dá)與生存期之間的關(guān)系
胃癌是常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,日本是胃癌的高發(fā)地區(qū),但由于早期胃癌占據(jù)了較大比例,預(yù)后相對(duì)較好[5]。目前手術(shù)療法是治療胃癌的主要手段,其中D2手術(shù)是治療進(jìn)展期胃癌的標(biāo)準(zhǔn)術(shù)式。近年腹腔鏡胃癌根治術(shù)逐漸應(yīng)用于臨床,且較常規(guī)開(kāi)腹手術(shù)具有一定的優(yōu)越性[6-9]。但由于亞臨床病灶的存在,術(shù)后仍有40%~80%的患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,新輔助化療可一定程度上提高患者R0切除率,降低胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)及病死率,延長(zhǎng)患者的生存期[10-12],所以化療在胃癌的綜合治療中起至關(guān)重要的作用[13]。胃癌的預(yù)后與多種因子有關(guān),侯毅鞠等[14]研究顯示胃癌組織中凋亡抑制蛋白Livin高表達(dá)預(yù)示著腫瘤有較高的侵襲性,預(yù)后較差。
表2 胃癌患者癌組織中ERCC1、TS表達(dá)與臨床病理資料變量多因素COX回歸分析
ERCC1定位于19號(hào)染色體上,是核苷酸切除修復(fù)(Nucleotidc Excision Repair,NER)活性的標(biāo)志性基因,是標(biāo)志腫瘤患者預(yù)后和鉑類化療的重要指標(biāo),在腫瘤治療中具有重要作用。已有Meta分析顯示在接受以鉑類為基礎(chǔ)的化療患者中,ERCC1與患者的預(yù)后存在明顯負(fù)相關(guān)[15-16]。Kim等[17]研究發(fā)現(xiàn),ERCC1、GSTP1與腫瘤大小明顯相關(guān),并與總生存期(OS)有明顯關(guān)系(HR=0.069,P=0.021)。Kwon等[18]通過(guò)免疫組化法檢測(cè)64例進(jìn)展期胃癌患者組織中ERCC1、TS和GSTP1的表達(dá),發(fā)現(xiàn)ERCC1陽(yáng)性表達(dá)患者對(duì)FOLFOX方案化療的敏感性顯著低于陰性表達(dá)患者(P=0.045),多因素分析顯示,ERCC1陽(yáng)性表達(dá)對(duì)OS具有明顯影響(HR=1.92,P=0.037) 。TS是胸苷酸合成的限速酶,其是促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)的重要因子,主要機(jī)制是催化dUMP轉(zhuǎn)化成脫氧胸苷酸(dTMP),從而促進(jìn)DNA的合成。TS是5-Fu發(fā)揮細(xì)胞毒作用的目標(biāo)酶,5-Fu在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物5-氟尿嘧啶脫氧核苷(FdUMP)與TS結(jié)合,從而降低TS的活性。TS蛋白過(guò)表達(dá)將使FdUMP不能完全抑制TS的作用,誘發(fā)腫瘤細(xì)胞對(duì)5-Fu產(chǎn)生耐藥。因此,TS 蛋白和基因的表達(dá)水平與5-Fu為基礎(chǔ)的胃癌患者化療療效呈負(fù)相關(guān)。Lenz等[19]發(fā)現(xiàn)胃癌患者TS表達(dá)水平與5-Fu的療效呈負(fù)相關(guān)。 Liu 等[20]回顧了58例年齡≥65歲的進(jìn)展期胃癌患者,他們均接受了單藥希羅達(dá)化療,免疫組化方法檢測(cè)TS在胃癌組織中的表達(dá),研究提示TS低表達(dá)胃癌患者DFS及OS均較TS高表達(dá)患者明顯延長(zhǎng)(P=0.001,0.002)。Baroudi等[21]研究提示TS高表達(dá)與患者對(duì)化療敏感性及預(yù)后均存在負(fù)相關(guān),不但說(shuō)明TS水平高的腫瘤對(duì)5-Fu的敏感性差,而且說(shuō)明細(xì)胞持續(xù)暴露于5-Fu也可以使細(xì)胞內(nèi)TS基因突變導(dǎo)致基因擴(kuò)增及蛋白的過(guò)度表達(dá),從而引起對(duì)5-Fu的繼發(fā)性耐藥。希羅達(dá)化學(xué)名是卡培他濱,是一種對(duì)腫瘤細(xì)胞有選擇性活性的口服細(xì)胞毒性制劑,是5-Fu的前體,本身無(wú)毒性,且只在腫瘤部位轉(zhuǎn)化為有細(xì)胞毒性的5-Fu,具有一定的靶向性和特異性,更有效,不良反應(yīng)較少。在進(jìn)展期胃癌化療方案中,無(wú)論是二藥還是三藥聯(lián)合方案,希羅達(dá)效果明顯優(yōu)于5-Fu。
