秦凡非，曹麗梅，趙嘉祺，傅超美

·炮制制劑·

粒度對(duì)炙甘草煮散飲片煎出效果的影響

秦凡非，曹麗梅，趙嘉祺，傅超美

目的：通過測定不同粒度的炙甘草煮散飲片中成分煎出率及干膏收率，為炙甘草煮散粒度的選擇提供合適范圍。方法：將炙甘草粉碎制成四種不同粒度的煮散飲片，分別測定不同粒度規(guī)格的煮散飲片在不同時(shí)間點(diǎn)的指標(biāo)成分與干膏的煎出率，再通過兩兩對(duì)比檢驗(yàn)觀察各組間差異的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，確定炙甘草煮散飲片最佳粒度范圍。結(jié)果：炙甘草煮散飲片在各時(shí)間點(diǎn)的甘草苷、甘草酸及干膏收率均顯著高于傳統(tǒng)飲片（P＜0.01）。結(jié)論：綜合考慮確定炙甘草煮散飲片適宜粒度范圍為1.18～2.36mm。

炙甘草；煮散；煎出率；最佳粒度；對(duì)比研究

甘草(Radix Glycyrrhizaeet Rhizoma)及其炮制品是中醫(yī)應(yīng)用極其廣泛的一種藥材，素有“十方九草”之稱，也是國內(nèi)年銷量最大的中藥飲片之一。炙甘草系甘草與蜂蜜的炮制加工品，相比生甘草更偏重于補(bǔ)脾和胃與益氣功效，常用于補(bǔ)益類方。煮散飲片指原藥材或傳統(tǒng)飲片粉碎成細(xì)末或粗顆粒，再煎煮服用的用藥形式。它在保留傳統(tǒng)湯劑辨證施治，隨癥加減的優(yōu)勢(shì)外，又具有散劑服用量小的優(yōu)勢(shì)，具有省時(shí)省材的特點(diǎn)[1-3]。為達(dá)到該目的，實(shí)驗(yàn)將炙甘草傳統(tǒng)飲片制成煮散飲片，而關(guān)鍵則在于粒度的確定。適宜的粉碎粒度可以提高藥效，縮短煎煮時(shí)間，但粉碎過細(xì)，會(huì)加強(qiáng)吸附作用，影響有效成分的擴(kuò)散速度，此外含黏液質(zhì)較多的藥材煎煮時(shí)易形成糊狀，影響有效成分的浸出[4]。本研究將以甘草苷、甘草酸和總煎出物為指標(biāo)，對(duì)比傳統(tǒng)飲片研究粒度對(duì)炙甘草煮散飲片煎出效果的影響，篩選炙甘草煮散飲片的最佳粉碎粒度。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1200型高效液相色譜儀（G1315D DAD檢測器，ChemStation for LC 3D systems工作站，美國安捷倫公司）；Kromasil C18色譜柱（250×4.6mm，5μm，Scienhome公司）；高速多功能粉碎機(jī)（上海冰都電器有限公司）；Sartorius-BS110S分析天平（德國賽多利斯公司）；DGG-9240電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）。

1.2 試藥

炙甘草飲片（批號(hào)：20141120）購于巴中科倫

醫(yī)藥貿(mào)易有限公司；甘草苷（批號(hào)：131127）、甘草酸銨（批號(hào)：130225），均購于四川省維克奇生物科技有限公司；色譜乙腈（美國天地公司）；超純水（實(shí)驗(yàn)室自制），其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 甘草不同粒度的煮散的制備

根據(jù)炙甘草飲片的質(zhì)地，將其粉碎為可通過8目篩不能過16目篩的粉末，粒度1.18～2.36mm；可通過16目篩不能過30目篩的粉末，粒度0.60～1.18mm；可通過3 0目篩不能過5 0目篩的粉末，粒度0.35～0.60mm；可通過50目篩不能通過80目篩的粉末，粒度0.18～0.35mm，將以上四種規(guī)格的煮散飲片分別記為A組、B組、C組、D組，傳統(tǒng)飲片為E組。

2.2 水煎液的制備

傳統(tǒng)飲片水煎液的制備:分別稱取炙甘草飲片10g，共6份，置于250mL燒瓶中，取三份樣品各加入10倍量水，分別煎煮10 min、20 min、30 min，濾過，備用；另三份樣品煎煮30min后濾過，收集濾液，濾渣再加入10倍量水分別煎煮10 min，20 min， 30 min，濾過。合并2次濾液，濃縮，定容至50mL。

煮散飲片水煎液的制備:分別稱取炙甘草煮散飲片約10g，共6份，按上述方法制備炙甘草煮散飲片水煎液。

2.3 甘草苷與甘草酸的含量測定

2.3.1 色譜條件 流動(dòng)相A：0.05%磷酸水，流動(dòng)相B：乙腈，流速：1.0 mL．min-1，檢測波長237 nm[5]，梯度洗脫條件見表1。

