盧可可，譚玉榮，吳素蕊，明 建,3,*

（1.西南大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，重慶 400715；2.中華全國供銷合作總社昆明食用菌研究所，云南 昆明 650223；3.西南大學(xué) 國家食品科學(xué)與工程實驗教學(xué)中心，重慶 400715）

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不同產(chǎn)地尖頂羊肚菌多酚組成及抗氧化活性研究

盧可可1，譚玉榮1，吳素蕊2，明 建1,3,*

（1.西南大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，重慶 400715；2.中華全國供銷合作總社昆明食用菌研究所，云南 昆明 650223；3.西南大學(xué) 國家食品科學(xué)與工程實驗教學(xué)中心，重慶 400715）

摘 要：為研究不同產(chǎn)地羊肚菌多酚的抗氧化活性及組成，以3 種不同產(chǎn)地（云南、西藏、新疆）尖頂羊肚菌為原料，提取羊肚菌游離酚和結(jié)合酚，測定其1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基清除能力、還原力、2,2’-聯(lián)苯-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二銨鹽（2,2’-azinobis-（3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate），ABTS）自由基清除能力和抗氧化能力指數(shù)（oxygen radical absorbance capacity，ORAC）值，并通過高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）分析其組分。結(jié)果表明，3 種尖頂羊肚菌平均總酚含量為5.958 mg GAE/g，游離酚約為結(jié)合酚的25 倍；云南尖頂羊肚菌游離酚、結(jié)合酚含量最高（（6.157±0.192）、（0.250±0.018） mg GAE/g），西藏尖頂羊肚菌游離酚、結(jié)合酚含量最低（（4.928±0.045）、（0.188±0.026） mg GAE/g）。3 種尖頂羊肚菌多酚組分主要為酚酸和黃酮，組成較一致，但含量差異顯著。體外抗氧化結(jié)果表明：3 種尖頂羊肚菌多酚均具有一定的抗氧化活性，其中對DPPH自由基的清除能力最強；西藏尖頂羊肚菌多酚的DPPH自由基清除能力和還原力最強；新疆尖頂羊肚菌多酚的ABTS＋·清除能力最強，ORAC值也最高。

關(guān)鍵詞：尖頂羊肚菌；多酚；抗氧化活性；抗氧化能力指數(shù)；高效液相色譜

尖頂羊肚菌（Morchella conica Pers.）別名圓錐羊肚菌、陽雀菌，隸屬于子囊菌門（Ascomycota）子囊菌綱（Ascomycetes）盤菌目（Pezizales）羊肚菌科（Morchellaceae）羊肚菌屬（Morchella），是一種珍貴的食藥用菌[1]。尖頂羊肚菌是我國羊肚菌中最常見品種之一，主要分布在云南、西藏、新疆等地。已有研究表明尖頂羊肚菌營養(yǎng)豐富，藥用價值極高，富含蛋白質(zhì)、纖維素、礦質(zhì)元素（包括鋅、鐵等微量元素）和多種氨基酸，其中有7 種為人體必需氨基酸[2]；另外尖頂羊肚菌中還含有多種活性物質(zhì)，如多糖[3]等，具有抗氧化[3]、抗增殖[4]、降血壓[5]、降血脂[6]和抗衰老[7]等功效。人們普遍認(rèn)為，食用菌的生理功能主要是由食用菌多糖，特別是活性多糖所致[5,7]。近年來，人們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，植物多酚結(jié)構(gòu)中存在的羥基基團(tuán)可與體內(nèi)自由基結(jié)合，從而消滅自由基，因而具有抗氧化、抗癌等功能活性[8-9]，并成為國內(nèi)外研究的熱點。目前羊肚菌研究主要集中在羊肚菌分類[10]、地理分布[11]、人工栽培[12]和發(fā)酵產(chǎn)物[13]、活性多糖提取純化及功能活性[14]等，而對羊肚菌多酚類物質(zhì)的研究還鮮有報道。

本實驗以3 種不同產(chǎn)地（云南、西藏、新疆）尖頂羊肚菌為原料，提取尖頂羊肚菌游離酚和結(jié)合酚，并對其體外抗氧化活性進(jìn)行測定，比較不同品種尖頂羊肚菌多酚含量及抗氧化活性，為尖頂羊肚菌綜合利用和產(chǎn)品開發(fā)提供參考。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

