趙 兵 張苗苗 張 虹 解 晶

浙江省臺(tái)州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江臺(tái)州318020

CD 64指數(shù)在慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者抗感染治療中的臨床應(yīng)用

趙 兵 張苗苗 張 虹 解 晶

浙江省臺(tái)州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江臺(tái)州318020

目的探討中性粒細(xì)胞CD64平均熒光強(qiáng)度指數(shù)（CD64指數(shù)）在慢性阻塞性肺疾病急性加重期（AECOPD）患者抗感染治療中的臨床應(yīng)用。方法選取2013年9月～2014年12月在本院呼吸科接受住院治療的120例慢性阻塞性肺疾?。–OPD）患者，其中AECOPD患者81例，COPD穩(wěn)定期39例；同時(shí)選取本院健康體檢者33例為對(duì)照組。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD64指數(shù)，同時(shí)檢測(cè)血清降鈣素原（PCT）、C-反應(yīng)蛋白（CRP）、白細(xì)胞（WBC）計(jì)數(shù)及中性粒細(xì)胞百分比（NEU%）。結(jié)果AECOPD組CD64指數(shù)明顯高于COPD穩(wěn)定期組和健康對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；同時(shí)CD64指數(shù)與PCT、CRP、NEU%呈正相關(guān)，與WBC計(jì)數(shù)無相關(guān)性；當(dāng)CD64指數(shù)截取值為2.54時(shí)，其診斷AECOPD細(xì)菌感染的敏感性為86.3%，特異性為90.5%。結(jié)論CD64指數(shù)可以作為AECOPD患者細(xì)菌感染的早期診斷指標(biāo)，指導(dǎo)臨床用藥。

慢性阻塞性肺疾病；CD64；降鈣素原；抗感染治療

慢性阻塞性肺疾?。–OPD）是一種嚴(yán)重危害人類健康的常見病，在我國40歲以上人群中發(fā)病率高達(dá)8.2%[1]，而反復(fù)發(fā)作的慢性阻塞性肺疾病急性加重（AECOPD）期可導(dǎo)致患者肺功能惡化和生活質(zhì)量下降，是COPD患者死亡的重要原因。誘發(fā)AECOPD發(fā)作的最常見的因素是感染[2]，而在有抗菌指征的AECOPD患者中，積極高效的抗生素治療可迅速緩解臨床癥狀，縮短病程，并可以延緩下一次發(fā)作的時(shí)間，因此臨床迫切需要一些可以明確患者感染類型的炎癥指標(biāo)幫助臨床診斷治療。近年來，中性粒細(xì)胞CD64作為一種有效預(yù)示細(xì)菌感染的生物學(xué)標(biāo)志物，得到了臨床工作者的重視[3-6]。本文以流式細(xì)胞儀檢測(cè)中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)作為觀察指標(biāo)，并與其它炎癥指標(biāo)如血清降鈣素原（PCT）、C-反應(yīng)蛋白（CRP）、白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）及中性粒細(xì)胞百分比（NEU%）作對(duì)比分析，評(píng)估CD64指數(shù)在細(xì)菌感染的AECOPD患者診斷治療及預(yù)后等方面的應(yīng)用價(jià)值。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

隨機(jī)抽取2013年9月～2014年12月于本院呼吸內(nèi)科接受住院治療的AECOPD患者共81例，其中男32例，女49例，年齡40～94歲，平均（59±15）歲；同期選取COPD穩(wěn)定期組39例，其中男21例，女18例，年齡45～78歲，平均（61±16）歲；③健康對(duì)照組來源于本院體檢者共33例，其中男17例，女16例，年齡53～75歲，平均（57±9）歲。COPD穩(wěn)定期診斷符合《慢性阻塞性肺疾病診治指南》（2013年修訂版）[7]，AECOPD組診斷符合慢性阻塞性肺疾病急性加重（AECOPD）診治中國專家共識(shí)（2014年修訂版）[8]，且AECOPD組均經(jīng)臨床或?qū)嶒?yàn)室明確診斷為細(xì)菌感染。排除標(biāo)準(zhǔn)：呼吸系統(tǒng)之外部位存在細(xì)菌感染；合并有惡性腫瘤的患者或自身免疫性疾病的患者；入選前4周內(nèi)使用過抗生素的患者；合并其他慢性呼吸系統(tǒng)疾??；健康對(duì)照組體檢正常，并近1個(gè)月內(nèi)無感染性疾病發(fā)生，三組研究對(duì)象在年齡、性別等方面進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），所有研究對(duì)象均獲知情同意。