表1 流動(dòng)相及洗脫條件

2.3.2 對(duì)照品溶液制備 取甘草苷、甘草酸銨對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇配制成含甘草苷1.02 mg．mL-1、甘草酸1.92 mg．mL-1（甘草酸重量=甘草酸銨重量/1.0207）。

2.3.3 供試品溶液的制備 取“2.2”項(xiàng)下各水煎液約4 mL，以8000 r．min-1離心10 min，取上清液經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.3.4 方法學(xué)考察 （1）線性關(guān)系考察：取甘草苷、甘草酸對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇分別配制成含甘草酸1.92 mg．mL-1、甘草苷1.02 mg．mL-1的對(duì)照品溶液。進(jìn)樣體積分別為5μL、8μL、10μL、12μL、16μL、20μL，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，對(duì)照品含量(X)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：甘草酸Y1= 112.2X1+17.7，R2=0.9996；甘草苷Y2= 1292.3X2+ 2231.6，R2=0.9993。結(jié)果表明，甘草苷在5.1 μg～20.4 μg范圍內(nèi)，甘草酸在9.6 μg～38.4 μg范圍內(nèi)，對(duì)照品峰面積與進(jìn)樣量呈良好線性關(guān)系。

(2) 精密度試驗(yàn):精密吸取混合對(duì)照品溶液5 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定甘草苷、甘草酸色譜峰峰面積，結(jié)果RSD值為0.99%、2.07%，表明儀器精密度良好。

(3)穩(wěn)定性試驗(yàn):取“2.2.3”項(xiàng)下制備的供試品溶液，于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h分別進(jìn)樣10 μL，記錄甘草苷、甘草酸峰面積值，結(jié)果RSD值為0.57%、1.94%，表明24 h內(nèi)樣品中甘草苷、甘草酸含量穩(wěn)定。

(4)重復(fù)性試驗(yàn):取甘草煮散飲片6份，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣10μL，測定甘草苷、甘草酸色譜峰峰面積值，其RSD分別為0.75%、2.09%，表明該方法重復(fù)性良好。

(5) 加樣回收率試驗(yàn):精密量取已知含量的樣品溶液1mL（甘草酸含量0.204 mg．mL-1；甘草苷含量0.136 mg．mL-1），共6份，分別精密加入混合對(duì)照品溶液（甘草酸1.055 mg．mL-1；甘草苷0.634 mg．mL-1）0.2ml，按供試品制備方法及色譜條件測定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表2、表3。

表2 甘草酸加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表3 甘草苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果表明，甘草酸和甘草苷的加樣回收率在95～105%之間，平均回收率為99.12%、98.38%，RSD為2.46%、1.67%，表明該方法可靠，符合含量測定要求。

圖1 炙甘草HPLC測定結(jié)果

2.3.5 樣品的含量測定 取“2.2.3”項(xiàng)下的供試品溶液，各精密吸取10 μL，按含量測定方法測定，代入回歸方程，計(jì)算甘草苷、甘草酸含量。

2.3.6 干膏收率測定 按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，定容至200 mL，各取50 mL，置于已恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105 ℃干燥3 h至恒重，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量，計(jì)算干膏收率。

2.4 測定結(jié)果

在不同煎煮時(shí)間點(diǎn)下，甘草傳統(tǒng)飲片和甘草煮散飲片的甘草苷、甘草酸及干膏收率見表4、表5、表6及圖2、圖3、圖4。

表4 不同時(shí)間點(diǎn)甘草苷含量比較（n=3）

30 1.061 0.944 0.921 0.913 0.807 30+10 1.359 1.278 1.186 1.111 0.922 30+20 1.397 1.347 1.224 1.168 1.046 30+30 1.421 1.403 1.319 1.193 1.189

圖2 不同時(shí)間點(diǎn)甘草苷含量比較

表5 不同時(shí)間點(diǎn)甘草酸含量比較（n=3）

圖3 不同時(shí)間點(diǎn)甘草酸含量比較

表6 不同時(shí)間點(diǎn)干膏收率比較（n=3）

圖4 不同時(shí)間點(diǎn)干膏收率比較

結(jié)果表明，在相同的煎煮時(shí)間下，炙甘草煮散飲片的甘草苷和甘草酸及干膏收率的煎出率均高于炙甘草傳統(tǒng)飲片。

2.5 結(jié)果分析

根據(jù)藥物性質(zhì)和現(xiàn)行版藥典對(duì)炙甘草的質(zhì)量控制要求，選擇甘草苷、甘草酸含量測定和干膏收率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用加權(quán)評(píng)分的方式進(jìn)行評(píng)價(jià)。因此甘草苷、甘草酸含量測定權(quán)重系數(shù)相應(yīng)較高，各以0.3為宜；干膏收率在一定程度上能反映出炙甘草煮散顆粒固體成分的煎出率，綜合評(píng)價(jià)時(shí)權(quán)重系數(shù)相應(yīng)較小，以0.4為宜。以煎煮40min的測定值計(jì)算，結(jié)果見表7。