云南尖頂羊肚菌（Morchella conica Pers. Yunnan）、西藏尖頂羊肚菌（Morchella conica Pers. Tibet）、新疆尖頂羊肚菌（Morchella conica Pers. Xinjiang），由中華全國供銷合作總社昆明食用菌研究所提供。

1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）、抗壞血酸（VC）、表沒食子兒茶素沒食子酸酯（epigallocatechin gallate，EGCG）、2,2’-聯(lián)苯-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二銨鹽（2,2’-azinobis-（3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate），ABTS）、熒光素鈉鹽（fluorescein disodium salt，F(xiàn)L）、6-羥基-2,5,7,8-四甲基色烷-2-羧酸（6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid，Trolox，分析純） 美國Sigma公司；2,2’-偶氮二異丁基脒鹽酸鹽（2,2’-azobis（2-methylpropionamidine）dihydrochloride，ABAP） 日本W(wǎng)ako Chemicals公司；甲醇（色譜級） 天津四友精細(xì)化學(xué)品有限公司；其他試劑均為分析純。

1.2儀器與設(shè)備

DHG-9140A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 上海齊欣科學(xué)儀器有限公司；JYL-A110粉碎機(jī) 上海恒平科學(xué)儀器有限公司；HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋 金壇市富華儀器有限公司；VDRTEX-5漩渦振蕩器 其林貝爾儀器制造有限公司；XHF-D均質(zhì)機(jī) 寧波新芝生物科技股份有限公司；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、SHZ-III循環(huán)水真空泵 上海亞榮生化儀器廠；5810型臺式高速離心機(jī) 德國Eppendorf公司；TGL-16G離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠；DF8517冰箱（－80 ℃） 韓國Ilshin公司；722分光光度計 上海精科科學(xué)儀器廠；KQ-100型超聲波清洗器昆山市超聲儀器有限公司；PB-10 pH計 德國賽多利斯公司；SpectraMax M2多功能酶標(biāo)儀 美國Molecular公司。

1.3方法

1.3.1 材料預(yù)處理

3 種尖頂羊肚菌采摘后12 h內(nèi)速凍，于－20 ℃條件下凍藏，實驗前取出冷凍羊肚菌于50 ℃烘箱烘干至恒質(zhì)量，分別用中藥粉碎機(jī)粉碎，過80 目篩后密封備用。

1.3.2 尖頂羊肚菌多酚的提取

1.3.2.1 游離酚的提取

參考Okarter等[15]的方法，并根據(jù)實驗室條件稍作修改。準(zhǔn)確稱取2.00 g樣品于100 mL離心管中，加入50 mL 80%的預(yù)凍丙酮溶液（－4 ℃），均質(zhì)2 min后充分?jǐn)嚢杼崛?0 min。2 500×g離心10 min，取上清液。殘渣重復(fù)提取一次，合并上清液，抽濾后于45 ℃旋轉(zhuǎn)蒸干，用甲醇定容至25 mL。過0.45 μm有機(jī)濾膜后貯于－80 ℃條件下備用。

1.3.2.2 結(jié)合酚的提取

參考Nuntila等[16]的方法，并根據(jù)實驗室條件稍作修改。收集1.3.2.1節(jié)游離酚提取后的殘渣，加入20 mL 2 mol/L NaOH溶液，室溫處理1.5 h，再用濃鹽酸調(diào)至pH 2左右。加入正己烷25 mL，放置10 min后離心，除去脂肪層。加入20 mL乙酸乙酯并充分?jǐn)嚢杼崛?0 min，2 500×g離心后取上清液，重復(fù)提取5 次（每次離心加大離心率500×g），合并上清液，抽濾后于45 ℃旋轉(zhuǎn)蒸干，用甲醇定容至10 mL。過0.45 μm有機(jī)濾膜后貯于－80 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.3.3 多酚含量測定

沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：參考Chu Yifang等[17]的方法，稱取25 mg沒食子酸，加入適量去離子水充分溶解，定容至25 mL，得到1 mg/mL的沒食子酸溶液。取5 mL 1 mg/mL的沒食子酸溶液，用去離子水定容至50 mL容量瓶中，即得0.1 mg/mL的沒食子酸溶液，然后配成0、20、100、150、200、300、400、500、600 μg/mL的沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)液。取200 μL標(biāo)準(zhǔn)液加入試管中，再依次加入800 μL去離子水、200 μL Folin-酚試劑，振搖試管使樣品充分混合，避光保存6 min，再加入2 mL 7% Na2CO3溶液和1.6 mL去離子水，在避光條件下放置90 min后于760 nm波長處測定吸光度。以多酚質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程為y=0.004 3x＋0.016 8（R2=0.998 3）。

羊肚菌多酚含量測定：采用Folin-酚法，取200 μL提取液（可作適當(dāng)稀釋）并用去離子水補至1 mL，后續(xù)操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。結(jié)果以每克羊肚菌樣品中所含的沒食子酸當(dāng)量（mg GAE/g）表示。每個樣品做3 組平行，結(jié)果表示為

1.3.4 尖頂羊肚菌多酚抗氧化活性測定

1.3.4.1 DPPH自由基清除率測定

參考Cheung等[18]的方法，將多酚提取液做相應(yīng)稀釋后，取1 mL不同質(zhì)量濃度的樣液和5 mL 0.1 mmol/L的DPPH溶液加入到10 mL的試管中，以抗壞血酸作為對照，混合均勻后在室溫條件下避光反應(yīng)50 min，然后于520 nm波長處測定吸光度Ai，以甲醇溶液做試劑空白，測定空白樣吸光度Aj。按公式（1）計算樣品DPPH自由基清除率。

1.3.4.2 還原力測定

參考Ardestani等[19]的方法，將多酚提取液做相應(yīng)稀釋后，取1 mL不同質(zhì)量濃度的樣液、25 mL磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS，0.2 mol/L，pH 6.6）溶液和25 mL 1%鐵氰化鉀溶液加入到10 mL的離心管中，混合均勻后在50 ℃條件下水浴20 min。取出冷卻后加入25 mL的10%三氯乙酸溶液，混合物于3 000×g離心10 min，取上清液25 mL，再加入25 mL去離子水和0.5 mL 0.1%氯化鐵溶液，混合均勻后于700 nm波長處測定吸光度，以吸光度表示還原力，吸光度越大，還原力越大。以甲醇溶液做空白，抗壞血酸作為對照。

1.3.4.3 ABTS＋·清除率測定

參考Soong等[20]的方法，即將5 mL的7 mmol/L ABTS溶液和88 μL的140 mmol/L過硫酸鉀溶液混合，在室溫、避光條件下靜置過夜（12～16 h），形成ABTS＋·儲備液。將生成的ABTS＋·溶液用10 mmol/L pH 7.4的磷酸鹽緩沖液稀釋，使其在室溫條 件下734 nm波長處的吸光度為0.70±0.02，得到ABTS＋·工作液。將多酚提取液做相應(yīng)稀釋后，取3 mL不同濃度的樣品液和1 mL ABTS＋·工作液于10 mL的試管中，以抗壞血酸為對照，混合均勻后30 ℃水浴反應(yīng)6 min，然后于734 nm波長處測定吸光度Ai，以甲醇溶液做試劑空白，測定空白樣吸光度Aj。按公式（2）計算樣品的ABTS＋·清除率。

為直觀表現(xiàn)不同樣品的DPPH自由基和ABTS＋·清除能力的大小，本實驗引入半數(shù)抑制率IC50值作為評價標(biāo)準(zhǔn)[21]，即清除率達(dá)到50%時所需抗氧化劑的質(zhì)量濃度（μg/mL），IC50值越小，說明抗氧化劑的抗氧化效果越好。1.3.4.4抗氧化能力指數(shù)（oxygen radical absorbance capacity，ORAC）值測定

參照Wolfe等[22]的方法，并根據(jù)本實驗室條件稍作修改，分別精確吸取20 μL磷酸鹽緩沖液（空白液）、Trolox標(biāo)準(zhǔn)液（6.25 μmol/L）和不同質(zhì)量濃度的樣品液，一式三份點樣到96 孔黑色底部透明的酶標(biāo)板。在37 ℃溫育10 min，設(shè)置酶標(biāo)儀參數(shù)。加入200 μL 0.96 μmol/L的熒光工作液，再在37 ℃溫育至少20 min并間歇搖動，等酶標(biāo)板溫度達(dá)到37 ℃后，迅速加入新鮮配制的119 mmol/L ABAP工作液20 μL，于激發(fā)波長485 nm、入射波長520 nm條件下立即讀數(shù)，每4.5 min進(jìn)行一次讀數(shù)，共檢測2.5 h。按照公式（3）計算熒光衰減曲線下的面積（the area of fluorescence decay curve，AUC），按照公式（4）計算ORAC值。

