王蔚，田棣，胡蕓文,2

1. 上海市(復(fù)旦大學(xué)附屬)公共衛(wèi)生臨床中心病原體檢測(cè)與生物安全部，上海 201508；2. 復(fù)旦大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系，教育部/衛(wèi)生部醫(yī)學(xué)分子病毒學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200032

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中東呼吸綜合征冠狀病毒的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)

王蔚1，田棣1，胡蕓文1,2

1. 上海市(復(fù)旦大學(xué)附屬)公共衛(wèi)生臨床中心病原體檢測(cè)與生物安全部，上海 201508；2. 復(fù)旦大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系，教育部/衛(wèi)生部醫(yī)學(xué)分子病毒學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200032

摘要：中東呼吸綜合征(MERS)是一種由中東呼吸綜合征冠狀病毒(MERS-CoV)感染所致的急性呼吸道傳染病，其臨床診斷需依據(jù)實(shí)驗(yàn)室病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果。本文就MERS-CoV的核酸檢測(cè)、抗原和抗體檢測(cè)、病毒分離鑒定及基因變異監(jiān)測(cè)等方面的最新研究進(jìn)展作一綜述。

關(guān)鍵詞：中東呼吸綜合征冠狀病毒；實(shí)驗(yàn)室診斷；反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)

中東呼吸綜合征(Middle East respiratory syndrome，MERS)是一種由中東呼吸綜合征冠狀病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus，MERS-CoV)感染所致的急性呼吸道傳染病。MERS-CoV是繼嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus，SARS-CoV)后一種新發(fā)現(xiàn)的傳播力強(qiáng)、病死率高、可感染人的冠狀病毒。該病毒是有包膜的單股正鏈RNA病毒，基因組全長(zhǎng)約30 kb，基因組結(jié)構(gòu)與其他已知的人類(lèi)冠狀病毒相似，至少含有10個(gè)開(kāi)放讀碼框架(open reading frame，ORF)，編碼病毒的多種結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白[1]。從遺傳進(jìn)化上看，MERS-CoV屬于乙型冠狀病毒屬 C組成員，病毒溯源分析提示其可能來(lái)源于蝙蝠或中東沙漠地區(qū)的單峰駱駝[2]。人因接觸感染了MERS-CoV的動(dòng)物而被感染，已有證據(jù)表明該病毒在人與人之間可通過(guò)密切接觸而傳播。

與其他常見(jiàn)呼吸道病原所致肺部感染相比，MERS-CoV感染的臨床表現(xiàn)沒(méi)有特征性差異，因此MERS確診病例的診斷需依據(jù)實(shí)驗(yàn)室病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果。MERS-CoV的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)包括病毒核酸檢測(cè)、抗原和抗體檢測(cè)及作為病毒感染診斷“金標(biāo)準(zhǔn)”的病毒分離鑒定。其中，反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcriptase-polymerase chain reaction，RT-PCR)因檢測(cè)病毒核酸具有周期短、易標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)勢(shì)而廣泛應(yīng)用于MERS的病原學(xué)診斷工作。世界衛(wèi)生組織(World Health Organization，WHO)于2012年12月首次推薦MERS-CoV的實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)流程，以指導(dǎo)臨床標(biāo)本的初篩和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)。隨著人們對(duì)該病毒的深入研究和逐步了解，WHO又分別于2013年9月和2014年9月更新了指南內(nèi)容。以下就MERS-CoV實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法及流程進(jìn)行簡(jiǎn)要綜述。

1標(biāo)本采集

用于MERS-CoV檢測(cè)的標(biāo)本來(lái)自患者呼吸道、血液、尿液、糞便等。MERS-CoV的受體二肽基肽酶4(dipeptidyl peptidase 4，DPP4；又稱(chēng)CD26)在呼吸道中主要分布于下呼吸道[3]，因此痰液、支氣管肺泡灌洗液、氣管抽吸物等下呼吸道標(biāo)本中含有高滴度MERS-CoV，是理想的標(biāo)本類(lèi)型[4]。然而，在病程初期最易獲得的是鼻咽抽吸物或咽拭子，因此這些上呼吸道標(biāo)本仍為臨床主要送檢標(biāo)本類(lèi)型。WHO建議，在條件允許的情況下，應(yīng)同時(shí)采集患者的上下呼吸道標(biāo)本，并在采集鼻咽拭子和咽拭子時(shí)使用專(zhuān)用的帶有病毒轉(zhuǎn)運(yùn)液的拭子(http://www.who.int/csr/disease/coronavirus_infections/WHO_ interim_recommendations_ lab_detection_ MERSCoV_092014.pdf)。