表7 炙甘草粉末粒度篩選綜合評(píng)分

結(jié)果表明，采用綜合評(píng)分法計(jì)算，炙甘草A組總分最高，為9.62分，故選用炙甘草A組（粒度1.18～2.36mm）制備炙甘草煮散飲片。將炙甘草傳統(tǒng)飲片的甘草苷、甘草酸含量規(guī)定為1，再與A組數(shù)據(jù)輸入SPSS 17.0，采用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行處理[6]，結(jié)果表明，A組規(guī)格的炙甘草煮散飲片在不同時(shí)間點(diǎn)的甘草苷與甘草酸煎出率均顯著高于炙甘草傳統(tǒng)飲片（P＜0.01）。

3 討論

本試驗(yàn)對(duì)不同粒度規(guī)格的炙甘草煮散飲片與傳統(tǒng)飲片的煎出率進(jìn)行了考察，表明炙甘草煮散飲片在不同時(shí)間點(diǎn)的甘草苷、甘草酸及干膏收率均顯著高于炙甘草傳統(tǒng)飲片。煮散飲片粒度在0.18～0.35 mm時(shí)，干膏收率在各組中最高；煮散飲片粒度為1.18～2.36 mm時(shí)，甘草苷和甘草酸煎出率為各組最高，與傳統(tǒng)飲片相比有顯著性差異。綜合考慮以上因素，在不影響煎出效率的前提下，認(rèn)為炙甘草煮散飲片粒度在1.18～2.36 mm為宜。

本試驗(yàn)選擇了炙甘草的指標(biāo)性成分和干膏收率進(jìn)行測定以評(píng)價(jià)炙甘草煮散飲片的煎出效率，在一定程度上符合中藥多組分的特點(diǎn)，也在化學(xué)性方面反映了粒度對(duì)煮散飲片煎出效率的影響，證明炙甘草制成煮散飲片后更有利于藥材成分的溶出，而對(duì)于煮散飲片相對(duì)傳統(tǒng)飲片的實(shí)際用量的減少，以及是否達(dá)到量減效不減的作用，則需要對(duì)藥效學(xué)加以研究，以便為煮散飲片的臨床應(yīng)用提供更為科學(xué)合理的依據(jù)。

[1] 彭智平,劉起華,文謹(jǐn),等.基于臨床療效探討傳統(tǒng)中藥服散與煮散的臨床推廣價(jià)值[J].中醫(yī)雜志,2014,55(13):1090.

[2] 袁冰,石東平,宋延青.略論宋代的煮散[J]. 中華中醫(yī)藥雜志,2005,20(10):585.

[3] 丁青龍,李瑩,丁舒,等.中藥生藥顆粒劑與傳統(tǒng)飲片及免煎顆粒臨床療效比較研究[J].吉林中醫(yī)藥,2008,28(7):530.

[4] 黃昆,舒朝暉,劉根凡.中藥飲片粉碎粒度研究進(jìn)展[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2005,12(4):97.

[5] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010.

[6] 董霄漢,董海峰,任大偉.中藥煮散的臨床應(yīng)用研究(五)[J].河南中醫(yī),1990,10(55):38.

（責(zé)任編輯：何瑤）

Effect of particle size on decoction result of powder decoction of ZhiGancao/

QIN Fan-fei, CAO Li-mei, ZHAO Jia-qi, FU Chao-mei//(Pharmacy College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine; Key laboratory of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources in Sichuan Province—Key Laboratory Breeding Base of Co-founded by Sichuan Province and MOST, Chengdu 611137, Sichuan)

Objective:To defne the optimum size of powder decoction of ZhiGancao by comparing components in decoction of different particle sizes.Method:Four powder decoctions of different particle sizes were prepared. Index component and yield of dry extract of different time points were measured to evaluate optimum size of powder decoction through statistical rank-sum test.Result:There was signifcant differences of the concentrations of liquiritin, glycyrrhizic acid and yield of dry extract among powder decoctions and the traditional decoction pieces (P＜0.01),Conclusion:After comprehensive consideration, the proper particle size range of ZhiGancao of powder decoctions is from 1.18 mm to 2.36 mm.

ZhiGancao; powder decoction; decocting rate; optimum particle size; comparative study

R 283.6

A

1674-926X(2015)02-005-04

成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，成都 611137

秦凡非，在讀碩士研究生，從事中藥藥劑學(xué)研究Email:ohmightcat@163.com

傅超美，博士，教授，從事中藥藥劑學(xué)研究

Email:chaomeifu@126.com

2014-11-23