式中：f1為第一次熒光讀數(shù)值；fn為第n次熒光讀數(shù)值；CT為間隔測定時間。

最終的ORAC值以Trolox當(dāng)量表示（μmol TE/100 g）。

1.3.5 高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）法鑒定尖頂羊肚菌多酚組分

1.3.5.1 標(biāo)準(zhǔn)品及樣品溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)品配制：準(zhǔn)確稱取沒食子酸、原兒茶酸、對羥基苯甲酸、兒茶素和綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品各10 mg，用甲醇溶解后定容至10 mL，并稀釋成不同質(zhì)量濃度溶液（0、1、5、25、50、100、200 μg/mL），經(jīng)0.45 μm有機(jī)濾膜過濾，備用。

樣品配制：取羊肚菌多酚提取液 1 mL，用0.45 μm有機(jī)膜過濾，備用。

1.3.5.2 色譜條件

參照Liang等[23]的方法并適當(dāng)修改：色譜柱：Thermo BDS C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相A：0.2 %甲酸；流動相B：100%乙腈；梯度洗脫程序為0～5 min，B為10%；5～25 min，B為10%～40%；25～35 min，B為40%～90%；35～40 min，B為90%；40～45 min，B為90%～10%；45～50 min，B為10%。流速：0.7 mL/min；進(jìn)樣量：8 μL；柱溫：40 ℃；檢測波長280 nm。

1.4數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用Origin 8.0統(tǒng)計分析，實驗重復(fù)3次，結(jié)果用±s表 示，并用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計處理，采用ANOVA進(jìn)行Turkey多重比較分析（P＜0.05）。

2　結(jié)果與分析

2.1不同產(chǎn)地尖頂羊肚菌多酚含量分析

表1　3種尖頂羊肚菌中游離酚、結(jié)合酚和總酚含量Table 1 Contents of free, bound and total polyphenols in three kinds of Morchella cnica Pers.

由表1可知，3 種尖頂羊肚菌游離酚含量為4.928～6.157 mg GAE/g，結(jié)合酚含量為0.188～0.250 mg GAE/g，游離酚含量約為結(jié)合酚25 倍。對于游離酚而言，云南尖頂羊肚菌含量最高（（6.157±0.192） mg GAE/g），西藏尖頂羊肚菌含量最低（（4.928±0.045） mg GAE/g），新疆和云南尖頂羊肚菌含量無顯著差異，但均顯著高于西藏尖頂羊肚菌（P＜0.05）。對于結(jié)合酚而言，云南尖頂羊肚菌最高（0.250 mg GAE/g），顯著高于新疆和西藏尖頂羊肚菌（P＜0.05），西藏尖頂羊肚菌含量最低（0.188 mg GAE/g）。與其他植物比較，羊肚菌中多酚含量也屬較高水平，3 種尖頂羊肚菌平均總酚含量可達(dá)5.958 mg GAE/g，比香菇[24]和香蕉果肉[25]中的多酚含量高，但略低于蘋果果肉多酚[26]。

2.2不同產(chǎn)地尖頂羊肚菌多酚清除DPPH自由基能力比較

表2　3種尖頂羊肚菌多酚DPPH自由基清除率回歸方程Table 2 regression equations for DPPH radical scavengin g capacity of polyphenols in three kinds of Morchella conica Peerrss.

DPPH自由基是一種穩(wěn)定的自由基，能接受電子或氫自由基，形成一個穩(wěn)定的反磁性分子，抗氧化劑對DPPH自由基的清除原理，是基于它的供氫能力[27]。表2為3 種不同產(chǎn)地尖頂羊肚菌多酚DPPH自由基清除率回歸方程。對比不同質(zhì)量濃度下多酚提取液DPPH自由基清除能力發(fā)現(xiàn)，隨著提取液中羊肚菌多酚（游離酚，結(jié)合酚）質(zhì)量濃度升高，其DPPH自由基清除率不斷升高。

圖1　3種尖頂羊肚菌多酚DPPH自由基清除率（IICC5500）Fig.1 DPPH radical scavenging rates (IICC5500) of polyphenols in three kinds of Morchella conica Pers.

