陳星 于建春 周丹英 孫慶祝 吳雁冰 沈健

?

·臨床交流·

視網(wǎng)膜色素變性患者房水中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子含量的測(cè)定

陳星 于建春 周丹英 孫慶祝 吳雁冰 沈健

視網(wǎng)膜色素變性(retinitis pigmentosa，RP)是視網(wǎng)膜變性中最普遍的，發(fā)生率約為1/4 000[1]。由于光感受器細(xì)胞的缺乏，導(dǎo)致視網(wǎng)膜色素上皮的損壞。RP是一種高變異程度的疾病，有的表現(xiàn)為局部視野缺損，有的表現(xiàn)為周邊視野缺損，但最終會(huì)發(fā)展為黃斑功能的缺損。眼底表現(xiàn)以骨細(xì)胞樣色素沉著、視網(wǎng)膜血管變細(xì)、視盤萎縮為典型特征，視網(wǎng)膜血管改變是眼底改變突出的特征，早期視網(wǎng)膜血管的變細(xì)和晚期血管的纖維化變性是RP患者眼底改變的主要特點(diǎn)。本文通過(guò)比較RP患者與單純年齡相關(guān)性白內(nèi)障患者房水的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A(vascular endothelial growth factor-A，VEGF-A)含量，研究RP患者眼底血管的改變與其之間的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 資料 收集2009年1月～2014年2月來(lái)我科確診的無(wú)其他眼病的RP患者，共17例，年齡36～79歲，平均(49.5±12.3)歲，患者都具有典型的夜盲癥狀，視網(wǎng)膜血管狹窄，降低的視網(wǎng)膜電流圖特征。對(duì)照組為單純年齡相關(guān)性白內(nèi)障患者17例，年齡44～76歲，平均(56.3±10.9)歲，排除任何眼相關(guān)的疾病。2組年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-1.712，P=0.09)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)討論通過(guò)，所有受試對(duì)象均簽署知情同意書。

1.2 房水樣品的收集 手術(shù)臺(tái)上收集房水約0．15 mL，分裝于50 μL無(wú)菌的EP管內(nèi)，零下80 ℃深低溫保存。對(duì)照組為全身無(wú)其他系統(tǒng)疾病的年齡相關(guān)性白內(nèi)障的手術(shù)患者，術(shù)前簽訂知情同意書。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)法檢測(cè)試驗(yàn)組和對(duì)照組房水中VEGF-A的表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)采用SPSS16．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

試驗(yàn)組患者房水VEGF-A平均含量是(97.1±98.2)pg/mL，對(duì)照組是(333.3±133.1) pg/mL，2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖1，t=-5.889,P<0.001)。RP患者視網(wǎng)膜血管的改變是眼底改變突出的特征，可見早期視網(wǎng)膜血管的變細(xì)和晚期血管的纖維化變性。圖2為一患者明顯的視網(wǎng)膜顳側(cè)血管狹窄，鼻側(cè)血管纖維變性。

圖1. 試驗(yàn)組和對(duì)照組各17例患者房水中的VEGF-A的表達(dá)量,試驗(yàn)組比對(duì)照組VEGF濃度更低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)

圖2. 一患者明顯的視網(wǎng)膜顳側(cè)血管狹窄，鼻側(cè)血管纖維變性(箭頭處)