除肺組織外，DPP4還廣泛分布于人體的腎、小腸、肝、前列腺等多種組織器官的上皮和內(nèi)皮細(xì)胞，以及樹(shù)突細(xì)胞、單核-巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞等免疫細(xì)胞。這一分布特征導(dǎo)致MERS-CoV感染可累及體內(nèi)多種臟器，也造成其在呼吸道外的多途徑排毒[5]。有研究表明，部分患者的血液標(biāo)本可通過(guò)PCR檢測(cè)到病毒核酸，在尿和糞便標(biāo)本中也可檢測(cè)到病毒存在。盡管上述肺外標(biāo)本中的病毒載量比呼吸道標(biāo)本低，但臨床如能采集送檢可進(jìn)一步提高病毒的檢出率，有利于盡快診斷。

同一病例在多個(gè)時(shí)間點(diǎn)采樣送檢對(duì)診斷、治療和疫情控制均有意義。初次采集的上呼吸道標(biāo)本中MERS-CoV檢測(cè)如為陰性，有必要進(jìn)行重復(fù)采樣送檢。有研究認(rèn)為，MERS-CoV與SARS-CoV相似[6]，鼻咽拭子標(biāo)本中病毒載量高峰可能出現(xiàn)在癥狀出現(xiàn)后的第2周而非發(fā)病初期。對(duì)于已確診的病例，有研究發(fā)現(xiàn)重癥患者排毒時(shí)間往往比輕癥患者長(zhǎng)，而危重癥患者呼吸道及血液的排毒時(shí)間可超過(guò)3周[7]。因此，在患者隔離治療過(guò)程中，需每2~4 d采集1次上、下呼吸道標(biāo)本及其他類(lèi)型標(biāo)本(如血液、尿液、糞便等)進(jìn)行病毒核酸的PCR檢測(cè)。這樣，一方面可觀察治療效果，另一方面可跟蹤呼吸道排毒和肺外排毒時(shí)間，便于醫(yī)務(wù)人員采取相應(yīng)的感染控制措施。對(duì)于恢復(fù)期的病例，WHO建議每天進(jìn)行呼吸道標(biāo)本的采集和PCR檢測(cè)，連續(xù)2次陰性者可考慮解除隔離(http://www.who.int/csr/disease/ coronavirus_infections/WHO_ interim_recommend ations_lab_detection_ MERSCoV_092014.pdf)。

標(biāo)本采集后，一般情況下應(yīng)盡快送實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)；如暫時(shí)無(wú)法送檢，應(yīng)根據(jù)標(biāo)本類(lèi)型進(jìn)行適當(dāng)處理后保存于-80 ℃，避免反復(fù)凍融。如在采樣環(huán)節(jié)中存在產(chǎn)生氣溶膠的風(fēng)險(xiǎn)，醫(yī)務(wù)人員需在標(biāo)準(zhǔn)防護(hù)的基礎(chǔ)上增加N95口罩、眼罩、長(zhǎng)袖防護(hù)服等個(gè)人防護(hù)裝備。

2MERS-CoV的核酸分子檢測(cè)

自2012年確認(rèn)首例人感染MERS-CoV病例至2015年6月，全球已有MERS病例1 185例(http://www.who.int/csr/don/05-june-2015-mers-korea/en/)。因此，建立特異、有效的快速分子診斷方法對(duì)早期發(fā)現(xiàn)和防控疫情十分重要。

