張 寧，孫 進(jìn)

（沈陽(yáng)藥科大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110016）

HPLC法同時(shí)測(cè)定復(fù)方片劑中奧美沙坦酯與苯磺酸氨氯地平的含量

張 寧，孫 進(jìn)*

（沈陽(yáng)藥科大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110016）

目的建立HPLC法同時(shí)測(cè)定復(fù)方片劑中奧美沙坦酯與苯磺酸氨氯地平的含量。方法采用Thermo C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-15 mmol·L-1磷酸二氫鉀（pH=2.5）（體積比48:52），流速為1.0 mL·min-1，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為237 nm，柱溫為30 ℃。結(jié)果奧美沙坦酯質(zhì)量濃度在0.01～0.5 g·L-1內(nèi)與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系（r=0.999 8），平均回收率為 99.71%；苯磺酸氨氯地平質(zhì)量濃度在 5.000～125.0 mg·L-1內(nèi)與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系（r=0.999 9），平均回收率為 100.06%。結(jié)論本方法可用于同時(shí)測(cè)定復(fù)方片劑中奧美沙坦酯與苯磺酸氨氯地平的含量。

藥劑學(xué)；含量測(cè)定；高效液相色譜法；奧美沙坦酯；苯磺酸氨氯地平

奧美沙坦酯（olmesartan medoxomil，OLM，化學(xué)結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1）是選擇性血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑，它可以選擇性阻斷血管緊張素Ⅱ與血管平滑肌ATⅠ受體結(jié)合，從而阻斷血管緊張素Ⅱ收縮血管的作用，進(jìn)而起到降低血壓的作用[1-2]。苯磺酸氨氯地平（amlodipine besylate，AMB，化學(xué)結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖 2）屬于二氫吡啶類(lèi)鈣離子拮抗劑，它可以選擇性阻斷鈣離子通道，松弛阻力血管平滑肌，降低外周血管阻力，起到降壓作用[3-4]。目前國(guó)外已有復(fù)方奧美沙坦酯苯磺酸氨氯地平片（商品名為Azor，生產(chǎn)商為 Daiichi Sankyo）上市，用于高血壓的治療。有文獻(xiàn)報(bào)道[5-7]，奧美沙坦酯與苯磺酸氨氯地平聯(lián)合用藥可有效治療高血壓，并較其他類(lèi)型的藥物組合能更顯著降低心血管疾病的發(fā)生率。

Fig. 1 The structure of olmesartan medoxomil (1) and amlodipine besylate (2)圖 1 奧美沙坦酯（1）與苯磺酸氨氯地平（2）的化學(xué)結(jié)構(gòu)式

文獻(xiàn)報(bào)道采用分光光度法測(cè)定制劑中奧美沙坦酯和苯磺酸氨氯地平的含量[8-9]，但分光光度法中波長(zhǎng)的選擇對(duì)測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度影響很大，而且計(jì)算過(guò)程較繁瑣。文獻(xiàn)報(bào)道采用HPLC法同時(shí)測(cè)定復(fù)方制劑中奧美沙坦酯與苯磺酸氨氯地平的含量[10-13]，但所采用的方法均有不足之處，如：兩個(gè)藥物的保留時(shí)間較長(zhǎng)或是在保留時(shí)間短的條件下使用較為復(fù)雜的流動(dòng)相或是梯度洗脫。本文作者采用高效液相色譜法，優(yōu)化流動(dòng)相使奧美沙坦酯與苯磺酸氨氯地平保留時(shí)間分別為4.4 min和5.3 min，保留時(shí)間較短且流動(dòng)相系統(tǒng)簡(jiǎn)單，并對(duì)該含量測(cè)定方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。經(jīng)驗(yàn)證本法簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確、穩(wěn)定性好、適用性強(qiáng)，為其質(zhì)量控制提供了試驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與材料

高效液相色譜儀（配有2489紫外檢測(cè)器、2695輸液泵、Empower 3色譜工作站，美國(guó)Waters公司），ALC-11014電子天平（德國(guó)賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）。

奧美沙坦酯對(duì)照品（含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.8%，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)100864-200601），苯磺酸氨氯地平對(duì)照品（含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.3%，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)100374-201204），復(fù)方奧美沙坦酯苯磺酸氨氯地平片劑樣品（自制，規(guī)格：每片含奧美沙坦酯40 mg、苯磺酸氨氯地平5 mg，批號(hào)：20140320、20140321、20140323）。乙腈（色譜純，天津康科德科技有限公司），磷酸二氫鉀（汕頭西隴化工廠有限公司），其他試劑（分析純，市售），純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Thermo C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-15 mmol·L-1磷酸二氫鉀緩沖液（pH=2.5）（體積比為48:52）；流速：1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：237 nm；柱溫：30 ℃；理論塔板數(shù)按奧美沙坦酯峰計(jì)算大于3 000，分離度大于1.5。