3 討論

由于基因和蛋白質(zhì)功能的多樣性，RP病因的分子機(jī)制仍然不清楚?，F(xiàn)在有認(rèn)為與細(xì)胞凋亡有關(guān)，神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)性治療是干擾細(xì)胞凋亡的治療基因的常用方法，各類干細(xì)胞在視網(wǎng)膜變性疾病中也有了一定的應(yīng)用, 將干細(xì)胞移植整合人視網(wǎng)膜并誘導(dǎo)其分化為目的細(xì)胞，挽救或重建視功能，為視網(wǎng)膜變性類疾病的治療帶來(lái)新希望[2]。VEGF-A是內(nèi)皮細(xì)胞促細(xì)胞分裂因子，影響神經(jīng)生長(zhǎng)、分化、生存的一種物質(zhì)，在動(dòng)物和人類研究中，低VEGF-A含量是啟動(dòng)神經(jīng)元變性的重要因素，同時(shí)表明VEGF-A對(duì)神經(jīng)的生長(zhǎng)和營(yíng)養(yǎng)起重要作用[3]。目前實(shí)驗(yàn)表明，VEGF-A受體是存在于正常視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞中；局部缺血再灌注的模型實(shí)驗(yàn)表明，VEGF-A導(dǎo)致劑量依耐性減少，VEGF-A對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞凋亡有直接神經(jīng)保護(hù)性[4]。未來(lái)VEGF-A發(fā)病機(jī)制的研究可能將支持神經(jīng)性治療RP。

有人曾報(bào)道，零下80 ℃保存房水21 d后房水中VEGF的表達(dá)量比同一來(lái)源新鮮樣本檢測(cè)的結(jié)果要明顯降低[5]。為了使本研究的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的結(jié)果得到一個(gè)相對(duì)公平的對(duì)比，2組標(biāo)本零下80 ℃保存的時(shí)間長(zhǎng)短盡可能接近，以排除深低溫保存時(shí)間長(zhǎng)短不一所帶來(lái)的對(duì)房水內(nèi)VEGF表達(dá)量的影響。同時(shí)，2組年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義，排除了年齡因素對(duì)VEGF-A含量的影響。

我們認(rèn)為RP患者低VEGF-A含量可能有3方面主要原因。①視網(wǎng)膜和脈絡(luò)膜的血管變性，視網(wǎng)膜色素上皮層色素細(xì)胞的缺乏。研究[6]表明正常的眼球VEGF-A是由視網(wǎng)膜色素上皮層細(xì)胞產(chǎn)生的。視網(wǎng)膜變性歸因于正常表達(dá)基因的缺乏，光感受器細(xì)胞的凋亡由于不同種基因變異包括RP基因，它可能導(dǎo)致VEGF的低表達(dá)[7]。②光感受器變性導(dǎo)致相對(duì)的視網(wǎng)膜組織內(nèi)氧耗過(guò)多，實(shí)驗(yàn)表明暴露于缺氧環(huán)境的成年鼠會(huì)增加視網(wǎng)膜組織氧的含量，同時(shí)也顯示出視網(wǎng)膜VEGF的低表達(dá)。研究者[8]認(rèn)為，這是因?yàn)楣飧惺芷骷?xì)胞凋亡導(dǎo)致了氧利用的降低和視網(wǎng)膜組織的變薄，產(chǎn)生了視網(wǎng)膜內(nèi)部相對(duì)高缺氧性，導(dǎo)致了VEGF含量的低表達(dá)。③VEGF-A在不同的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用時(shí)被破壞。一個(gè)體外培養(yǎng)研究表明VEGF-A對(duì)視網(wǎng)膜有直接保護(hù)作用，負(fù)責(zé)神經(jīng)保護(hù)的同型被證明是VEGF120 。同時(shí)，VEGF受體2(VEGFR2)也被證明參與視網(wǎng)膜神經(jīng)保護(hù)。神經(jīng)元細(xì)胞中的節(jié)細(xì)胞層(GCL)和視網(wǎng)膜的內(nèi)核層(INL)缺血后表達(dá)VEGFR2，而感光細(xì)胞中的外核層(ONL)試驗(yàn)則呈陰性，無(wú)VEGFR2的表達(dá)[9]。

總之，我們認(rèn)為RP的發(fā)病機(jī)制還有很多其他因素，低VEGF-A表達(dá)減少了VEGF的生成，這是由于神經(jīng)變性的緣故而不是它導(dǎo)致了RP的產(chǎn)生。目前關(guān)于此方面的國(guó)內(nèi)外報(bào)道較少，通過(guò)研究RP患者低VEGF-A水平表達(dá)，進(jìn)一步探討這種難治性疾病，并且由此對(duì)這種疾病在神經(jīng)細(xì)胞治療保護(hù)作用上提供一個(gè)方向。

[1] Zobor D,Zrenner E. Retinitis pigmentosa - a review. Pathogenesis, guidelines for diagnostics and perspectives[J]. Ophthalmologe,2012,109(5):501-514.