WHO推薦將MERS-CoV包被蛋白(envelop protein，E蛋白)基因的5′端上游序列(upstream of envelop gene，UpE)作為初篩檢測(cè)靶標(biāo)，ORF1a/1b作為進(jìn)一步確診檢測(cè)靶標(biāo)。如果患者雙靶標(biāo)檢測(cè)陽(yáng)性，則為確診病例；如果患者初篩靶標(biāo)陽(yáng)性但第二靶標(biāo)檢測(cè)陰性，則需檢測(cè)其他基因，包括核衣殼蛋白(nucleocapsid protein，N蛋白)、RNA依賴(lài)的RNA聚合酶(RNA-dependant RNA polymerase，RdRp)和刺突蛋白(spike protein，S蛋白)基因，且通過(guò)擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序確定；如果患者臨床癥狀和流行病學(xué)史高度符合但僅初篩陽(yáng)性，缺少其他基因檢測(cè)結(jié)果，則作為疑似病例。所有確診或疑似病例均需連續(xù)采集2次以上標(biāo)本檢測(cè)，排除假陽(yáng)性或假陰性。值得注意的是，對(duì)于上呼吸道標(biāo)本檢測(cè)陰性而臨床及流行病學(xué)史高度符合的患者，應(yīng)積極采集下呼吸道標(biāo)本送檢，降低假陰性(http://www.who.int/csr/disease/coronavirus_infections/WHO_interim_recommendations_lab_detection_MERSCoV_092014.pdf)。

目前，多個(gè)研究小組建立了MERS-CoV快速分子檢測(cè)方法，針對(duì)不同基因靶標(biāo)，分別采用實(shí)時(shí)RT-PCR、反轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(reverse transcription-loop-mediated isothermal amplification，RT-LAMP)或反轉(zhuǎn)錄等溫重組酶聚合酶擴(kuò)增(reverse transcription-isothermal recombinase-polymerase amplification，RT-RPA)等技術(shù)。適用這些方法檢測(cè)的樣本包括上下呼吸道、糞便和血清樣本(表1)。其中，Corman等建立了針對(duì)UpE和ORF1b靶標(biāo)的實(shí)時(shí)RT-PCR，最低檢出限達(dá)3.4 RNA拷貝/反應(yīng)，是目前最廣泛采用的MERS-CoV初篩方案[8]。在以N基因作為靶標(biāo)的檢測(cè)方法中，實(shí)時(shí)RT-PCR或RT-RPA的最低檢出限為≤10 RNA拷貝/反應(yīng)[9,10]；RT-LAMP的最低檢出限達(dá)3.4 RNA拷貝/反應(yīng)[11]。以UpE和ORF1a為靶標(biāo)，采用實(shí)時(shí)RT-PCR的最低檢出限分別為5.3和9.3 RNA拷貝/反應(yīng)[12]。這些檢測(cè)均可作為MERS-CoV的實(shí)驗(yàn)室初篩和確診方法。

表1MERS-CoV的核酸檢測(cè)方法
Tab.1Nucleic acid amplification tests for laboratory diagnosis of MERS-CoV

ReferencesMethodTargetgeneLimitofdetection(perreaction)Clinicalspecimen8rRT-PCRUpE3.4RNAcopies/0.01TCID50ORF1b64RNAcopies/0.1TCID50Respiratoryswab,sputum,endotrachealaspirate9rRT-PCRN≤10RNAcopies/2.6×10-5TCID50Sputum,serum,stool10RT-RPAN10RNAcopiesCell-culturedstrain11RT-LAMPN3.4RNAcopiesPharyngealswab12rRT-PCRORF1a9.3RNAcopies/2.8×10-3pfuUpE5.3RNAcopies/2.8×10-3pfuAspirationtube,exudate,bronchoalveolarfluid,stool13RT-LAMPORF1a0.02-0.2pfuORF1b0.02-0.2pfuUpE0.02-0.2pfuCell-culturedstrain14rRT-PCRLeadersequences5RNAcopies/5.62×10-5TCID50Nasalpharyngealswab

與傳統(tǒng)實(shí)時(shí) RT-PCR相比，RT-LAMP和RT-RPA等新技術(shù)對(duì)儀器設(shè)備要求較低，樣本交叉污染小，更適用于缺乏完善實(shí)驗(yàn)室條件下的現(xiàn)場(chǎng)快速篩查。Bhadra等針對(duì)UpE、ORF1b和ORF1a基因建立RT-LAMP檢測(cè)方法，最低檢出下限達(dá)0.02~0.2 pfu/反應(yīng)，但其檢測(cè)靈敏度未經(jīng)過(guò)臨床標(biāo)本驗(yàn)證[13]。

