黃 海，張 鑫，鄒 杭，楊海艷，曹晶晶，安德榮

(旱區(qū)作物逆境生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/西北農(nóng)林科技大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，陜西 楊凌 712100)

番茄灰霉病菌室內(nèi)毒力測(cè)定及藥效試驗(yàn)

黃 海，張 鑫，鄒 杭，楊海艷，曹晶晶，安德榮

(旱區(qū)作物逆境生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/西北農(nóng)林科技大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，陜西 楊凌 712100)

【目的】 研究解淀粉芽孢桿菌對(duì)番茄灰霉病的防治效果，為該藥劑的應(yīng)用提供參考?！痉椒ā?采用菌絲生長(zhǎng)速率法和孢子萌發(fā)法，分別測(cè)定了解淀粉芽孢桿菌(WP)、枯草芽孢桿菌(WP)、40%多菌靈(WP)、50%異菌脲(WP)和40%嘧霉胺(WP)對(duì)番茄灰霉病菌菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)的抑制作用及有效抑制中質(zhì)量濃度(EC50)；采用盆栽試驗(yàn)和田間試驗(yàn)，分別測(cè)定了以上5種藥劑對(duì)番茄灰霉病的防治效果?！窘Y(jié)果】 解淀粉芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、40%多菌靈、50%異菌脲和40%嘧霉胺對(duì)番茄灰霉病菌菌絲生長(zhǎng)抑制的EC50分別為946.28，757.19，75.36，8.95和5.53 μg/mL，對(duì)孢子萌發(fā)抑制的EC50分別為1 665.56，1 416.16，241.90，37.32和21.35 μg/mL。盆栽試驗(yàn)結(jié)果顯示，解淀粉芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、40%多菌靈、50%異菌脲和40%嘧霉胺750倍液的保護(hù)效果分別為68.47%，70.14%，74.18%，74.13%和80.63%。田間試驗(yàn)結(jié)果顯示，解淀粉芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、40%多菌靈、50%異菌脲和40%嘧霉胺750倍液的防治效果分別為63.37%，64.83%，69.56%，73.49%和75.55%?！窘Y(jié)論】 解淀粉芽孢桿菌對(duì)番茄灰霉病菌的室內(nèi)毒力作用和田間防治效果與枯草芽孢桿菌相當(dāng)，可以作為田間防治番茄灰霉病菌的一種輔助藥劑。

解淀粉芽孢桿菌可濕性粉劑；番茄灰霉??；藥效試驗(yàn)；輔助藥劑

隨著番茄生產(chǎn)的發(fā)展，保護(hù)地番茄栽培面積的不斷擴(kuò)大，番茄上的各種病害也在逐年增加，已成為番茄生產(chǎn)中的一大障礙。其中由灰葡萄孢引起的番茄灰霉病為當(dāng)前番茄生產(chǎn)上的重要病害，已在全國(guó)各地普遍發(fā)生，并造成嚴(yán)重減產(chǎn)減收。一般發(fā)病田塊番茄灰霉病造成的產(chǎn)量損失為20%～40%，重病田塊達(dá)到60%以上[1]。種植抗病品種能最大限度地降低番茄灰霉病危害，但是由于抗源材料的缺乏，番茄抗灰霉病育種基本處于停滯狀態(tài)[2]。因此目前防治番茄灰霉病以化學(xué)藥劑為主，防治過(guò)程中存在用藥量大、成本高、防效差、污染重、農(nóng)藥殘留超標(biāo)等問(wèn)題[3]。而在番茄灰霉病發(fā)生普遍的地區(qū)，使用拮抗微生物進(jìn)行防治，可以減少化學(xué)農(nóng)藥的使用，解決農(nóng)藥殘留問(wèn)題，延緩病菌抗藥性產(chǎn)生[4]。隨著人們對(duì)環(huán)境問(wèn)題的日益關(guān)注和對(duì)綠色食品需求的提高，微生物防治日益成為控制番茄灰霉病的一條重要而有效的途徑。國(guó)內(nèi)外報(bào)道了多種細(xì)菌、真菌及放線菌對(duì)番茄灰霉病菌具有一定的抑制作用，其中芽孢桿菌防治番茄灰霉病是近年的研究熱點(diǎn)[5]。但對(duì)于芽孢桿菌生防菌株的研究大多仍處于實(shí)驗(yàn)室研究階段，開(kāi)發(fā)成為生防制劑的較少。主要原因之一是微生物制劑的劑型加工相比化學(xué)農(nóng)藥困難。目前，已成功商品化的芽孢桿菌生防制劑有枯草芽孢桿菌、多粘類(lèi)芽孢桿菌等[6]。

