張　永　陶金輝　李向培　厲小梅　汪國生　錢　龍

·臨床醫(yī)學·

類風濕關(guān)節(jié)炎患者治療前后血清IL-8 IL-10的變化及其臨床意義

張永陶金輝李向培厲小梅汪國生錢龍

[摘要]目的檢測類風濕關(guān)節(jié)炎患者(RA)治療前后血清IL-8、IL-10的變化，探討其在RA發(fā)病機制中的作用及臨床意義。方法采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清中IL-8、IL-10 在類風濕關(guān)節(jié)炎治療前后的變化，并分析小劑量糖皮質(zhì)激素治療的影響。結(jié)果① RA患者治療前與正常對照比較IL-8濃度升高(P<0.05)，治療后IL-8濃度與治療前相比降低(P<0.05)，但仍高于正常對照組(P<0.05)；② RA患者治療前與正常對照比較IL-10濃度降低(P<0.05)，治療后IL-10濃度與治療前比較升高(P<0.05)，與正常對照比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；③RA組中血清IL-8、IL-10與ESR、CRP、PLT無相關(guān)性；④ 小劑量糖皮質(zhì)激素治療后患者血清IL-8濃度明顯低于未進行激素治療的患者。結(jié)論IL-8可能在RA病理過程中起重要作用，可作為監(jiān)測RA炎癥過程的一個有價值指標；血清IL-10在RA發(fā)病中可能具有抗炎和免疫抑制作用；小劑量的糖皮質(zhì)激素可有效抑制RA患者炎癥反應(yīng)。

[關(guān)鍵詞]關(guān)節(jié)炎，類風濕；白細胞介素-8；白細胞介素-10；糖皮質(zhì)激素

作者單位： 230001合肥安徽醫(yī)科大學附屬省立醫(yī)院風濕免疫科

類風濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是以侵蝕性、對稱性多關(guān)節(jié)炎為主要臨床表現(xiàn)的慢性、全身性自身免疫性疾病。主要表現(xiàn)為關(guān)節(jié)滑膜炎所致的關(guān)節(jié)腫痛及骨破壞，最終可致殘。RA的確切發(fā)病機制不明，其典型的病理改變是滑膜炎，該病與免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)功能紊亂有關(guān)，其中細胞因子在誘導自身免疫反應(yīng)中起了介導作用，細胞因子網(wǎng)絡(luò)平衡失調(diào)是導致病變侵蝕進展的主要因素之一。白細胞介素-8(IL-8)可能通過誘導免疫活性細胞釋放軟骨降解酶而引起RA的關(guān)節(jié)損傷；白細胞介素-10(IL-10)能下調(diào)巨噬細胞的抗原提呈功能，從而抑制Th1細胞因子及單核巨噬細胞因子的產(chǎn)生，具有免疫抑制和抗炎的作用。本研究通過比較致炎的IL-8與抗炎的IL-10細胞因子在治療前后的變化，分析其與炎癥指標的關(guān)系及糖皮質(zhì)激素對細胞因子的影響，并結(jié)合臨床資料進行分析，進一步探討其在RA發(fā)病中的作用機制。

1資料與方法

1.1一般資料收集2013年6月至2014年8月我院風濕免疫科91例RA患者臨床資料，其中女性82例，男性9例，平均年齡(43.62±11.89)歲，診斷均符合2010年美國風濕病學會(ACR)RA分類診斷標準；其中54例患者收集了治療3個月前后的資料，男性4例，女性50例，平均年齡(41.09±12.04)歲，所有患者均常規(guī)使用改善病情抗風濕藥(DMARDs)，其中14例患者合并使用了小劑量糖皮質(zhì)激素(潑尼松10 mg/d)。正常對照組14例，為我院健康體檢者。

1.2方法①收集RA患者臨床資料，包括一般情況、臨床表現(xiàn)及治療情況；②常規(guī)檢測血常規(guī)、ESR(魏氏法)、CRP(免疫比濁法)。③采集RA患者與正常對照靜脈血5 mL于普通試管中，離心后血清-20℃保存待測。采用ELISA法檢測RA及健康對照組血清IL-8、IL-10，具體操作按說明書進行。主要操作步驟：將RA患者治療前后的血清以1 ∶20稀釋；取稀釋后血清、標準品加到反應(yīng)小孔，每孔加100 μL，往反應(yīng)小孔里加入抗體100 μL；把標準板放在4 ℃冰箱里孵育過夜，使其充分反應(yīng)。次日把標準板放在洗板機上充分洗脫，標準板里加入200 μL顯色液，放在搖床上使其充分反應(yīng)。酶標儀測其OD值(吸光度)。