由圖1可知，尖頂羊肚菌結(jié)合酚清除DPPH自由基能力顯著強于游離酚，且兩者均強于對照抗壞血酸，說明尖頂羊肚菌多酚具有較強的DPPH自由基清除能力；西藏尖頂羊肚菌游離酚的IC50值（0.572 μg/mL）顯著低于云南尖頂羊肚菌（0.737 μg/mL）和新疆尖頂羊肚菌（0.800 μg/mL）（P＜0.05）；而其結(jié)合酚的IC50值（0.061 μg/mL）與新疆尖頂羊肚菌（0.056 μg/mL）無顯著差異，但顯著低于云南尖頂羊肚菌（0.114 μg/mL）（P＜0.05），因此，西藏尖頂羊肚菌多酚清除DPPH自由基能力強于云南和新疆尖頂羊肚菌多酚。

2.3不同產(chǎn)地尖頂羊肚菌多酚的還原力比較

圖2　3種尖頂羊肚菌游離酚的還原力Fig.2 Reducing power of free phenols in three kinds of Morchella conica Pers.

圖3　3種不同羊肚菌結(jié)合酚的還原力Fig.3 Reducing power of bound phenols in three kinds of Morchella conica Pers.

化合物的還原力是基于Fe3＋向Fe2＋轉(zhuǎn)換的原理來判斷其潛在抗氧化活性的一個重要指標(biāo)[28]。由圖2、3可知，隨著多酚提取液質(zhì)量濃度升高，其吸光度也不斷提升，表明其抗氧化能力隨多酚質(zhì)量濃度的增加而提高；同等質(zhì)量濃度下尖頂羊肚菌多酚還原力弱于對照抗壞血酸。當(dāng)質(zhì)量濃度為90 μg/mL時，西藏、云南、新疆羊肚菌游離酚的吸光度分別為0.484、0.422、0.388；結(jié)合酚的吸光度分別為0.737、0.512、0.368，表明在一定質(zhì)量濃度下，結(jié)合酚還原力強于游離酚，其中西藏尖頂羊肚菌多酚還原力最強。

2.4不同產(chǎn)地尖頂羊肚菌多酚清除ABTS＋·能力比較

表3　3種尖頂羊肚菌多酚ABTS＋·清除率回歸方程Table 3 Regression equation of ABTS＋radical scavenging capacity off polyphenols in three kinds of Morchella conica Peerrss..

藍(lán)綠色的ABTS＋·穩(wěn)定性高，當(dāng)存在具有供氫能力的抗氧化劑時，可使其還原成無色的ABTS，根據(jù)ABTS＋·溶液前后吸光度的變化可測定樣品抗氧化能力[29]。表3 為3 種不同產(chǎn)地尖頂羊肚菌多酚ABTS＋·清除率回歸方程。對比不同質(zhì)量濃度下多酚提取液ABTS＋·清除能力發(fā)現(xiàn)，隨著羊肚菌多酚（游離酚、結(jié)合酚）提取液質(zhì)量濃度的升高，其ABTS＋·清除率不斷升高。

圖4　3種尖頂羊肚菌多酚ABTS＋·清除率（IICC5500）Fig.4 ABTS＋· scavenging capacity (IICC5500) of polyphenols in three kinds of Morchella conica Pers.

由圖4可知，尖頂羊肚菌結(jié)合酚清除ABTS＋·能力強于游離酚，但兩者均弱于對照抗壞血酸；新疆尖頂羊肚菌游離酚的IC50值（3.746 μg/mL）顯著低于西藏尖頂羊肚菌（4.694 μg/mL），但與云南尖頂羊肚菌（3.683 μg/mL）無顯著差異；而其結(jié)合酚的IC50值（2.696 μg/mL）顯著低于西藏和云南尖頂羊肚菌（P＜0.05），表明新疆尖頂羊肚菌多酚具有較好的ABTS＋·清除能力。

2.5不同產(chǎn)地尖頂羊肚菌多酚的抗氧化能力指數(shù)比較

ORAC法是根據(jù)ABAP自由基破壞熒光探針（熒光素鈉），使熒光強度產(chǎn)生變化的原理，以Trolox為定量標(biāo)準(zhǔn)，在多功能熒光酶標(biāo)儀中進(jìn)行分析的方法。熒光強度變化大小反映ABAP的破壞程度，當(dāng)抗氧化劑存在時，它可延緩ABAP引起的熒光變化，其抑制程度反映了它對自由基的抗氧化能力[30]，ORAC值越大，表明抗氧化劑的抗氧化能力越強。

圖5　3種尖頂羊肚菌多酚ORAC值Fig.5 ORAC values of polyphenols in three kinds of Morchella conica Pers.