此外，香港大學(xué)袁國(guó)勇研究小組建立針對(duì)冠狀病毒各亞型特異性前導(dǎo)序列(leading sequence)的RT-PCR，可一次鑒定5種冠狀病毒亞型：MERS、229E、OC43、HKU1和NL63病毒(表1)，最低檢出限達(dá)5 RNA拷貝/反應(yīng)，臨床診斷應(yīng)用前景較廣[14]。

3MERS-CoV的抗原檢測(cè)

MERS-CoV的抗原檢測(cè)主要應(yīng)用于確認(rèn)動(dòng)物組織中的病毒感染，也用于驗(yàn)證病毒培養(yǎng)過(guò)程中陽(yáng)性病變細(xì)胞內(nèi)的病毒復(fù)制。近期，Song等[15]建立了一種快速的膠體金免疫層析法(immuno-chromatographic assay，ICA)，用于檢測(cè)單峰駱駝鼻咽拭子中的MERS-CoV抗原。該方法利用高選擇性的單克隆抗體，可在室溫條件下短時(shí)間內(nèi)快速檢測(cè)到病毒的N蛋白。以針對(duì)UpE和ORF1a的實(shí)時(shí)RT-PCR檢測(cè)結(jié)果為參考，ICA的相對(duì)靈敏度和特異度分別為93.9%和100%。然而，臨床標(biāo)本中抗原檢測(cè)的合適時(shí)機(jī)尚不清楚，需進(jìn)一步對(duì)MERS病例的中和抗體動(dòng)態(tài)曲線(xiàn)及標(biāo)本排毒規(guī)律進(jìn)行充分了解。

4MERS-CoV的抗體檢測(cè)

過(guò)去幾年中，研究者已建立了一些用于檢測(cè)MERS-CoV中和性抗體或非中和性抗體的方法，但尚需在臨床大規(guī)模驗(yàn)證。這些方法包括間接免疫熒光試驗(yàn)(immunofluorescence assay，IFA)、基于重組蛋白表達(dá)的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)、蛋白芯片技術(shù)(protein microarray)及假病毒中和抗體測(cè)試(pseudoparticle neutralization test，ppNT)。

Corman等[16]發(fā)現(xiàn)1例患者具有MERS-CoV感染的臨床癥狀，利用RT-PCR不能在呼吸道分泌物中檢出病毒，而IFA可在血清中檢出抗體。因此，初步檢測(cè)時(shí)，可利用IFA測(cè)試血清中所含的抗體。需注意的是，檢測(cè)可能會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性，因此建議該方法用于有明確流行病學(xué)特點(diǎn)的患者，且只能作為初篩而不能用于確診。

Al-Abdallat等[17]通過(guò)HKU5.2 N蛋白ELISA、IFA和微量中和實(shí)驗(yàn)(micro-neutralisation test，MNT)檢測(cè)血清抗體?；蛐蛄蟹治鲲@示，蝙蝠冠狀病毒HKU4和HKU5與MERS-CoV類(lèi)似，因此美國(guó)疾病預(yù)防控制中心(Centers for Disease Control and Prevention，CDC)開(kāi)發(fā)了基于重組HKU5.2 N蛋白的ELISA，檢測(cè)MERS疑似病例血清中是否存在交叉反應(yīng)抗體；檢測(cè)到交叉反應(yīng)后，再利用IFA和MNT檢測(cè)MERS-CoV特異抗體。

Perera等[18]構(gòu)建了MERS-CoV S蛋白假病毒顆粒用于ppNT，與傳統(tǒng)的MNT一起對(duì)1 343份人血清和625份動(dòng)物血清進(jìn)行檢測(cè)。單峰駱駝血清中，MNT檢測(cè)到93.6%的血清對(duì)MERS-CoV有抗體反應(yīng)，ppNT檢測(cè)到98.2%的血清對(duì)MERS-CoV有抗體反應(yīng)。MNT檢測(cè)抗體效價(jià)≥1 280，ppNT檢測(cè)抗體效價(jià)≥10 240。ppNT與MNT檢測(cè)結(jié)果有很好的相關(guān)性。這種新的中和抗體檢測(cè)方法不需在生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，同時(shí)避免了中和試驗(yàn)中操作MERS-CoV活病毒帶來(lái)的生物安全隱患。

