肺癌組織中相關(guān)標(biāo)志物表達(dá)的變化及臨床意義

王永蘭朱建勇

作者單位： 442000 十堰，湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院

呼吸內(nèi)科

【關(guān)鍵詞】支氣管肺癌；血管內(nèi)皮生長因子；MMP-9；CA125；CA153

肺癌是目前在全世界范圍內(nèi)發(fā)病率及病死率均居于首位的惡性腫瘤，全球每年新發(fā)現(xiàn)肺癌患者超過1 000萬，占全世界新發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤患者的12.7%[1-2]，在很多國家肺癌已成為腫瘤患者的第一大死因[3]。我國《2012年中國衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)提要》顯示，2004年至2005年，中國肺癌的死亡率為30.61/10萬，居十大惡性腫瘤死亡率之首，且發(fā)患者數(shù)呈逐年遞增的趨勢[4]。 血管內(nèi)皮生長因子 (vascular endothelial growth factor, VEGF)及MMP-9由腫瘤細(xì)胞合成和分泌，它們與腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[5]。CA125是一種混合型腫瘤標(biāo)志物，為一種膜抗原，廣泛存在于腫瘤組織中，腫瘤發(fā)生時(shí)其含量升高。CA153為存在于多種腺癌內(nèi)的一種多形上皮黏蛋白，有較明顯的腫瘤和器官特異性[6]。我們通過免疫組化法觀察2013年3月至2014年9月我院收治的肺癌患者組織中相關(guān)標(biāo)志物VEGF、MMP-9、CA125、CA153的表達(dá)變化，以探討其對肺癌的臨床診斷價(jià)值和治療意義。

材料與方法

一、病例資料

2013年3月至2014年9月本院呼吸內(nèi)科確診為肺癌患者共80例，后均轉(zhuǎn)入胸外科進(jìn)行手術(shù)治療，手術(shù)時(shí)留取肺癌組織及癌旁組織，癌種類和分期經(jīng)過病理確診。80例肺癌患者均檢測肺癌組織中、癌旁組織中VEGF、MMP-9、CA125、CA153。納入研究的患者的詳細(xì)資料，見表1。

二、實(shí)驗(yàn)試劑與儀器

1.實(shí)驗(yàn)試劑：一抗：鼠抗人VGEF單克隆抗體(E-VM-001N2)，鼠抗人MMP-9單克隆抗體(G0Y-Y1370)，鼠抗人CA125單克隆抗體(SM0801)，鼠抗人CA153單克隆抗體(SM0620)；二抗：山羊抗兔IgG抗體；免疫組化試劑盒。

2.主要儀器：不銹鋼高壓鍋、微波爐、水浴鍋、濕盒、移液槍、顯微鏡等。主要儀器應(yīng)注明型號廠商等。

三、 實(shí)驗(yàn)方法

1. 取肺癌組織和癌旁組織，10%福爾馬林固定后，石蠟包埋，切片、用于免疫組化檢測。

2. 免疫組化操作步驟：組織切片二甲苯脫蠟、不同濃度乙醇梯度脫水，然后放于pH 6.0的枸椽酸緩沖液中微波加熱修復(fù)抗原，冷卻，PBS 清洗；用3%過氧化氫溶液浸泡10 min，除去內(nèi)源性過氧化物酶，PBS清洗2次，每次5 min；加入一抗(VEGF、MMP-9、CA125、CA153抗體)，滴加封閉劑，37 ℃孵育30 min，4 ℃孵育過夜，加羊抗兔/小鼠IgG 多聚體，37 ℃ 孵育30 min，PBS 洗滌3次，每次5 min；DAB 顯色，蘇木素復(fù)染，脫水，透明，中性樹膠封片，光學(xué)顯微鏡下觀察。陰性對照一抗用PBS代替。細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)呈棕黃色顆粒的為陽性細(xì)胞。染色強(qiáng)度評分：陰性1分，弱陽性為2分，中等陽性為3分，強(qiáng)陽性為4分；陽性細(xì)胞百分比評分：<25%：1 分，25%～50%：2分，51%～75%：3 分，>75%：4分。兩者評分相乘，≤2分為陰性，>2分為陽性[7]。

表1　肺癌患者詳細(xì)資料表

四、 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS16.0 軟件統(tǒng)計(jì)，數(shù)據(jù)描述采用百分率表示，計(jì)數(shù)資料比較采用卡方檢驗(yàn)或Fisher精確檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

一、肺癌組織與癌旁組織中VEGF、MMP-9、CA125、CA153蛋白的表達(dá)