2結(jié)果

2.1治療前后血清IL-8、IL-10 的變化RA患者治療前血清IL-8濃度為144.63(15.92，676.17) pg/mL，治療后為55.78(20.37，177.82) pg/mL，均高于正常對照組(3.13±1.01) pg/mL,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。治療后濃度與治療前相比降低(P<0.05)，見圖1。

RA治療前血清IL-10濃度為5.33(2.04，10.43) pg/mL，治療后為6.21(3.71，12.40)pg/mL，正常對照為(16.59±3.20)pg/mL。RA患者治療后IL-10濃度高于治療前，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，治療前低于正常對照組(P<0.05)、治療后與正常對照比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見圖2。

2.2血清IL-8、IL-10與炎癥指標相關(guān)性分析運用Spearman相關(guān)分析，RA患者中血清IL-8與ESR、CRP、PLT無相關(guān)性；RA患者中血清IL-10與ESR、CRP、PLT 亦無相關(guān)性。詳見表1。

表1　血清IL-8和IL-10與炎癥指標的相關(guān)性

2.3小劑量糖皮質(zhì)激素對血清細胞因子IL-8、IL-10的影響14例RA患者使用了小劑量糖皮質(zhì)激素(潑尼松10 mg/d)，未使用糖皮質(zhì)激素患者40例；其中未使用激素患者血清IL-8濃度為(199.78±47.34) pg/mL，使用激素為(26.41±38.93) pg/mL，使用激素治療后血清IL-8濃度明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；未使用激素患者血清IL-10濃度為4.67(2.5，12.11) pg/mL，使用激素為(16.25±8.09) pg/mL，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

3討論

RA是免疫介導的炎性疾病，其病理學特征為滑膜炎癥、軟骨吸收、骨質(zhì)破壞和骨纖維化。細胞因子網(wǎng)絡(luò)平衡失調(diào)與RA的發(fā)病密切相關(guān)。

IL-8主要由巨噬細胞和成纖維細胞產(chǎn)生，成熟的IL-8由72個氨基酸殘基組成，其氨基酸序列從第28位的絲氨酸開始。IL-8是一種CXCR3的重要配體，具有很強的中性粒細胞趨化作用即促炎作用和促血管生成作用。IL-8對RA的作用機理可能是通過誘導中性粒細胞釋放軟骨降解酶從而引起RA的關(guān)節(jié)損傷。有研究[1]發(fā)現(xiàn)，RA患者的炎癥部位中性粒細胞的浸潤除與免疫復合物激活補體途徑有關(guān)，滑膜細胞生成TNF-α、IL-8等細胞因子也參與了這一作用。炎癥部位的各種炎性細胞因子如IL-1、TNF-α等均能刺激內(nèi)皮細胞、單核巨噬細胞等分泌大量的IL-8。IL-8能使局部血管的通透性增強，改變中性粒細胞與內(nèi)皮細胞的黏附，并趨化中性粒細胞游走、聚集到炎癥部位，釋放各種活性酶，參與炎癥反應(yīng)，引起關(guān)節(jié)軟骨和骨質(zhì)的損傷、破壞[2-3]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，治療前RA患者血清中IL-8水平升高，提示IL-8參與了RA患者的免疫病理過程，但血清IL-8水平的升高與ESR、CRP、PLT等指標無明顯相關(guān)性，與其他文獻[4]報道一致。IL-8是一種非特異性炎性趨化因子，在自身免疫性炎癥反應(yīng)過程中廣泛起作用，有學者研究[5]發(fā)現(xiàn)，幾乎所有炎癥損傷部位的T細胞均可釋放IL-8，推測IL-8可能作為一種獨立的炎癥因子與RA活動性相關(guān)。本組患者治療后IL-8水平明顯降低，表明其可作為監(jiān)測RA治療效果的血清學指標。