2.2 溶液的配制

對(duì)照溶液：分別取奧美沙坦酯對(duì)照品約20 mg，苯磺酸氨氯地平對(duì)照品約2.5 mg，精密稱(chēng)定。置于100 mL量瓶中，加入流動(dòng)相溶解并稀釋制成奧美沙坦酯質(zhì)量濃度為200 mg·L-1、苯磺酸氨氯地平質(zhì)量濃度為25 mg·L-1的混合對(duì)照溶液。

供試溶液：取樣品10片，研細(xì)，取適量（約相當(dāng)于奧美沙坦酯20 mg，苯磺酸氨氯地平2.5 mg），精密稱(chēng)定。置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相適量，超聲15 min，放冷，稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 專(zhuān)屬性考察

按處方比例稱(chēng)取空白輔料，置100 mL量瓶中，加入適量流動(dòng)相，超聲15 min，放冷后稀釋至刻度，搖勻過(guò)濾，作為空白輔料溶液。稱(chēng)取奧美沙坦酯對(duì)照品及苯磺酸氨氯地平對(duì)照品適量，用流動(dòng)相制成奧美沙坦酯質(zhì)量濃度為200.0 mg·L-1和苯磺酸氨氯地平質(zhì)量濃度為25 mg·L-1混合對(duì)照溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)溶液。取上述空白輔料溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照“2.1”條色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，見(jiàn)圖2。由圖2可知，輔料不干擾奧美沙坦酯與苯磺酸氨氯地平的測(cè)定。

Fig. 2 HPLC chromatograms of blank excipents (A) and standard solution (B)圖 2 空白輔料溶液（A）與對(duì)照溶液(B)的高效液相色譜圖

2.4 線(xiàn)性關(guān)系考察

稱(chēng)取奧美沙坦酯對(duì)照品約10 mg，精密稱(chēng)定。置于10 mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為1 g·L-1奧美沙坦酯對(duì)照儲(chǔ)備液；稱(chēng)取苯磺酸氨氯地平對(duì)照品約10 mg，精密稱(chēng)定。置于10 mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為1 g·L-1苯磺酸氨氯地平對(duì)照儲(chǔ)備液。精密量取奧美沙坦酯對(duì)照儲(chǔ)備液0.1、0.5、1、2、3、4、5 mL各置編號(hào)為1、2、3、4、5、6、7的10 mL量瓶中，再精密量取苯磺酸氨氯地平對(duì)照儲(chǔ)備液0.05、0.1、0.2、0.25、0.5、1.0、1.25 mL依次加入上述編號(hào)為1～7的各量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，制得奧美沙坦酯與苯磺酸氨氯地平的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照“2.1”條色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖。以峰面積（A）對(duì)質(zhì)量濃度（ρ）進(jìn)行線(xiàn)性回歸，分別得奧美沙坦酯回歸方程：A=2.255×104ρ-2.225×104，r=0.999 8；苯磺酸氨氯地平回歸方程：A=1.534×104ρ+1.261×104，r=0.999 9。結(jié)果表明，奧美沙坦酯和苯磺酸氨氯地平質(zhì)量濃度分別在0.01～0.5 g·L-1和5.000～125.0 mg·L-1內(nèi)與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

分別取“2.4”條下編號(hào)分別為1、4、7號(hào)的低、中、高三個(gè)質(zhì)量濃度混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，于日內(nèi)每隔2 h測(cè)定一次，連續(xù)3次，另于每日進(jìn)樣測(cè)定1次（當(dāng)天配制），連續(xù)3次，記錄色譜圖。通過(guò)日間精密度與日內(nèi)精密度的考察，各RSD值均在限度以?xún)?nèi)，表明方法精密度良好，結(jié)果見(jiàn)表1。

Table 1 Precision of the method（n=9）表 1 精密度試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

2.6 回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)取奧美沙坦酯對(duì)照品16.0、20.0、24.0 mg，分別置于100 mL量瓶中，再精密稱(chēng)取苯磺酸氨氯地平對(duì)照品2.0、2.5、3.0 mg，分別依次置于上述100 mL量瓶中。加入處方量混合空白輔料，用流動(dòng)相制成一定質(zhì)量濃度的溶液，搖勻，制成相當(dāng)于含奧美沙坦酯與苯磺酸氨氯地平質(zhì)量分?jǐn)?shù)80%、100%、120%的溶液，濾過(guò)，作為供試溶液；另精密稱(chēng)取奧美沙坦酯與苯磺酸氨氯地平對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶解并制成每1 mL中約含奧美沙坦酯200 μg、苯磺酸氨氯地平25 μg的溶液，作為對(duì)照溶液，將上述溶液按照“2.1”條色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，回收率試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