解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)是一種與枯草芽孢桿菌親緣性很高的細(xì)菌，在其自身的生長(zhǎng)過(guò)程中可以產(chǎn)生一系列的代謝產(chǎn)物，抑制真菌和細(xì)菌的活性[7-14]。因此，解淀粉芽孢桿菌也是近幾年芽孢桿菌中的研究熱點(diǎn)[15]。但關(guān)于其生防菌劑的應(yīng)用開(kāi)發(fā)發(fā)展較晚，2014-04月美國(guó)Certis公司才開(kāi)始銷(xiāo)售解淀粉芽孢桿菌殺菌劑產(chǎn)品。在我國(guó)，由陜西加侖多作物科學(xué)有限公司生產(chǎn)的解淀粉芽孢桿菌生防菌劑于2013-01獲得正式農(nóng)藥批號(hào)。解淀粉芽孢桿菌在農(nóng)業(yè)上一直作為菌肥使用，其作為生防菌劑在田間的防治效果還有待于檢測(cè)。本研究采用菌絲生長(zhǎng)速率法和孢子萌發(fā)法，測(cè)定了解淀粉芽孢桿菌對(duì)番茄灰霉菌的室內(nèi)毒力和田間藥效，為該藥劑應(yīng)用于田間防治番茄灰霉病提供參考。

1 材料與方法

1.1 材 料

供試藥劑：解淀粉芽孢桿菌(1×109CFU/gB.amyloliquefaciens,WP)，陜西加侖多作物科學(xué)有限公司生產(chǎn)；枯草芽孢桿菌(1×109CFU/gB.subtilis,WP)，云南星耀生物制品有限公司生產(chǎn)；40%多菌靈(40% carbendazim,WP)，四川國(guó)光農(nóng)化股份有限公司生產(chǎn)；50%異菌脲 (50% iprodione,WP)，江西禾益化工有限公司生產(chǎn)；40%嘧霉胺(40% pyrimethanil,WP)，山東青島瀚正益農(nóng)生物科技有限公司生產(chǎn)。

病原菌：番茄灰霉病菌(Botrytiscinerea)，由旱區(qū)作物逆境生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室保藏。

1.2 方 法

1.2.1 無(wú)菌藥液的制備[16]分別稱取藥劑1.0 g，加20 mL 20 mmol/L pH 8.0磷酸鹽緩沖液于100 mL燒杯中，充分振蕩10 min，倒入40 mL離心杯中，8 000 r/min離心15 min，取上清液。沉淀中加入5 mL體積分?jǐn)?shù)100%甲醇(AR)浸泡20 min，減壓過(guò)濾，取濾液與上清液合并，轉(zhuǎn)入25 mL容量瓶中，用磷酸鹽緩沖液定容至刻度，其中解淀粉芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌的定容液用微孔濾膜(≤0.22 μm)過(guò)濾，最終得各藥劑的25倍稀釋液，即40 mg/mL的無(wú)菌工作母液。