人IL-10主要由單核巨噬細胞及Tp細胞合成，它能下調(diào)巨噬細胞的抗原提呈功能，抑制Th1細胞因子及單核巨噬細胞因子的產(chǎn)生，促進Tp細胞因子的生理功能，可改變單核巨噬細胞的生物學功能，并糾正Th1/Tp偏離；此外，IL-10還可以抑制巨噬細胞產(chǎn)生的細胞因子，它可以抑制脂多糖(LPS)導致的多種炎癥因子的釋放。IL-10還可抑制PBMC產(chǎn)生TNF、IFN等多種細胞因子，降低樹突狀細胞(DC)細胞表面表達MHC-Ⅱ類分子、ICAM-1以及共刺激分子，阻礙DC細胞的抗原遞呈能力，從而誘發(fā)T細胞針對異種抗原的無能反應(yīng)[6]，因此，IL-10具有免疫抑制和抗炎作用。IL-10還可以通過負反饋作用，下調(diào)IL-10 mRNA的表達，進而抑制自身產(chǎn)生。IL-10可減少RA的致病性促炎因子，也可增加抗炎因子的產(chǎn)生，在RA中具有重要的免疫調(diào)節(jié)作用。用甲氨喋呤(MTX)治療RA的試驗中，IL-10與RA活動性呈負相關(guān)，關(guān)節(jié)炎的改善及ESR、CRP等活動性指標降低后，患者外周血單核細胞產(chǎn)生的IL-10明顯增多[7]。有研究[8]發(fā)現(xiàn)，IL-10通過抑制致炎因子的產(chǎn)生而減少淋巴細胞向病變關(guān)節(jié)的遷移，還能增加內(nèi)源性抗炎物質(zhì)，如可溶性TNF-α受體和IL-l受體拮抗劑產(chǎn)生，從而抑制TNF和IL-1的作用，進而減少RA滑膜細胞的浸潤、破骨細胞的激活，抑制病變發(fā)展[9]。IL-10還能夠通過抑制環(huán)氧化酶-2、基質(zhì)金屬蛋白酶，提高金屬蛋白酶組織抑制因子的表達等多途徑保持軟骨細胞[10，11]。本研究中，治療后RA患者血清IL-10水平升高，與治療前相比差異有統(tǒng)計學意義，反映了IL-10在RA患者疾病過程中的保護作用。

糖皮質(zhì)激素(glucocorticoid，GC)的作用主要是通過與胞漿內(nèi)的糖皮質(zhì)激素受體(glucocorticoid receptor，GR)結(jié)合實現(xiàn)的，GC與受體結(jié)合后可以增強抗炎基因或抑制炎癥基因的轉(zhuǎn)錄，相應(yīng)引起轉(zhuǎn)錄增加或減少，改變介質(zhì)相關(guān)蛋白的水平，進而對炎癥細胞和分子產(chǎn)生影響而發(fā)揮抗炎作用。近年有較多的文獻研究提示，小劑量GC(每日潑尼松10 mg或等效其他激素)有減緩RA病情進展的作用。中華醫(yī)學會風濕病分會推薦的RA診治指南[12]也指出，在RA急性發(fā)作，或伴有心、肺、眼和神經(jīng)系統(tǒng)等器官受累的重癥患者，可給予短效激素，其劑量依病情嚴重程度而調(diào)整。小劑量糖皮質(zhì)激素可作為DMARDs起效前的“橋梁”作用[13]。本研究中炎癥細胞因子IL-8在使用GC后得到了更好的控制，提示GC可以增強DMARDs抗炎，抑制炎癥，有助于控制RA疾病進展。

本研究結(jié)果顯示，IL-8與IL-10在RA中的失衡可能導致炎癥的進展，而小劑量糖皮質(zhì)激素具有抑制IL-8的致炎作用。大量細胞因子參與了RA炎癥過程，對細胞因子之間的關(guān)聯(lián)研究有助于闡明RA的發(fā)病機理及調(diào)控機制。

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(2014-11-21收稿2015-01-20修回)

The changes and clinical significance of serum IL-8 and IL-10 levels after treatment in patients with rheumatoid arthritis

ZhangYong,TaoJinhui,LiXiangpei,etal

DepartmentofRheumatologyandImmunology,AnhuiProvincialHospitalAffiliatedtoAnhuiMedicalUniversity,Hefei230001,China

[Abstract]ObjectiveTo detect the change of IL-8 and IL-10 levels in rheumatoid arthritis (RA) before and after treatment, and study its effect and clinical significance in the pathogenesis of RA. MethodsEnzyme linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect the concentration of serum IL-8, IL-10 before and after the treatment. The changes were also analyzed on the effects of small dose of glucocorticoid therapy. Results①RA patients had higher IL-8 concentration than healthy controls before treatment(P<0.05). After treatment, the concentration was significantly decreased(P<0.05), but still higher than that of the normal control group (P<0.05). ②Compared with normal control, RA patients had significant lower concentration (P<0.05). Moreover, treatment increased the concentration of IL-10 in serum (P<0.05), but there was no statistical difference between treatment group and normal controls (P>0.05). ③No correlation was found between IL-8 or IL-10 and ESR, CRP, PLT in RA group. ④ IL-8 concentration in low-dose glucocorticoid treated group was significantly lower than that in non-hormone treatment group. ConclusionIL-8 may play an important role in the pathogenesis of RA, and can be used as a valuable index to monitor the inflammatory process of RA; serum IL-10 may have anti-inflammatory and immunosuppressive effects on the pathogenesis of RA; small dose of glucocorticoid can effectively suppress inflammatory reaction in patients with RA.

[Key words]Rheumatoid arthritis; Interleukin-8; Interleukin-10; Glucocorticoid

通信作者：陶金輝，tao2002055@aliyun.com

基金項目：2012年度安徽省自然科學基金項目(1208085MH141)

doi:10.3969/j.issn.1000-0399.2015.04.005