[2] 鄭祥榕,柳林,高朋芬.視網(wǎng)膜色素變性疾病中細(xì)胞替代治療[J].中國(guó)實(shí)用眼科雜志,2013，31(8):953-956.

[3] Barbeito AG,Martinez-Palma L,Varqas MR, et al. Lead exposure stimulates VEGF expression in the spinal cord and extends survival in a mouse model of ALS[J].Neurobiol Dis,2010,37(3):574-580.

[4] Nishijima K, Ng YS, Zhong L, et al. Vascular endothelial growth factor-A is a survival factor for retinal neurons and a critical neuroprotectant during the adaptive response to ischemic injury[J].Am J Pathol, 2007,171(1):53-67.

[5] Balaiya S，Grover S，Murthy RK，et al．Freezing adversely affects measurement of vascular endothelial growth factor levels in human aqueous samples[J]．Clin Ophthalmol，2011，5(1)：81-85．

[6] Klettner A,Westhues D,Lassen J,et al. Regulation of constitutive vascular endothelial growth factor secretion in retinal pigment epithelium/choroid organ cultures: p38, nuclear factor κB, and the vascular endothelial growth factor receptor-2/phosphatidylinositol 3 kinase pathway[J].Mol Vis,2013,19:281-291.

[7] Contín MA, Arietti MM, Benedetto MM,et al. Photoreceptor damage induced by low-intensity light: model of retinal degeneration in mammals[J]．Mol Vis, 2013,19: 1614-1625.

[8] Lahdenranta J, Pasqualini R, Schlingemann RO, et al. An antiangiogenic state in mice and humans with retinal photoreceptor cell degeneration[J].Proc Natl Acad Sci USA, 2001,98(18):10368-10373.

[9] Nishijima K, Ng YS, Zhong L, et al. Vascular endothelial growth factor-A is a survival factor for retinal neurons and a critical neuroprotectant during the adaptive response to ischemic injury[J].Am J Pathol,2007,171(1):53-67.

(本文編輯 諸靜英)

更正

本刊2015年第15卷第4期封二“專題導(dǎo)語(yǔ)”中，“另一是除阿柏西普與康柏西普已獲我國(guó)國(guó)家藥品食品監(jiān)督管理總局批準(zhǔn)用于治療濕性黃斑水腫外”應(yīng)為“另一是除雷珠單抗與康柏西普已獲我國(guó)國(guó)家藥品食品監(jiān)督管理總局批準(zhǔn)用于治療濕性黃斑水腫外”；第252頁(yè)《抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子藥物在糖尿病性黃斑水腫治療中的應(yīng)用進(jìn)展》文獻(xiàn)中，“另外也有進(jìn)行中的Ⅲ期臨床試驗(yàn)Protocol T，針對(duì)阿柏西普(2.0 mg)、貝伐單抗(1.25 mg)、雷珠單抗(0.5 mg)眼內(nèi)注射治療DME的療效與安全性的比較研究”一段中的“雷珠單抗(0.5 mg)”應(yīng)為“雷珠單抗(0.3 mg)”；第303頁(yè)文獻(xiàn)《Bell面癱[耳顯微外科2007版(四十七)]》的DOI“10.14166/j.issn.1671-2420.2015.01.023”應(yīng)為“10.14166/j.issn.1671-2420.2015.04.023”。特此更正。

本刊編輯部

江蘇省無(wú)錫市第九人民醫(yī)院眼科 無(wú)錫 214062

于建春(Email:cx429@126.com)

10.14166/j.issn.1671-2420.2015.05.016

2013-09-18)