1.2.2 番茄灰霉病菌孢子懸浮液的制備 采用孢子萌發(fā)法[17]測(cè)定5種藥劑對(duì)番茄灰霉菌孢子萌發(fā)的抑制作用。將番茄灰霉病菌在PDA培養(yǎng)基上于22 ℃培養(yǎng)5～7 d，待病原真菌長(zhǎng)出大量孢子后，用去離子水從培養(yǎng)基上洗脫、過(guò)濾，1 000 r/min離心5 min，倒去上清液，加入去離子水，再離心。最后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%蔗糖溶液重懸浮孢子至6×106/mL，調(diào)節(jié)懸浮液的pH至2。

1.2.3 5種藥劑對(duì)番茄灰霉病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用 采用菌絲生長(zhǎng)速率法[18]測(cè)定。在溶化PDA培養(yǎng)基的同時(shí)，用移液槍吸取1 mL 2 mg/mL硫酸鏈霉素于25 mL的無(wú)菌刻度管，再在各管中分別加入解淀粉芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌工作母液1 000，500，250，125，62.5，32 μL，混勻，倒入冷卻至60 ℃左右的PDA培養(yǎng)基至20 mL刻度處(相當(dāng)于將各藥液質(zhì)量濃度再稀釋20倍)，迅速搖勻并倒入直徑9 cm的培養(yǎng)皿中，制成含不同質(zhì)量濃度(2 000，1 000，500，250，125，62.5 μg/mL)藥劑的平板。同樣的方法處理40%多菌靈、50%異菌脲和40%嘧霉胺，制成含不同質(zhì)量濃度(24，12，6，3，1.5，0.75 μg/mL)藥劑的平板。待培養(yǎng)基凝固后，用滅菌的打孔器沿菌落邊緣打取直徑為6 mm的菌餅，將有菌絲的一側(cè)貼于培養(yǎng)基中心，每皿1片，共3皿。設(shè)不加樣品液的平皿作空白對(duì)照(CK)。22 ℃培養(yǎng)120 h后，觀察番茄灰霉病菌菌落的生長(zhǎng)情況，用游標(biāo)卡尺測(cè)量菌落直徑，精確到0.02 mm，取其平均值，將數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)化后進(jìn)行回歸分析，求取各藥劑的毒力回歸方程、有效抑制中質(zhì)量濃度(EC50)和相對(duì)毒力指數(shù)。

1.2.4 5種藥劑對(duì)番茄灰霉病菌孢子萌發(fā)的抑制作用 用移液槍從低質(zhì)量濃度至高質(zhì)量濃度，依次吸取用無(wú)菌水溶解的藥液0.5 mL，分別加入2.0 mL的滅菌離心管中，然后吸取制備好的番茄灰霉病菌孢子懸浮液0.5 mL，使藥液與番茄灰霉病菌孢子懸浮液等量混合均勻，配制成含番茄灰霉病菌孢子的200，400，800，1 200和1 600倍稀釋藥液。用移液槍吸取上述混合液滴到凹玻片上，然后架放于帶有潤(rùn)濕濾紙片的培養(yǎng)皿中，于22 ℃的培養(yǎng)箱中加蓋保濕培養(yǎng)。每處理3次重復(fù)，并設(shè)不含藥劑的處理為空白對(duì)照。培養(yǎng)12 h，空白對(duì)照孢子萌發(fā)率達(dá)到90%以上，檢查各處理孢子的萌發(fā)情況。光學(xué)顯微鏡下，每處理隨機(jī)觀察5個(gè)視野，調(diào)查孢子總數(shù)不少于300個(gè)，分別記錄孢子萌發(fā)數(shù)和孢子總數(shù)，將數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)化后進(jìn)行回歸分析，求取各藥劑的毒力回歸方程、有效抑制中質(zhì)量濃度(EC50)和相對(duì)毒力指數(shù)。