由圖5可知，3 種尖頂羊肚菌游離酚的ORAC值均顯著高于結(jié)合酚（P＜0.05）；新疆尖頂羊肚菌游離酚和結(jié)合酚的ORAC值分別為11 973 μmol TE/100 g和916 μmol TE/100 g，均分別顯著高于另外兩個產(chǎn)地尖頂羊肚菌的游離酚和結(jié)合酚（P＜0.05），表明新疆尖頂羊肚菌多酚具有較強的抗氧化能力；而西藏尖頂羊肚菌游離酚和結(jié)合酚的ORAC值較低，分別為5 774.51、291 μmol TE/100 g，不足新疆尖頂羊肚菌多酚ORAC值的一半。

2.6尖頂羊肚菌多酚組分分析

由紫外二極管矩陣檢測器200～600 nm波長范圍內(nèi)掃描可得各色譜峰的光譜圖。由于各多酚類物質(zhì)在280 nm波長左右均有較大吸收，因此實驗選擇檢測波長為280 nm。圖6為5 種標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相色譜圖。通過計算峰面 積與樣品質(zhì)量濃度之間的關(guān)系，得到多酚標(biāo)準(zhǔn)品的回歸方程，見表4。

圖6　多酚標(biāo)準(zhǔn)品HPLC色譜圖Fig.6 Chromatogram of polyphenol standard mixture

表4　5種標(biāo)準(zhǔn)品的回歸方程Table 4 regression equations of 5 stnard substances

表5　3種尖頂羊肚菌多酚成分和含量Table 5 Compounds and contents of polyphenols in Morchella conica Peerrss. μg/g

由表5可知，游離酚主要由沒食子酸、原兒茶酸、對羥基苯甲酸、綠原酸4 種酚酸和1 種黃酮類物質(zhì)兒茶素組成，結(jié)合酚主要由沒食子酸、原兒茶酸、綠原酸3 種酚酸組成，說明尖頂羊肚菌多酚組分主要為酚酸類，少量為黃酮，與Palacios等[31]研究結(jié)果一致。3 種尖頂羊肚菌游離酚組分中，沒食子酸含量均為最高，分別為云南尖頂羊肚菌1 043.49 μg/g、西藏尖頂羊肚菌951.20 μg/g、新疆尖頂羊肚菌1 124.13 μg/g；兒茶素含量較低，分別為云南尖頂羊肚菌555.69 μg/g、西藏尖頂羊肚菌396.51 μg/g、新疆尖頂羊肚菌518.30 μg/g。結(jié)合酚組分中，綠原酸含量最高，分別為云南尖頂羊肚菌20.21 μg/g、西藏尖頂羊肚菌13.01 μg/g、新疆尖頂羊肚菌13.18 μg/g；原兒茶酸含量最低，分別為云南尖頂羊肚菌9.02 μg/g、西藏尖頂羊肚菌8.65 μg/g、新疆尖頂羊肚菌7.11 μg/g。3 種尖頂羊肚菌多酚物質(zhì)組成較一致，但組分含量差異明顯。