Reusken等[19]將蛋白芯片技術(shù)應(yīng)用于MERS-CoV和SARS-CoV的IgM和IgG抗體檢測(cè)。以MERS-CoV和SARS-CoV S1蛋白受體結(jié)合單元作為抗原，被來(lái)自4種常見(jiàn)人冠狀病毒(human coronavirus，hCoV)暴露人群的交叉反應(yīng)血清及hCoV-EMC或SARS-CoV恢復(fù)期患者的血清所驗(yàn)證。這種方法允許最小樣品要求的高通量檢測(cè)，并可使用干燥血點(diǎn)進(jìn)行測(cè)試，易于樣品運(yùn)輸。

然而，因MERS-CoV抗體與其他人感染冠狀病毒存在交叉反應(yīng)，在缺乏病毒核酸檢測(cè)結(jié)果的情況下，基于上述方法的單次抗體檢測(cè)結(jié)果均不能作為病例確診的依據(jù)，必須通過(guò)檢測(cè)同一病例的急性期和恢復(fù)期的雙份血清來(lái)確定。因此，MERS-CoV的抗體檢測(cè)主要用于臨床流行病學(xué)調(diào)查和人群感染的回顧性研究。

5MERS-CoV的分離培養(yǎng)

病毒分離培養(yǎng)仍是鑒定特定病原體感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”。MERS-CoV具有宿主細(xì)胞的廣嗜性，可在體外感染多種人源或非人源細(xì)胞系，且在敏感細(xì)胞中復(fù)制速度較快，以合胞體形成為主要的細(xì)胞病變效應(yīng)。目前，基因工程改造可進(jìn)一步提高細(xì)胞系對(duì)MERS-CoV的敏感度，為病毒研究、疫苗和藥物的研發(fā)等工作帶來(lái)了方便。

Zaki等[20]利用Vero和LLC-MK2細(xì)胞系培養(yǎng)MERS-CoV，接種5 d內(nèi)可引起一系列細(xì)胞病理改變。在低pH值時(shí)LLC-MK2細(xì)胞形成合胞體，在中性或堿性pH值時(shí)Vero和LLC-MK2細(xì)胞均出現(xiàn)細(xì)胞變圓及分離。Shirato等[21]利用穩(wěn)定表達(dá)跨膜絲氨酸蛋白酶2(transmembrane serine protease 2，TMPRSS2)的Vero細(xì)胞(Vero-TMPRSS2)培養(yǎng)MERS-CoV，接種3 h發(fā)生細(xì)胞融合，18 h后即出現(xiàn)合胞體。同時(shí)Vero-TMPRSS2細(xì)胞對(duì)MERS-CoV的敏感度比普通Vero細(xì)胞高100倍。

Chan等[22]研究MERS-CoV的細(xì)胞敏感性，發(fā)現(xiàn)與其他hCoV相比，其可在更加廣泛的細(xì)胞系中快速生長(zhǎng)，如支氣管上皮細(xì)胞系Calu-3、胚胎成纖維細(xì)胞系HFL、肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、胚胎腎細(xì)胞系HEK、結(jié)直腸細(xì)胞腺癌細(xì)胞系Caco-2、肝癌細(xì)胞系Huh-7和細(xì)胞惡性組織細(xì)胞瘤細(xì)胞系His-1。在這些感染細(xì)胞中均能觀察到明顯的細(xì)胞病變，免疫染色可檢測(cè)到N蛋白表達(dá)，或在上清液中檢測(cè)到病毒復(fù)制，病毒載量可增加1~5倍。

此外，在單核細(xì)胞及T細(xì)胞系THP-1、U937和H9中，雖可檢測(cè)到病毒載量增加，但復(fù)制效率較低，且無(wú)核蛋白表達(dá)和細(xì)胞病變效應(yīng)。Tao等[23]在Jurkat T細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染CD26/DPP4編碼質(zhì)粒，獲得的Jurkat_CD26/DPP4細(xì)胞對(duì)MERS-CoV敏感，在感染病毒1或2 d后，80%~88%細(xì)胞死亡。