1.2 標(biāo)本采集和處理

AECOPD組在入院后決定使用抗生素前采血樣送檢；COPD組在入院后常規(guī)治療前采血，健康對(duì)照組在體檢當(dāng)天采集空腹靜脈血。

1.3 儀器和試劑

WBC計(jì)數(shù)及NEU%檢測(cè)采用日本Sysmex2100五分類血細(xì)胞分析儀及配套試劑；PCT檢測(cè)使用德國Roche Cobas e601全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光儀及配套試劑，參考范圍為（0～0.046）ng/mL；CRP檢測(cè)采用日立HITACHI7600-010全自動(dòng)生化分析儀，試劑購自北京利德曼公司，參考范圍為（0～5）mg/L；CD64指數(shù)檢測(cè)采用美國BD公司流式細(xì)胞儀。

1.4 CD64指數(shù)的檢測(cè)

采用EDTA-K2抗凝血50μL+CD64-FITC鼠抗人單克隆抗體（購自美國BD公司）室溫孵育15 min后加溶血素2 mL，孵育15 min離心后棄上清液加PBS洗滌2遍，再加入0.5 mL回定液，置流式細(xì)胞儀中檢測(cè)其平均熒光強(qiáng)度，以淋巴細(xì)胞為陰性對(duì)照，單核細(xì)胞為陽性對(duì)照，中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)=待測(cè)粒細(xì)胞CD64平均熒光強(qiáng)度/淋巴細(xì)胞CD64平均熒光強(qiáng)度。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。對(duì)所有計(jì)量資料行正態(tài)分布檢驗(yàn)，滿足正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，各組間比較采用單因素方差分析，治療前后的比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，各檢測(cè)指標(biāo)間相關(guān)性分析采用Spearman法；同時(shí)繪制受試者工作特征（ROC）曲線確定CD64指數(shù)等指標(biāo)診斷AECOPD細(xì)菌感染的敏感性和特異性，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組研究對(duì)象檢測(cè)結(jié)果比較

與COPD穩(wěn)定期組和健康對(duì)照組相比，AECOPD組各項(xiàng)指標(biāo)如CD64指數(shù)、PCT、CRP及NEU%明顯高于COPD穩(wěn)定期組和健康對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；AECOPD組WBC計(jì)數(shù)與健康對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與COPD穩(wěn)定期組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。COPD穩(wěn)定期組和健康對(duì)照組的CD64、PCT、NEU%、CRP比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 三組研究對(duì)象CD64、PCT、CRP、WBC及NEU%檢測(cè)結(jié)果比較（x±s）

2.2 ROC曲線及結(jié)果相關(guān)性分析

應(yīng)用ROC曲線評(píng)價(jià)這五項(xiàng)炎癥指標(biāo)在診斷AECOPD細(xì)菌感染的價(jià)值，將AECOPD組和COPD組的數(shù)據(jù)作ROC曲線，選用Youden指數(shù)（敏感性+特異性）最大時(shí)為最佳截取值，結(jié)果顯示最佳截取值分別為CD64指數(shù)2.54、PCT為0.119 ng/mL、CRP為7.6mg/L、WBC為7.8×109/L、NEU%為77.3%，曲線下面積依次CD64（0.888）＞PCT（0.769）＞CRP（0.728）＞W(wǎng)BC（0.576），當(dāng)CD64指數(shù)臨界值為2.54時(shí)，其診斷AECOPD細(xì)菌感染敏感性為86.3%，特異性為90.5%；PCT臨界值為0.119時(shí)敏感性為89.1%，但特異性只有49.7%，可見CD64指數(shù)在診斷AECOPD患者細(xì)菌感染的效能最大。同時(shí)對(duì)CD64和PCT、CRP、WBC及NEU%作相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)AECOPD組CD64指數(shù)與PCT、CRP、NEU%呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為r=0.619，r=0.572，r=0.530，P＜0.05；CD64與WBC無相關(guān)性（r=0.205，P= 0.116＞0.05）。見封三圖5。

