李永華

HPLC-ELSD法測(cè)定康復(fù)春口服液中黃芪甲苷的含量

李永華

目的建立康復(fù)春口服液中黃芪甲苷的含量測(cè)定方法。方法采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)(HPLC-ELSD)法, 色譜柱：Diamonsil C18(4.6 mm×200 mm,5 μm), 流動(dòng)相：乙腈-水(30∶70),流速：0.9 ml/min；柱溫：30℃；ELSD參數(shù)：漂移管溫度70℃, 載氣壓力：25 kPa, 增益值：3。結(jié)果黃芪甲苷在1.05～20.92 μg之間呈良好線性關(guān)系, 回歸方程為：lnY=1.562lnX+13.506, r=0.9991(n=6)；回收率為93.98%, RSD=1.87%(n=6)。結(jié)論本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確和重現(xiàn)性好, 可作為康復(fù)春口服液的含量測(cè)定方法。

康復(fù)春口服液；高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法；黃芪甲苷；含量測(cè)定

康復(fù)春口服液為國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)收載的品種, 由黃芪、人參、玉竹、蜂王漿等四味中藥組成, 具有益氣固表、養(yǎng)心安神、健脾和胃等功效。用于心脾俱虛、飲食少思、腹脹腹?jié)M、少氣乏力、心慌心悸、精神倦怠、失眠。黃芪為方中君藥, 具有補(bǔ)氣升陽(yáng)、固表止汗、生津養(yǎng)血作用,而黃芪的主要藥理作用成分為黃芪甲苷[1]。原標(biāo)準(zhǔn)采用薄層掃描法對(duì)黃芪甲苷進(jìn)行含量測(cè)定, 本文采用HPLC-ELSD法,對(duì)黃芪甲苷的含量進(jìn)行測(cè)定, 經(jīng)方法學(xué)考察, 本法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確和重現(xiàn)性均比薄層掃描法要好, 此法可作為康復(fù)春口服液中黃芪甲苷的含量測(cè)定方法。

1 儀器與試劑

Waters e2695高效液相色譜儀, Waters2424型ELSD檢測(cè)器,1/100000電子天平。黃芪甲苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院, 批號(hào)110781-201314, 含量95.8%)；康復(fù)春口服液(批號(hào)20140721、20140810、20140920, 湖南回春堂藥業(yè)有限公司生產(chǎn))。乙腈為色譜純, 水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Diamonsil C18色譜柱(4.6 mm×200 mm,5μm)；流動(dòng)相為乙腈-水(30∶70)[1]；流速：0.9 ml/min；柱溫：30 ℃；ELSD參數(shù)：漂移管溫度70 ℃, 載氣壓力:25 kPa, 增益值：3。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 稱取黃芪甲苷對(duì)照品10.95 mg, 置10 ml量瓶中, 加甲醇溶解后稀釋至刻度。

2.3 供試品溶液的制備[2]精密吸取本品10 ml, 用三氯甲烷振搖提取2次,30 ml/次, 分取上層溶液, 用水飽和的正丁醇萃取5次,30 ml/次, 合并正丁醇液, 加入氨試液2次,80 ml/次, 合并正丁醇液層, 水浴蒸干, 殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5 ml量瓶中, 加甲醇至刻度, 即得供試品溶液。

2.4 陰性樣品溶液的制備 根據(jù)處方組成(原藥材由湖南回春堂藥業(yè)有限公司提供)按比例不加黃芪按康復(fù)春口服液的制備工藝制備陰性樣品, 再按2.3項(xiàng)下的方法制成陰性對(duì)照溶液。按上述色譜條件測(cè)定, 黃芪甲苷峰與前后峰分離好,且陰性樣品溶液在與黃芪甲苷對(duì)照品相同保留時(shí)間處未顯色譜峰, 故認(rèn)為無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

色譜圖11-黃芪甲苷 A-對(duì)照組B-樣品C-陰性對(duì)照

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 分別精密吸取對(duì)照品溶液1,2,6,10,15,20 μl, 注入液相色譜儀, 按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定, 以進(jìn)樣量X(μg)的自然對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo), 峰面積Y自然對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo), 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線, 得回歸方程：lnY=1.562lnX+13.506, r=0.9991(n=6)。結(jié)果顯示, 黃芪甲苷在1.05～20.92 μg呈良好線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取黃芪甲苷對(duì)照品溶液5 μl, 注入液相色譜儀, 連續(xù)進(jìn)樣5次, 測(cè)定黃芪甲苷的吸收峰面積, RSD=1.85%(n=5)。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液20 μl, 在0、2、8、16、24、36、48 h分別進(jìn)樣, 黃芪甲苷峰面積RSD=1.12%(n=7),表明供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一樣品(批號(hào)20140721)6份,10 ml/份, 按2.3項(xiàng)方法制備溶液, 照含量方法測(cè)定, 結(jié)果平均含量為0.084 mg/ml, RSD=1.19%。

2.9 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的樣品(批號(hào)20140721, 0.084 mg/ml), 精密量取6份,5 ml/份, 分別精密加入濃度為1.049 mg/ml的黃芪甲苷對(duì)照品0.4 ml, 按2.3項(xiàng)的方法制備溶液, 按照上述方法測(cè)定黃芪甲苷的含量, 計(jì)算回收率, 結(jié)果平均回收率為93.98%, RSD=1.87%(n=6)。見(jiàn)表1。

2.10 樣品測(cè)定 取3批康復(fù)春口服液, 照2.3項(xiàng)下制備供試品溶液, 每批樣品制備平行樣2份, 進(jìn)樣20.00 μl。含量分別為(批號(hào)20140721、20140810、20140920)0.084、0.088、0.089 mg/ml。另采用原標(biāo)準(zhǔn)中的方法測(cè)定, 含量分別為(批號(hào)20140721、20140810、20140920)0.0459、0.0509、0.0371 mg/ml。

3 小結(jié)

3.1 黃芪甲苷無(wú)特征紫外吸收, 僅在200 nm處有弱的末端吸收, 需采用紫外末端波長(zhǎng)檢測(cè)[3], 對(duì)溶劑要求較高, 試驗(yàn)成本昂貴；且如有其他皂苷類成分的存在時(shí), 干擾嚴(yán)重, 分離度下降, 重現(xiàn)性差, 很難利用HPLC-UV聯(lián)用測(cè)定黃芪甲苷含量。

3.2 原標(biāo)準(zhǔn)采用薄層掃描法對(duì)黃芪甲苷進(jìn)行測(cè)定, 但此法受硅膠顆粒細(xì)度及薄層板的厚度、活化程度、點(diǎn)樣、展開(kāi)、顯色劑量的多少及均勻程度、加熱時(shí)間等諸多因素影響, 往往需要反復(fù)試驗(yàn), 其準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性、精密度很難保證。

3.3 原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中, 供試品溶液的處理還要過(guò)D101型大孔吸附樹(shù)脂柱及用水、40%、70%乙醇洗滌, 本法省去上述步驟, 實(shí)驗(yàn)表明黃芪甲苷分離效果也很理想, 且加樣回收率也比較好。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典.一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:284.

[2]朱克旭, 李永宏, 劉冰冰. HPLC-ELSD法測(cè)定芪心合劑中黃芪甲苷的含量. 安徽醫(yī)藥,2011,15(11):1364-1365.

[3]錢廣生, 劉三康, 李章萬(wàn). HPLC測(cè)定黃芪注射液中黃芪甲苷的含量. 華西藥學(xué)雜志,2002,17(1):41-42.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.15.197

2015-03-30]

417000 婁底市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)所