肺癌組織中VEGF、MMP-9、CA125、CA153蛋白陽性表達(dá)率分別為51.42%、62.23%、58.53%、57.45%，癌旁組織中各蛋白的表達(dá)率分別為12.35%、15.64%、20.74%、13.23%，肺癌組織與癌旁正常組織相比，P值均<0.001，見表2。

表2　肺癌組織與癌旁組織相關(guān)標(biāo)志物陽性表達(dá)率(%)

二、VEGF、MMP-9、CA125、CA153蛋白表達(dá)與臨床病理資料關(guān)系

MMP-9、CA125表達(dá)與肺癌臨床分期有關(guān)，呈正相關(guān) (r=0.312，r=0.234；P<0.05)；CA153表達(dá)與肺癌亞型有關(guān)，呈正相關(guān)(r=0.278，P<0.05)； VEGF、MMP-9表達(dá)與肺癌浸潤程度及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，呈正相關(guān)(r=0.347，r=0.325；P<0.05)，見表3。

討論

CA125是一種混合型腫瘤標(biāo)志物，為一種膜抗原，廣泛存在于腫瘤組織中，腫瘤發(fā)生時(shí)其含量升高。研究表明肺癌患者血清中CA125 的陽性表達(dá)率增高、敏感性和特異性也增強(qiáng)[8]。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)血清中CA125 對非小細(xì)胞肺癌的診斷和預(yù)后判定有一定的參考價(jià)值，且CA125 水平在肺癌患者晚期含量升高[9-10]。CA153是存在于多種腺癌內(nèi)的一種多形上皮黏蛋白，有較明顯的腫瘤和器官特異性。研究發(fā)現(xiàn)肺癌不同組織學(xué)亞型中，肺腺癌組血清中CA153 的陽性率及含量高于鱗癌和小細(xì)胞肺癌組[11]。但是臨床診斷中若采用單一的CA15-3 檢測很難揭示肺癌發(fā)生、發(fā)展的過程，其作為腫瘤標(biāo)志物的應(yīng)用受到一定限制，因此臨床診斷中常與其他腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(CA125等)，從而判斷出腫瘤的亞型、分期等。

腫瘤生長、轉(zhuǎn)移是依靠新生血管以及降解細(xì)胞外基質(zhì)實(shí)現(xiàn)的，同時(shí)基質(zhì)降解是通過一系列的蛋白酶的催化來完成的。影響血管生長的重要調(diào)控因子VEGF，能促進(jìn)腫瘤血管新生、同時(shí)使血管通透性增加等，促使腫瘤發(fā)生浸潤和轉(zhuǎn)移[12]?；|(zhì)金屬M(fèi)MPs是一類水解蛋白酶家族，可以使基膜和細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrixs, ECMs) 中的Ⅳ型膠原發(fā)生降解，在惡性腫瘤的生長、侵襲及轉(zhuǎn)移過程中起重要作用，而MMP-9是其中一種Ⅳ型膠原酶[13-14]。

表3　肺癌組織VEGF、MMP-9、CA125、CA153蛋白表達(dá)與

本研究聯(lián)合檢測VEGF、MMP-9、CA125、CA153在肺癌組織中的陽性表達(dá)率，發(fā)現(xiàn)癌組織中CA125、CA153的陽性率明顯高于癌旁組織，且CA125在臨床Ⅲ/Ⅳ期的表達(dá)高于Ⅰ/Ⅱ期，CA153在肺腺癌組織的表達(dá)高于肺鱗癌。同時(shí)，與癌旁正常肺組織相比，癌組織中VEGF、MMP-9陽性表達(dá)均升高，VEGF、MMP-9表達(dá)在肺癌浸潤T3/T4期時(shí)高于T1/T2期、在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌中含量表達(dá)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌組織。因此通過聯(lián)合檢測相關(guān)的腫瘤標(biāo)志物，可以準(zhǔn)確判斷出腫瘤的亞型、分期等，并能通過檢測VEGF、MMP-9診斷出肺癌的浸潤程度以及腫瘤的轉(zhuǎn)移情況，為臨床肺癌的診斷和治療提供科學(xué)依據(jù)。

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(本文編輯：王亞南)

王永蘭，朱建勇. 肺癌組織中相關(guān)標(biāo)志物表達(dá)的變化及臨床意義[J/CD]. 中華肺部疾病雜志： 電子版， 2015， 8(4)： 456-458.

·短篇論著·

收稿日期：(2014-12-05)

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：中圖法分類號： R734.2 B

通訊作者：朱建勇，Email: dzjy1973@163.com

DOI：10.3877/cma.j.issn.1674-6902.2015.04.012