楊興林，梁躍東，洪章萍，熊金鳳，王云芬，姚 駿，黃 海

（1.貴州省貴陽市第五人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 550004；2.貴陽醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)系，貴陽550004）

手足口病（hand foot and mouth disease，HFMD）是由多種人腸道病毒引起的一種兒童常見傳染病，以發(fā)熱和手、足、口腔等部位的皮疹或皰疹為主要癥狀。少數(shù)患者出現(xiàn)無菌性腦膜炎、腦炎、急性弛緩性麻痹、神經(jīng)源性肺水腫和心肌炎等，個(gè)別重癥患兒病情進(jìn)展快，可導(dǎo)致死亡。能引起HFMD的病毒很多，主要為小RNA病毒科腸道病毒屬的柯薩奇病毒、?？刹《竞托履c道病毒。其中，腸道病毒71型（EV71）和柯薩奇病毒A組16型（CA16）為目前引發(fā)HFMD的兩大主要病原體。其中EV71感染約占實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的61.43%，重癥病例的88.00%，死亡病例的95.00%以上[1]。因此，對(duì)引起HFMD病原進(jìn)行迅速鑒別診斷顯得尤為重要。為了解貴陽地區(qū)HFMD的病原體構(gòu)成，本研究運(yùn)用熒光定量PCR方法對(duì)2012年1～12月，到貴州省貴陽市第五人民醫(yī)院住院疑似HFMD患兒的肛拭子標(biāo)本檢測(cè)腸道病毒通用型、EV71和CA16，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2012年1～12月，在貴陽市第五人民醫(yī)院（貴陽市HFMD定點(diǎn)醫(yī)院）住院治療的HFMD患兒3 179例，年齡1個(gè)月至35歲，男1 724例，女1 455例。診斷標(biāo)準(zhǔn)參照均符合《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》HFMD診斷標(biāo)準(zhǔn)及《手足口病診療指南》（2010年版）HFMD的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑和儀器 采用獲國家注冊(cè)證上海之江生物科技有限公司生產(chǎn)的EV71、CA16熒光定量PCR試劑和腸道病毒通用型熒光定量PCR試劑。檢測(cè)儀器為羅氏Cobas z 480熒光定量PCR儀。

1.2.2 標(biāo)本采集 在患兒住院當(dāng)天用專用采樣棉簽，從患兒肛門輕輕插入，適度用力弧型左右擦拭數(shù)下，拔出后，迅速將棉簽放入病毒采樣管（北京友康基業(yè)生物科技有限公司）中，采樣管外表貼上帶有惟一識(shí)別號(hào)碼的標(biāo)簽。于2h內(nèi)送檢，-80℃低溫保存。

1.2.3 腸道病毒核酸PCR熒光檢測(cè) 病毒RNA的提取，采用磁珠柱提取法，按照上海之江生物科技有限公司RNA抽提試劑盒說明書操作。擴(kuò)增反應(yīng)體系和條件按照說明書操作和設(shè)置，在羅氏Cobas z 480熒光定量PCR儀上進(jìn)行檢測(cè)。熒光通道檢測(cè)選用FAM通道。結(jié)果判斷：按照說明書，檢測(cè)Ct≤38，檢測(cè)結(jié)果報(bào)告為陽性，如果檢測(cè)Ct值38～40，重復(fù)檢測(cè)1次，如果重復(fù)檢測(cè)Ct值仍在38～40，則判為陰性。試驗(yàn)結(jié)果解釋見表1。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，對(duì)3 179例住院HFMD患兒運(yùn)用描述性流行病學(xué)方法進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 試驗(yàn)結(jié)果解釋

2 結(jié)果

2.1 一般情況 3 179例HFMD感染者中，男女比例為1.18∶1.00，男童患病率高于女童（P＜0.05）；EV71、CA16和其他EV感染分別占10.41%（331／3 179）、4.75%（151／3 179）、28.22%（897／3 179），EV71＋CA16陽性7例占0.22%。男、女的EV71、其他型EV及EV71＋CA16檢出率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），CA16檢出率比較男性高于女性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 不同性別組患者腸道病毒檢測(cè)[n（%）]