3　結(jié) 論

3 種不同產(chǎn)地尖頂羊肚菌平均總酚含量為5.958 mg GAE/g，其中游離酚含量為4.928～6.157 mg GAE/g，結(jié)合酚含量為0.188～0.250 mg GAE/g，游離酚約為結(jié)合酚的25倍；云南尖頂羊肚菌結(jié)合酚含量最高（（0.250±0.018） mg GAE/g ），顯著高于新疆和西藏尖頂羊肚菌（P＜0.05），西藏尖頂羊肚菌結(jié)合酚含量最低（（0.188±0.026） mg GAE/g ）；云南尖頂羊肚菌游離酚含量最高（（6.157±0.192） mg GAE/g ），西藏尖頂羊肚菌游離酚含量最低（4.928±0.045 mg GAE/g ）。體外抗氧化結(jié)果表明，3 種不同產(chǎn)地尖頂羊肚菌多酚均具有一定的抗氧化活性，其中對DPPH自由基的清除能力最強；西藏尖頂羊肚菌多酚的DPPH自由基清除能力和還原力最強，但其ABTS＋·清除能力和ORAC值最低；新疆尖頂羊肚菌多酚的ABTS＋·清除能力最強和ORAC值最高，而其DPPH自由基清除能力和還原力較弱。HPLC鑒定發(fā)現(xiàn)3 種尖頂羊肚菌多酚組成一致，但組分含量差異較大。多酚類物質(zhì)抗氧化活性是其各組分綜合作用的結(jié)果，不同組分對其活性的貢獻(xiàn)并不相同[32]，而本研究也發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地尖頂羊肚菌多酚含量與體外抗氧化活性并不存在線性關(guān)系，而且在不同抗氧化活性評價體系中的抗氧化效果不盡相同，這與多酚各組分含量差異、粗提物中其他非酚類抗氧化化合物的存在及各化學(xué)抗氧化方法原理各異有密切關(guān)系。

因此，在后續(xù)的研究中應(yīng)對多酚粗提物進(jìn)行純化，并利用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法深入探討多酚組成及含量，結(jié)合體內(nèi)外抗氧化活性測定方法，如細(xì)胞抗氧化活性（cellular antioxidant activity，CAA）和動物實驗等，綜合考慮化學(xué)抗氧化效果，進(jìn)而合理評價食用菌多酚的抗氧化活性。

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Polyphenol Components and Antioxidant Activity of Morchella conica Pers. from Three Different Habitats

LU Keke1, TAN Yurong1, WU Surui2, MING Jian1,3,*
(1. College of Food Science, Southwest University, Chongqing 400715, China; 2. Kunming Edible Fungi Institute, All China Federation of Supply and Marketing Cooporatives, Kunming 650223, China; 3. National Food Science and Engineering Experimental Teaching Center, Southwest University, Chongqing 400715, China)

Abstract:This study was conducted to investigate the phenolic components and in vitro antioxidant activity of Morchella conica Pers.. Both free and bound phenols were extracted from M. conica Pers. from three different habitats. Then, the DPPH radical scavenging capacity, reducing power, ABTS＋· scavenging capacity and oxygen radical absorbance capacity (ORAC) of the extracts were determined, and the phenolic components were identified by HPLC. The results revealed that the average total polyphenol content of three M. conica Pers. was approximately 5.958 mg GAE/g, the content of free phenols was approximately 25 times higher than bound phenols. The highest contents ((6.157 ± 0.192) and (0.250 ± 0.018) mg GAE/g, respectively) of both free and bound phenols were detected in M. conica Pers. from Yunnan compared to M. conica Pers. from Tibet with the lowest contents of (4.928 ± 0.045) and (0.188 ± 0.026) mg GAE/g, respectively. Phenolic acids and flavonoids were the major components of polyphenols, and their compositions were consistent among three growing areas although the contents were significantly different. Polyphenols in three different M. conica Pers., had a certain degree of antioxidant capacity, especially DPPH radical scavenging capacity. The DPPH radical scavenging capacity and reducing power of polyphenols in M. conica Pers. from Tibet were the strongest, while M. conica Pers. from Xinjiang possessed the highest ABTS＋· scavenging capacity and ORAC value.

Key words:Morchella conica Pers.; polyphenols; antioxidant activity; oxygen radical absorbance capacity (ORAC); high performance liquid chromatography (HPLC)

doi:10.7506/spkx1002-6630-201507002

中圖分類號：R151.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1002-6630（2015）07-0006-07

*通信作者：明建（1972—），男，教授，博士，研究方向為食品化學(xué)與營養(yǎng)學(xué)。E-mail：mingjian1972@163.com

作者簡介：盧可可（1991—），女，碩士研究生，研究方向為食品化學(xué)與營養(yǎng)學(xué)。E-mail：lukeke8868@163.com

基金項目：國家自然科學(xué)基金面上項目（31471576）；“十二五”國家科技支撐計劃項目（2013BAD16B01）

收稿日期：2014-10-16