1.2.5 5種藥劑對(duì)番茄灰霉病防治的盆栽試驗(yàn) 用清水將5種藥劑配制成750，1 000和1 250倍稀釋藥液。保護(hù)性試驗(yàn)：將不同稀釋倍數(shù)藥液均勻噴施于葉面至全部潤(rùn)濕，待葉面藥液自然風(fēng)干24 h后，將番茄灰霉病菌孢子懸浮液噴霧接種于成熟期番茄植株。治療性試驗(yàn)：將番茄灰霉病菌孢子懸浮液噴霧接種葉面24 h后，將不同稀釋倍數(shù)藥液均勻噴施于葉面至全部潤(rùn)濕。每處理3盆，4次重復(fù)，以清水處理為空白對(duì)照。接種后移至溫室中黑暗條件下培養(yǎng)24 h，然后在22 ℃及12 h光照、12 h黑暗交替條件下培養(yǎng)7 d，分級(jí)調(diào)查各處理發(fā)病情況，每處理至少調(diào)查30片葉，計(jì)算各處理的病情指數(shù)和防治效果。

病情指數(shù)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為：0級(jí)，無(wú)病斑；1級(jí)，病斑面積占整個(gè)葉面積的5%以下；3級(jí)，病斑面積占整個(gè)葉面積的≥5%～<15%；5級(jí)，病斑面積占整個(gè)葉面積的≥15%～<25%；7級(jí)，病斑面積占整個(gè)葉面積的≥25%～<50%；9級(jí)，病斑面積占整個(gè)葉面積的50%以上。

(1)

(2)

1.2.6 5種藥劑對(duì)番茄灰霉病防治的田間試驗(yàn) 將5種藥劑的750倍稀釋液和清水(對(duì)照)以1 050 L/hm2藥液量對(duì)感染番茄灰霉病的成熟期番茄植株進(jìn)行噴霧。小區(qū)面積15 m2，每處理重復(fù)4次，共24個(gè)小區(qū)，隨機(jī)區(qū)組排列。每小區(qū)調(diào)查5點(diǎn)，每點(diǎn)3株，調(diào)查全部葉片，分級(jí)方法同1.2.5。在第1次施藥前調(diào)查發(fā)病基數(shù)，3次施藥后10 d，調(diào)查病情，計(jì)算病情指數(shù)和防治效果，并對(duì)防治效果進(jìn)行方差分析和多重比較。

(3)

式中：CK0為對(duì)照處理前葉片的病情指數(shù)，CKn為對(duì)照處理后葉片的病情指數(shù)；Pt0為藥劑處理前葉片的病情指數(shù)，Ptn為藥劑處理后葉片的病情指數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 5種藥劑對(duì)番茄灰霉病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用

5種藥劑對(duì)番茄灰霉病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用如表1所示。由表1可以看出，嘧霉胺和異菌脲對(duì)番茄灰霉病菌菌絲生長(zhǎng)具有較強(qiáng)的抑制作用，EC50分別為 5.53 和8.95 μg/mL；其次為多菌靈，EC50為75.36 μg/mL；解淀粉芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌對(duì)番茄灰霉病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用較弱，EC50分別為 946.28 和757.19 μg/mL。

2.2 5種藥劑對(duì)番茄灰霉病菌孢子萌發(fā)的抑制作用

5種藥劑對(duì)番茄灰霉病菌孢子萌發(fā)的抑制作用如表2所示。從表2可以看出，嘧霉胺和異菌脲對(duì)番茄灰霉病菌孢子萌發(fā)具有較強(qiáng)的抑制作用，EC50分別為21.35和37.32 μg/mL；其次為多菌靈，EC50為 241.90 μg/mL；解淀粉芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌對(duì)番茄灰霉病菌孢子萌發(fā)的抑制作用較弱，EC50分別為1 665.56和1 416.16 μg/mL。

注：y為抑制率幾率值，x為藥劑質(zhì)量濃度的對(duì)數(shù)值。下表同。

Note:yis the probability value of inhibitory rate,xis the log value of fungicides concentration.The same below.