2.2 不同月份HFMD病例及病原檢測(cè)情況 3 179例HFMD病例按照月份統(tǒng)計(jì)分析，HFMD全年均有發(fā)病，但有明顯的季節(jié)性，隨季節(jié)變換，呈單峰分布狀態(tài)，在4～7月為發(fā)病高峰，10～11月出現(xiàn)一個(gè)次高峰。從4月份開始上升，5月份達(dá)到高峰，6月份以后呈逐漸下降趨勢(shì)；10月份有輕微上升，11月份有一個(gè)小高峰。3 179例HFMD不同型病毒檢出陽性率的變化趨勢(shì)情況分析，全年各月份主要以其他型腸道病毒陽性率最高，其次為EV71、CA16。其變化趨勢(shì)在2月份其他型腸道病毒、EV71、CA16形成一個(gè)交叉點(diǎn)，隨著發(fā)病例數(shù)的增加，其他型腸道病毒檢出陽性率逐漸增加，在5月份高峰后逐漸將低，在11月份小高峰時(shí)陽性率又達(dá)到最高。而EV71與CA16檢測(cè)陽性率在1～5月變化不大，交替進(jìn)行，6月以后EV71檢測(cè)率逐漸升高，12月份檢出率最高。其不同病毒型別變化趨勢(shì)見圖1。

圖1 2012年3179例HFMD患者不同月份腸道病毒陽性率變化趨勢(shì)

2.3 不同年齡段兒童病毒感染情況 本地區(qū)手足口病發(fā)病0～3歲患兒2 720例，占85.56%；＞3～5歲患兒337例，占10.6%；＞5歲患兒122例，占3.8%。主要以小于或等于3歲為高發(fā)年齡。不同年齡組的病原構(gòu)成差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），各年齡組患兒中，其他型腸道病毒感染所占比例均顯著高于EV71和CA16。其他型腸道病毒0～1歲組感染陽性率最高31.01%，＞5歲組感染陽性率最低為15.58%，不同年齡組其他型EV感染率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。而CA16與EV71在不同年齡段的檢出率變化不大，其在不同年齡組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。見表3。

表3 不同年齡組患者腸道病毒檢測(cè)[n（%）]

3 討論

HFMD是由多種腸道病毒引起的常見傳染病之一，引起HFMD的病毒屬于小RNA病毒科腸道病毒屬。其中以EV71及CVA16型較為常見。我國自1981年上海始見本病后，北京、福建、吉林等地陸續(xù)有相關(guān)報(bào)道。掌握不同時(shí)期及地域HFMD病原體流行特征和分布情況，對(duì)預(yù)測(cè)HFMD病原體流行趨勢(shì)的變化具有重要的價(jià)值；故監(jiān)測(cè)HFMD病原體變化對(duì)于HFMD預(yù)防、治療以及預(yù)后的判斷均具有重要意義。