由于病毒培養(yǎng)所需周期較長(zhǎng)，且需在生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，該法在MERS-CoV臨床診斷中應(yīng)用受限。

6MERS-CoV的基因變異監(jiān)測(cè)

研究MERS-CoV基因變異情況，不僅有助于追溯病毒傳播流行途徑，還可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)病毒對(duì)人體的適應(yīng)性變異，對(duì)疾病防控和治療有重要意義。

目前，GenBank已發(fā)表的MERS-CoV全長(zhǎng)基因組核苷酸序列相似性>99%[24]，根據(jù)進(jìn)化親緣關(guān)系分為4個(gè)簇(cluster)：A、B1、B2和C。然而，這一基因進(jìn)化監(jiān)測(cè)需基于全長(zhǎng)基因序列的分析，費(fèi)時(shí)費(fèi)力。MERS-CoV全長(zhǎng)基因組有4個(gè)高變區(qū)，分別在ORF1a、S和ORF4a基因區(qū)域[13]。Koopmans研究小組根據(jù)長(zhǎng)度為615 bp的S基因高變區(qū)序列，對(duì)MERS-CoV分型，結(jié)果與采用全長(zhǎng)基因組序列的分型方法一致[25]。與全長(zhǎng)基因組分析相比，該方法簡(jiǎn)便，便于疫情暴發(fā)時(shí)當(dāng)?shù)貙?shí)驗(yàn)室對(duì)MERS-CoV變異情況進(jìn)行密切監(jiān)測(cè)。

7結(jié)語(yǔ)

MERS病例的早發(fā)現(xiàn)和早治療對(duì)MERS疫情的防控至關(guān)重要，采用規(guī)范的診斷流程和快速、敏感的檢測(cè)方法是及時(shí)發(fā)現(xiàn)病例、控制疫情的關(guān)鍵。MERS-CoV的病原學(xué)診斷方法包括分子檢測(cè)方法、血清學(xué)方法及病毒分離培養(yǎng)等，各有優(yōu)勢(shì)和適用時(shí)機(jī)。對(duì)于特定病例和特定目的，需選擇合適的采樣時(shí)間、樣本種類(lèi)、檢測(cè)手段，并結(jié)合流行病學(xué)史和臨床癥狀等對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行準(zhǔn)確判斷和合理解釋。值得注意的是，隨著MERS-CoV在世界范圍內(nèi)的傳播，病毒可能加快變異。因此，在常規(guī)病原學(xué)診斷時(shí)，需多靶標(biāo)確認(rèn)，并對(duì)病毒主要抗原蛋白的基因進(jìn)行測(cè)序，必要時(shí)進(jìn)行全長(zhǎng)基因組測(cè)序，以降低漏檢率。同時(shí)，通過(guò)測(cè)序還可跟蹤監(jiān)測(cè)病毒變異情況，為防控工作提供重要數(shù)據(jù)。

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·論著·

Corresponding author. HU Yun-Wen, E-mail: ywhu@shaphc.org

Laboratory detections for Middle East respiratory syndrome coronavirus

WANG Wei1, TIAN Di1, HU Yun-Wen1,2

1. Department of Pathogen Detection and Biological Safety, Shanghai Public Health Clinical Center Affiliated to Fudan University, Shanghai 201508, China; 2. Department of Medical Microbiology and Parasitology, Key Laboratory of Medical Molecular Virology of Ministries of Education and Health, School of Basic Medical Sciences, Fudan University, Shanghai 200032, China

Abstract:Middle East respiratory syndrome (MERS) is an acute respiratory infectious disease caused by Middle East respiratory syndrome coronavirus (MERS-CoV). Its clinical diagnosis is based on pathogen detection in the laboratory. In this review, we summarize the latest research progress on the methodology of nucleic acid detection, serological detection, virus isolation and genetic variation monitoring of MERS-CoV.

Key words:Middle East respiratory syndrome coronavirus; Laboratory diagnosis; Reverse transcriptase-polymerase chain reaction

收稿日期：(2015-07-06)

通信作者：胡蕓文

基金項(xiàng)目：國(guó)家傳染病防治科技重大專(zhuān)項(xiàng)(2014ZX10004-211)