2.3 治療前后CD64指數(shù)變化情況比較

AECOPD組患者經(jīng)抗生素治療一周癥狀明顯緩解后重新抽血復(fù)查（其中6例因特殊情況沒有采血，另2例病情突然加重除外），結(jié)果均值由（3.46±1.13）降為（1.66±0.34），與治療前相比結(jié)果明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=7.15，P＜0.01），但仍高于健康對(duì)照組（0.55±0.13），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.78，P＜0.05）。

3 討論

誘發(fā)AECOPD發(fā)作的病因有多種，最常見的原因是細(xì)菌感染。在臨床工作中，臨床醫(yī)師常根據(jù)患者的臨床癥狀如氣喘、痰液性狀和（或）黏度改變以及體溫等來得出初步結(jié)論，然后再結(jié)合一些實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)如CRP、WBC及NEU%等指標(biāo)來決定是否使用抗生素。由于COPD患者多為老年人，常伴有免疫功能低下，有時(shí)細(xì)菌感染和病毒等非典型病原體感染在臨床表現(xiàn)上難以區(qū)分，而這些常見的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)敏感性及特異性方面還不足以成為AECOPD患者使用抗生素的指導(dǎo)指標(biāo)[9，10]，因此在入院之初，醫(yī)生常常很難準(zhǔn)確地判斷患者病情加重的原因。目前臨床上對(duì)于AECOPD病人仍然以經(jīng)驗(yàn)抗感染治療為主[11]。有資料顯示，AECOPD患者約有50%為細(xì)菌感染，但最終約有85%的患者接受抗生素治療[12]，這就使得其中部分患者并不能從抗生素治療中獲益，導(dǎo)致目前抗生素的濫用和隨之而來的細(xì)菌耐藥問題。在臨床工作中判斷AECOPD患者是否為細(xì)菌感染，做培養(yǎng)最為準(zhǔn)確，但由于其時(shí)效性較差，且易受到多方面因素的影響，陽性率不高，同時(shí)還不能排除定植菌的影響，易延誤AECOPD治療，甚至增加病死率。

CD64是IgG的FC受體，是一種穿膜糖蛋白，屬于免疫球蛋白超家族成員，可以觸發(fā)和調(diào)控機(jī)體的多種免疫反應(yīng)，主要分布在單核細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等抗原遞呈細(xì)胞表面，在中性粒細(xì)胞表面低水平表達(dá)，當(dāng)受到細(xì)菌細(xì)胞壁的成分脂多糖、集落刺激因子等細(xì)胞因子刺激后，可在中性粒細(xì)胞表面大量表達(dá)，一般表現(xiàn)為刺激后4～6 h上升，24 h左右達(dá)到峰值。同時(shí)CD64的表達(dá)較穩(wěn)定，不受疾病活動(dòng)性、藥物的使用、酒精暴露以及種族方面因素的干擾[13]，較適合作為實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)。近年來，隨著對(duì)CD64研究的深入，其對(duì)細(xì)菌感染的早期預(yù)警作用越來越明確[14-16]，也得到了臨床工作者的重視。