本研究采用了經(jīng)國家FDA注冊(cè)批準(zhǔn)的腸道病毒核酸檢測(cè)系列試劑盒作為檢測(cè)HFMD病原體的實(shí)驗(yàn)室核酸檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，運(yùn)用一步法熒光定量PCR法原理對(duì)腸道病毒通用型、EV71型和CA16型進(jìn)行檢測(cè)。本研究共采集的貴陽地區(qū)3 179例HFMD患者肛拭子標(biāo)本，檢出EV71共331例（10.41%），CA16共151例（4.75%），其他腸道病毒共879例（28.22%），EV71＋CA16陽性7例（0.22%）。證實(shí)貴陽地區(qū)2012年手足口病流行的主要病原體是非EV71、非CA16的其他型腸道病毒感染，其次是EV71、CA16。其檢測(cè)結(jié)果與作者之前的報(bào)道比較：2010年手足口病例共312例，EV71、CA16、其他腸道病毒的檢出百分率分別為13.46%、6.73%、48.07%[2]；2011年檢測(cè)的1 379份手足口EV71為5.80%及CA16為2.18%，其他型腸道病毒檢出率為39.10%[3]。李家偉等[4]報(bào)道的2009年貴陽市重癥患者EV71陽性的檢出率為16.30%，其他腸道病毒的陽性率為26.08%。通過近幾年貴陽地區(qū)手足口病病原檢測(cè)結(jié)果分析其主要病原體還是以其他型腸道病毒為主，其次是EV71、CA16。而2012年的其他型腸道病毒的檢出率有所降低，EV71與CA16檢出率較2011年有所上升。本研究報(bào)道在主要病原體上與國內(nèi)其他地區(qū)報(bào)道存在差異，林先耀等[5]報(bào)道杭州2012年449例HFMD臨床診斷病例中，其中EV71占42.6%，CA16占22.9%，其他腸道病毒占4.6%。葛艷玲等[6]報(bào)道上海地區(qū)1 544例患兒病原學(xué)檢測(cè)，EV7l陽性908例（58.81%），CA16陽性143例（9.26%）。李洪杰等[7]報(bào)道北京2010年EV71陽性標(biāo)本占40.3%；CA16陽性標(biāo)本占5.64%；其他未分型腸道病毒陽性標(biāo)本占17.2%。常昭瑞等[8]對(duì)我國2008～2009年HFMD報(bào)告病例流行病學(xué)特征分析，表明EV71和CA16為主要病原，不同地區(qū)其病原構(gòu)成不盡相同，不同緯度地區(qū)流行強(qiáng)度不同，季節(jié)分布存在差異。對(duì)于貴陽地區(qū)的手足口病其主要病原是其他血清型的腸道病毒感染，而在其他腸道病毒感染中有其優(yōu)勢(shì)型，其相關(guān)型別的鑒別工作正在進(jìn)一步確認(rèn)。

從本地區(qū)發(fā)病人群來看，本研究結(jié)果顯示在各年齡段人群中均可發(fā)病，以5歲以下兒童為主，其中3歲及以下年齡組發(fā)病率最高，男童的發(fā)病率高于女童。其報(bào)道與國內(nèi)相關(guān)報(bào)道相一致[9]。各年齡組患兒中，其他型腸道病毒感染所占比例均顯著高于EV71和CA16。不同年齡組其他型腸道病毒感染率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而CA16與EV71在不同年齡段的檢出率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。從本統(tǒng)計(jì)結(jié)果來看本地區(qū)發(fā)病年齡集中在2歲以下，Lu等[10]認(rèn)為機(jī)體缺乏保護(hù)性抗體可能是低年齡組兒童高發(fā)及高病死率的主要原因。人對(duì)腸道病毒普遍易感，HFMD傳播途徑容易實(shí)現(xiàn)，不僅經(jīng)糞-口傳播，也可經(jīng)空氣或接觸等傳染途徑傳播，衛(wèi)生條件、人口密集程度等因素影響發(fā)病[11]，因此，家長在照顧其小孩時(shí)需要注意衛(wèi)生。流行季節(jié)分布顯示，3月病例開始增多，4～7月為發(fā)病高峰，10～11月出現(xiàn)一個(gè)次高峰，與我國臺(tái)灣、香港和新加坡等地報(bào)道的流行季節(jié)發(fā)病高峰（5～7月）相比提前了1個(gè)月[12]。在4～7月病原構(gòu)成主要以其他型腸道病毒為主，10～11月EV71逐漸升高。本地區(qū)流行高峰持續(xù)時(shí)間長，可能與低緯度地區(qū)存在適宜病毒存活和傳播的地理氣候條件有關(guān)[13]。

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