2.3 5種藥劑對(duì)番茄灰霉病的盆栽防治效果

由表3可以看出，解淀粉芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、40%多菌靈、50%異菌脲和40%嘧霉胺稀釋750，1 000和1 250倍時(shí)，均對(duì)番茄葉片灰霉病具有明顯的治療作用和保護(hù)作用。以上5種藥劑稀釋750倍液處理的保護(hù)作用最好，防治效果分別為 68.47%，70.14%，74.18%，74.13%和80.63%，其中解淀粉芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌的保護(hù)作用顯著低于其他3種藥劑。

注：同列數(shù)據(jù)后標(biāo)不同小寫(xiě)字母者表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

Note:Different lowercase letters within the same column represented significant difference (P<0.05).The same below.

2.4 5種藥劑對(duì)番茄灰霉病的田間防治效果

由表4可以看出，嘧霉胺和異菌脲的750倍液對(duì)番茄灰霉病的防治效果較好，分別為75.55%和73.49%，兩者之間無(wú)顯著差異；多菌靈的750倍液防治效果較低，為69.56%；解淀粉芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌的750倍液防治效果均較低，分別為 63.37% 和64.83%，兩者無(wú)顯著性差異但均顯著低于其他3種藥劑。

3 討 論

目前，篩選微生物拮抗菌已成為植物病害防治的熱點(diǎn)[19-20]。在篩選拮抗菌的過(guò)程中，一般采用無(wú)菌發(fā)酵液對(duì)病原菌生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)的有效抑制中濃(EC50)作為室內(nèi)毒力測(cè)定項(xiàng)目，但目前關(guān)于生防菌劑產(chǎn)品中生防菌抗菌代謝產(chǎn)物生物效價(jià)的測(cè)定尚無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)[16]。本試驗(yàn)中，2種微生物殺菌劑對(duì)番茄灰霉菌菌絲和孢子的EC50值均較大，明顯高于化學(xué)農(nóng)藥。許彥等[21]研究表明，微生物生防菌劑對(duì)植物病原菌的EC50遠(yuǎn)大于化學(xué)農(nóng)藥，主要原因是化學(xué)農(nóng)藥的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)為有效抑菌物質(zhì)含量，且有效抑菌物質(zhì)純度高，而微生物菌劑產(chǎn)品是以產(chǎn)品中活菌數(shù)作為出廠指標(biāo)，所含的直接抑菌物質(zhì)含量及純度均較低。

本研究的盆栽試驗(yàn)中，解淀粉芽孢桿菌的防治效果隨著藥劑稀釋倍數(shù)的增大而減小，表明其防效與藥劑稀釋倍數(shù)呈負(fù)相關(guān)；大田試驗(yàn)中，2種微生物殺菌劑在稀釋750倍時(shí)的防治效果與3種化學(xué)殺菌劑雖然也存在顯著差異，但均達(dá)到了63.37%以上。這與微生物拮抗菌株產(chǎn)生了拮抗物質(zhì)，其與病原菌競(jìng)爭(zhēng)空間和營(yíng)養(yǎng)、誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗病性、促進(jìn)植物生長(zhǎng)[22]等多種作用機(jī)制有關(guān)。而2種微生物殺菌劑的防治效果無(wú)顯著差異，表明解淀粉芽孢桿菌對(duì)番茄灰霉病的防治效果與枯草芽孢桿菌相當(dāng)。

微生物生防制劑在防治植物病害時(shí)其田間防效往往不穩(wěn)定。這是由于生物活體進(jìn)入自然環(huán)境中，受寄主和其他微生物、營(yíng)養(yǎng)、溫度以及水分等各種生物及非生物因素的影響，導(dǎo)致生防微生物很難長(zhǎng)時(shí)間占有優(yōu)勢(shì)并保持功效[23]。解決微生物生防制劑防效不穩(wěn)定的方法是將其與化學(xué)農(nóng)藥復(fù)配，一方面可減少化學(xué)農(nóng)藥的使用，降低化學(xué)藥劑殘留超標(biāo)風(fēng)險(xiǎn)；另一方面克服了微生物生防制劑防效不穩(wěn)定的問(wèn)題[24]。本試驗(yàn)對(duì)解淀粉芽孢桿菌防治番茄灰霉病的效果進(jìn)行了研究，其與化學(xué)農(nóng)藥復(fù)配防治番茄灰霉病的效果還有待于進(jìn)一步研究。

[1] 唐容容，楊文革，胡永紅，等.蠟樣芽孢桿菌CGMCC4348菌株防治番茄灰霉病的效果及機(jī)理研究 [J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013,52(8)：1817-1820.