本課題組應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)胃癌術(shù)后患者的ERCC1、TS蛋白表達(dá)水平,結(jié)果顯示ERCC1蛋白在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為40%,TS蛋白在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為36%, 兩者陽(yáng)性表達(dá)率隨腫瘤的分化程度降低而明顯增高。ERCC1、TS蛋白低表達(dá)較高表達(dá)的胃癌術(shù)后患者應(yīng)用XELOX方案化療可獲得生存受益。本研究初步表明,ERCC1蛋白表達(dá)可以預(yù)測(cè)胃癌患者對(duì)鉑類化療的敏感性,TS蛋白表達(dá)可以預(yù)測(cè)希羅達(dá)化療藥物的敏感性,兩者聯(lián)合運(yùn)用可以預(yù)測(cè)XELOX方案的有效性,可為胃癌術(shù)后患者的個(gè)體化治療提供臨床理論依據(jù)。
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Relationship of the expression of ERCC1 and TS in gastric cancer tissue with the prognosis after postoperative adjuvant chemotherapy
WANG Weimin, ZHOU Yan, JIN Jun, YAO Qiang, TANG Yuehua
(Yixing Hospital Affiliated to Jiangsu University, Yixing 214200, Jiangsu, China)
Objective It is to investigate the relationship of the expression of ERCC1 and TS in gastric cancer with the prognosis after postoperative adjuvant chemotherapy. Methods 86 patients who were diagnosed gastric cancer for the first time were enrolled in our study. All the patients were received radical operation, pathologic diagnosis stage was Ⅱ or Ⅲ stage, and all accepted XELOX chemotherapy and followed at least 4 years. The expressions of ERCC1 and TS in gastric cancer tissue were detected by Immunohistochemistry method. The relationship of the expression of ERCC1 and TS with the prognosis was analyzed. Results The positive expression rate of ERCC1 and TS in 86 cases was 40% and 36% respectively. There were negative correlation between the positive expression of ERCC1 and TS and the differentiation of tumor. The mean survival time of patients with negative expression of ERCC1 and TS were significant longer than those with positive expression (allP<0.05). COX multivariate regression analysis revealed that patients with ERCC1 and TS didn't benefit from chemotherapy [HR=0.29, 95%CI(0.12,0.69),P=0.006; HR=0.49, 95%CI(0.20, 0.87),P=0.010]. Conclusion ERCC1 and TS may be a biomarker to predict the prognosis of gastric cancer patients receiving chemotherapy.
gastric cancer; ERCC1; TS; adjuvant chemotherapy; prognosis
王維民,男,主治醫(yī)師,碩士,主要從事腫瘤化療及分子靶向治療方面的研究工作。
湯月華,E-mail:dryzhou@163.com
無(wú)錫市科技局醫(yī)療與公眾健康技術(shù)研發(fā)項(xiàng)目(CSE31N1333);江蘇省惡性腫瘤生物標(biāo)志物與防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放課題(11ZLKF09)
10.3969/j.issn.1008-8849.2015.30.001
R735.2
A
1008-8849(2015)30-3307-04
2014-11-16