本研究結(jié)果顯示，CD64指數(shù)在AECOPD組細(xì)菌感染時(shí)明顯升高（P＜0.01），且與疾病的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，當(dāng)抗感染治療有效后明顯下降（P＜0.01），當(dāng)CD64指數(shù)截取值為2.54時(shí)，敏感性和特異性綜合性能明顯優(yōu)于其他指標(biāo)。與其他指標(biāo)相關(guān)性分析，結(jié)果顯示CD64指數(shù)與PCT、CRP及NEU%相關(guān)性較好，與WBC計(jì)數(shù)無相關(guān)性（r=0.205），與吳海燕等[17]研究基本一致，說明WBC計(jì)數(shù)不適合作為COPD患者細(xì)菌感染的觀察指標(biāo)。從ROC曲線圖可以看出，CD64指數(shù)在診斷AECOPD細(xì)菌感染時(shí)曲線下面積最大，說明其在診斷AECOPD細(xì)菌感染方面效能最好；CRP和NEU%敏感性也較高，但這兩個(gè)指標(biāo)均是非特異性炎癥指標(biāo)，應(yīng)用其作為鑒別是否存在細(xì)菌感染還有一定局限性。PCT作為一種較特異的炎癥標(biāo)志物，在全身性細(xì)菌感染特別是膿毒血癥的診斷價(jià)值得到了大家的共識(shí)，近年來也應(yīng)用到局限性細(xì)菌感染的診斷方面，但其診斷價(jià)值還存在爭議，主要是敏感性不高[18-20]。本研究結(jié)果顯示當(dāng)PCT結(jié)果取的截?cái)嘀狄源蠹夜J(rèn)的≥0.25 ng/mL作為使用抗生素時(shí)，特異性可達(dá)91.2%，但敏感性只有32.8%，造成較高的漏診率，當(dāng)檢測(cè)截?cái)嘀禐?.119 ng/mL時(shí)敏感性（89.1%）高，但特異性較低（49.7%）。值得一提的是本研究AECOPD組中有2例患者，在臨床癥狀或其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)都顯示病情趨于穩(wěn)定時(shí)，CD64指數(shù)和PCT卻突然同時(shí)明顯升高，結(jié)果患者當(dāng)天下午由于感染突然加重而進(jìn)入病危狀態(tài)，說明這兩項(xiàng)指標(biāo)都可以較特異地反映患者真實(shí)的感染情況，這一點(diǎn)得到臨床醫(yī)生的認(rèn)可，同時(shí)也證實(shí)了PCT是一項(xiàng)較好的抗菌治療的療效觀察指標(biāo)，與CD64指數(shù)表現(xiàn)高度一致。

綜上所述，CD64指數(shù)作為一種較新的炎癥指標(biāo)，在細(xì)菌感染誘發(fā)的AECOPD患者中可以高表達(dá)，并與感染的嚴(yán)重程度一致，可以用來指導(dǎo)臨床合理用藥，也可以用于病情監(jiān)測(cè)和療效觀察，同時(shí)與PCT、CRP等指標(biāo)聯(lián)合使用可進(jìn)一步提高診斷細(xì)菌感染的敏感性和特異性，值得在臨床推廣。

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The clinical app lications of CD64 index on the anti-infection treatment in acute exacerbations of chronic obstructive pulm onary disease（AECOPD）patients

ZHAO Bing ZHANG Miaomiao ZHANG Hong XIE Jing
Department of Laboratory，Taizhou First People's Hospital in Zhejiang Province，Taizhou 318020,China

ObjectiveTo investigate the clinical applications of neutrophils CD64 averagemean fluorescence intensity index（CD64 index）on the anti-infection treatment of acute exacerbations of chronic obstructive pulmonary disease（AECOPD）patients.MethodsA total of 120 cases of chronic obstructive pulmonary disease（COPD）patientswho had received hospital treatment in respiratory department from September 2013 to December 2014 were selected，including 81 cases of AECOPD patients and 39 cases of COPD stable phase patients;at the same time，33 cases of healthy volunteers were selected as control group.Flow cytometry was applied to measure the CD64 index，and procalcitonin（PCT），C-reactive protein（CRP），white blood cell（WBC）count and neutrophils percentage（NEU%）were measured.Resultsthe CD64 index in AECOPD group was significantly higher than COPD stable phase group and control group，the difference was significant（P＜0.05）;CD64 index was positively correlated with PCT，CRP and NEU%，butwas not correlated with WBC count;when the intercept value of CD64 index was 2.54，the sensitivity to diagnose AECOPD bacterial infection was 86.3%with specificity of 90.5%.ConclusionTherefore，CD 64 can be used as an early phase diagnose indicator of bacterial infection of AECOPD patient，and can guide the clinicalmedicine treatment.

Chronic obstructive pulmonary disease;Neutrophil CD64;Procalcitonin;Anti-infection treatment

R563

B

1673-9701（2015）36-0127-04

2015-11-05）

浙江省臺(tái)州市黃巖區(qū)科技計(jì)劃項(xiàng)目[2012038（9）]