Table 2 Recoveries of the assay（n=9）表 2 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

按照“2.2”條方法制備供試溶液，室溫放置，分別于0、2、4、6、8和10 h，按照“2.1”條色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，在不同時(shí)間點(diǎn)所測(cè)奧美沙坦酯與苯磺酸氨氯地平峰面積的RSD分別為0.46%和0.83%，表明供試溶液室溫放置10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 耐用性試驗(yàn)

檢測(cè)方法的耐用性試驗(yàn)是在改變一些試驗(yàn)條件（包括水相pH、流速、流動(dòng)相組成等）考察其檢測(cè)相同樣品的重復(fù)性。在流速、流動(dòng)相組成等試驗(yàn)條件不變的情況下，改變水相pH，水相pH分別為2.4、2.5和2.6。同理，改變流動(dòng)相組成，有機(jī)相與水相的體積比分別為43:57、48:52和53:47。同理，改變流速，流速分別為0.9、1.0和1.1 mL·min-1，分別在不同條件下檢測(cè)相同樣品的重復(fù)性。

試驗(yàn)結(jié)果表明該方法在適當(dāng)改變檢測(cè)條件時(shí)重復(fù)性良好，方法耐用性良好，結(jié)果見(jiàn)表 3。

Table 3 Robustness test of the method表 3 方法耐用性試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品含量測(cè)定

按照“2.2”條方法制備對(duì)照溶液及3批樣品的供試溶液，進(jìn)樣，記錄色譜圖。按外標(biāo)法計(jì)算樣品中兩主成分（以百分標(biāo)示量計(jì)）含量，每批次樣品測(cè)定3次，結(jié)果見(jiàn)表4。

Table 4 Drug content of samples表 4 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

a. 奧美沙坦酯最大吸收波長(zhǎng)為250 nm，苯磺酸氨氯地平最大吸收波長(zhǎng)為237 nm，考慮在該檢測(cè)條件下同時(shí)保證兩藥吸收較大，故選擇237 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

b. 奧美沙坦酯對(duì)流動(dòng)相比例及水相pH較為敏感，隨著水相pH值的升高，兩個(gè)主藥的保留時(shí)間增大，且苯磺酸氨氯地平比奧美沙坦酯增大的程度要大，最后綜合考慮水相 pH值與流動(dòng)相中水相與有機(jī)相的比例，選擇水相pH值為2.5，水相與有機(jī)相的體積比為52:48，該分析方法快速、準(zhǔn)確。

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Simultaneous determination of the content in compound tablets of olmesartan medoximil and amlodipine besylate

ZHANG Ning, SUN Jin*
（School of Pharmacy, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China）

ObjectiveTo establish an high performance liquid chromatography (HPLC) method to simultaneously determinate the content of olmesartan medoxomil and amlodipine besylate in compound tablets.MethodThe separation was achieved on the Thermo C18column (150 mm×4.6 mm, 5 μm) using a mobile phase consisting of acetonitrile-15 mmol·L-1KH2PO4(V:V=48:52) at a flow rate of 1.0 mL·min-1and UV detection at 237 nm.ResultsThe linearity of the proposed method was investigated in the range of 0.01-0.5 g·L-1(r=0.999 8) for olmesartan medoxomil and 5.000-125.0 mg·L-1(r=0.999 9) for amlodipine besylate. The recoveries were 99.71% for olmesartan medoxomil and 100.06% for hydrochlorothiazide, respectively.ConclusionThis method can be used to simultaneously determinate the content of olmesartanmedoxomil and amlodipine besylate.

pharmaceutics; content determination; HPLC; olmesartan medoxomil; amlodipine besylate

R94

A

(本篇責(zé)任編輯：馬麗麗)

（2015）02-0056-07

10.14146/j.cnki.cjp.2015.02.003

2014-04-24

張寧（1988-），女（漢族），遼寧海城人，碩士研究生，E-mail zhangning-0613@163.com；*通訊作者：孫進(jìn)（1975-），男（漢族），安徽金寨人，教授，博士，博士生導(dǎo)師，主要從事生物藥劑學(xué)與藥動(dòng)學(xué)、基于納米技術(shù)的藥物傳遞系統(tǒng)的研究，Tel. 024-23986325，E-mail sunjin0529@aliyun.com 。