Tang R R,Yang W G,Hu Y H,et al.Control effect and mechanism of strainBacilluscereusCGMCC4348 toBotrytiscinerea[J].Hubei Agricultural Sciences，2013,52(8)：1817-1820.(in Chinese)

[2] 趙統(tǒng)敏，余文貴，趙麗萍，等.番茄抗灰霉病育種研究進(jìn)展 [J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2011,27(5):1141-1147.

Zhao T M,Yu W G,Zhao L P,et al.Research progress in breeding of tomato resistance toBotrytiscinerea[J].Jiangsu Journal of Agricultural Sciences,2011,27(5):1141-1147.(in Chinese)

[3] 張坤山，常 瑾，吳云峰，等.番茄灰霉病的防治研究 [J].陜西農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,57(6):98-99.

Zhang K S,Chang J,Wu Y F,et al.The research of control of tomato grey mould [J].Shaanxi Journal of Agricultural Sciences，2011,57(6)：98-99.(in Chinese)

[4] 葛紹榮，牛莉娜，李 銘，等.番茄灰霉病害及其微生物防治的研究進(jìn)展 [J].生物加工過(guò)程，2007,5(3)：15-19.

Ge S R,Niu L N,Li M,et al.The plant disease ofBotrytiscinereaand progress of its microbial control [J].Chinese Journal of Bioprocess Engineering，2007,5(3)：15-19.(in Chinese)

[5] 孫健健.灰霉病的微生物防治研究進(jìn)展 [J].天津化工, 2012,26(4): 11-14.

Sun J J.Research progress on microbial control ofBotrytiscinerea[J].Tianjin Chemical Industry,2012,26(4)：11-14.(in Chinese)

[6] 王 春，汪 琨，崔志峰，等.芽孢桿菌活體微生物農(nóng)藥研究現(xiàn)狀及應(yīng)用 [J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué),2013(7):830-834.

Wang C,Wang K,Cui Z F,et al.The research status of bacillus microbial pesticide and its application [J].Journal of Zhejiang Agricultural Sciences,2013(7):830-834.(in Chinese)

[7] 信姍姍，祁高富，朱發(fā)銀，等.一株解淀粉芽孢桿菌發(fā)酵條件的優(yōu)化及其對(duì)油茶炭疽病的防效 [J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2011,30(4):411-415.

Xin S S,Qi G F,Zhu F Y,et al.Optimization of fermentation condition forBacillusamyloliquefaciensWH1 and its biological control effect onColletotrichumgloeosporioides[J].Journal of Huanzhong Agricultural University,2011,30(4): 411-415.(in Chinese)

[8] Caldeira A T，Arteiro J M S，Coelho A V，et al．Combined use of LC-ESI-MS and antifungal tests for rapid identification of bioactive lipopeptides produced byBacillusamyloliquefaciensCCMI 1051 [J].Process Biochemistry，2011,46(9)：1738-1746.

[9] Yu G Y，Sinclair J B，Hartman G I，et al．Production of iturin A byBacillusamyloliquefacienssuppressing rhizoctonia solani [J].Soil Biology and Biochemistry,2002,34(7):955-963.

[10] Rao Y K,Lin H Y,Wu W S,et al．Evaluation of HPLC and MEKC methods for the analysis of lipopeptide antibiotic iturin A produced byBacillusamyloliquefaciens[J].International Journal of Applied Science and Engineering,2008,6(2):85-96.

[11] 鄧建良，劉紅彥，劉玉霞，等．解淀粉芽孢桿菌YN-1抑制植物病原真菌活性物質(zhì)鑒定 [J].植物病理學(xué)報(bào)，2010,40(2)：202-209.

Deng J L,Liu H Y,Liu Y X,et al.Identification of the antifungal substances fromBacillusamyloliquefaciensstrain YN-1 [J].Acta Phytopathologica Sinica,2010,40(2):202-209.(in Chinese)

[12] Chen L,Wang N,Wang X M,et al.Characterization of two antifungal lipopeptides produced byBacillusamyloliquefaciensSH-B10 [J].Bioresource Technology，2010,101(22)：8822-8827.

[13] Sun L J,Lu Z X,Bie X M.Isolation and characterization of a co-producer of fengycins and surfactins,endophyticBacillusamyloliquefaciensES-2,fromScutellariabaicalensisGeorgi [J].World Journal of Microbiology and Biotechnology,2006，22：1259-1266.

[14] Chen X H,Koumoutsi A,Scholz R,et al.Genome analysis ofBacillusamyloliquefaciensFZB42 reveals its potential for biocontrol of plant pathogens [J].Journal of Biotechnology,2008,140(1/2):27-37.

[15] 車(chē)曉曦，李校堃.解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)的研究進(jìn)展 [J].北京農(nóng)業(yè),2010(3):7-10.

Che X X,Li X K.The research on development ofBacillusamyloliquefaciens[J].Beijing Agriculture，2010(3)：7-10.(in Chinese)

[16] 顧真榮，吳 畏，高新華，等.枯草芽孢桿菌G3菌株的抗菌物質(zhì)及其特性 [J].植物病理學(xué)報(bào)，2004,34(2)：166-172.

Gu Z R,Wu W,Gao X H,et al.Antifungal substances ofBacillussubtilisstrain G3 and their properties [J].Acta Phytopathologica Sinica，2004,34(2)：166-172.(in Chinese)

[17] 孫現(xiàn)超，安德榮，李?lèi)?ài)榮，等.土壤拮抗放線菌s-930-6菌株活性產(chǎn)物抑菌作用 [J].植物保護(hù)學(xué)報(bào)，2005,32(1)：33-36.

Sun X C,An D R,Li A R,et al.Effect of the metabolite of antifungal soil actinomycete s-930-6 strain [J].Acta Phytophylacica Sinica，2005,32(1)：33-36.(in Chinese)

[18] 馮志珍，陳太春，段軍娜，等.煙草黑脛病拮抗根際芽胞桿菌FB-16的篩選鑒定及其抑菌活性 [J].植物保護(hù)學(xué)報(bào)，2012,39(3)：224-230.

Feng Z Z,Chen T C,Duan J N,et al.Screening,identification and antifungal activity of antagonistic rhizosphericBacillusFB-16 against tobacco black shank [J].Acta Phytophylacica Sinica，2012,39(3)：224-230.(in Chinese)

[19] 嚴(yán)婉榮，趙廷昌，肖彤斌，等.生防細(xì)菌在植物病害防治中的應(yīng)用 [J].基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué),2013(4):533-539.

Yan W R,Zhao T C,Xiao T B,et al.Applications of biocontrol bacteria in plant disease control [J].Genomics and applied biology,2013(4):533-539.(in Chinese)

[20] 馬成濤，胡 青，楊德奎.土壤有益微生物防治植物病害的研究進(jìn)展 [J].山東科學(xué),2007(6):61-67.

Ma C T,Hu Q,Yang D K.Progress of the prevention and treatment of the profitable soil microorganism for plants disease [J].Shandong Science，2007(6):61-67.(in Chinese)

[21] 許 彥，羅 豐，楊禮哲，等.幾種殺菌劑對(duì)西瓜枯萎病的室內(nèi)毒力測(cè)定 [J].熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010,30(10)：18-19,26.

Xu Y,Luo F,Yang L Z,et al.Toxicity of several fungicides to watermelon fusarium wilt [J].Chinese Journal of Tropical Agriculture，2010,30(10)：18-19,26.(in Chinese)

[22] 洪 鵬，安國(guó)棟，胡美英，等.解淀粉芽孢桿菌防治果蔬采后病害研究進(jìn)展 [J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2013(12)：168-173.

Hong P,An G D,Hu M Y,et al.Advance in research on biological control of postharvest diseases of fruits and vegetables by bacillus [J].Chinese Agricultural Science Bulletin，2013(12)：168-173.(in Chinese)

[23] 王 爽，常立艷，王 琦，等.納米二氧化鈦對(duì)植物有益蠟樣芽胞桿菌存活能力的影響 [J].微生物學(xué)雜志，2007,27(5)：102-105.

Wang S,Chang L Y,Wang Q,et al.Impact of illuminated nano-tio2 on the survival ofBacilluscereus[J].Journal of Microbiology，2007,27(5)：102-105.(in Chinese)

[24] 王文橋，馬 平，張小風(fēng)，等.生物源殺菌劑與化學(xué)藥劑協(xié)調(diào)防控番茄病害 [J].植物保護(hù)學(xué)報(bào)，2011,38(1)：75-80.

Wang W Q,Ma P,Zhang X F,et al.Control effect of joint application of biofungicides and synthesized fungicides on tomato diseases [J].Journal of Plant Protection，2011,38(1)：75-80.(in Chinese)

Toxicity and control efficiency of fungicides againstBotrytiscinerea

HUANG Hai,ZHANG Xin,ZOU Hang,YANG Hai-yan,CAO Jing-jing,AN De-rong

(StateKeyLaboratoryofCropStressBiologyforAridAreas/CollegeofPlantProtection,NorthwestA&FUniversity,Yangling,Shaanxi712100,China)

【Objective】 The toxicity ofBacillusamyloliquefacienswettable powder (WP) onBotrytiscinereaand the control effect on tomato gray mold were studied to improve the application ofBacillusamyloliquefaciens.【Method】 The inhibitory effects of five fungicides including 1×109CFU/gB.amyloliquefaciensWP,1×109CFU/gB.subtilisWP,40% carbendazim WP,50% iprodione WP and 40% pyrimethanil WP against tomato gray mold pathogen were determined using hyphae growth rate method and spore germination method,and their control effects were determined in pot and field experiments.【Result】 The 50% effective concentrations (EC50) ofB.amyloliquefaciens,B.subtilis,40% carbendazim,50% iprodione and 40% pyrimethanil against the growth of the hyphae were 946.28,757.19,75.36,8.95 and 5.53 μg/mL,respectively,and their EC50against the germination of conidia were 1 665.56,1 416.16,241.90,37.32 and 21.35 μg/mL,respectively.The control effects of five fungicides (diluted 750 times solution) were 68.47%,70.14%,74.18%,74.13% and 80.63% in pot experiment and 63.37%,64.83%,69.56%,73.49% and 75.55% in field experiment.【Conclusion】 The toxicity and control effectB.amyloliquefaciensWP in field experiment of were equivalent to those ofB.subtilisWP.Therefore,B.amyloliquefaciensWP can be used as assistant biofungicides to control tomato gray mold.

Bacillusamyloliquefacienswettable powder;tomato gray mold;pryinethanil efficacy trials;assistant biofungicides

2013-10-23

高等學(xué)校創(chuàng)新引智計(jì)劃項(xiàng)目(B07049)；國(guó)家“863”計(jì)劃項(xiàng)目(2007AA021503)

黃 海(1987-)，男，貴州興義人，在讀碩士，主要從事微生物資源利用研究。E-mail：yellowsea87@126.com

安德榮(1963-)，男，陜西大荔人，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事微生物資源利用和植物病毒學(xué)研究。 E-mail：anderong323@163.com

時(shí)間:2015-01-05 08:59

10.13207/j.cnki.jnwafu.2015.02.024

S436.412.1+3

A

1671-9387(2015)02-0184-07

網(wǎng)絡(luò)出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1390.S.20150105.0859.024.html