唐 正 劉 镕 趙琴平 明珍平 鐘沁萍 蔣明森 董惠芬

武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院人體寄生蟲學(xué)教研室，武漢 430071；#通訊作者

日本血吸蟲酪蛋白激酶2α的表達(dá)、定位與免疫效果觀察*

唐 正 劉 镕 趙琴平 明珍平 鐘沁萍 蔣明森 董惠芬#

武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院人體寄生蟲學(xué)教研室，武漢 430071；#通訊作者

目的：克隆、表達(dá)日本血吸蟲酪蛋白激酶2α(SjCK2α)基因，并定位表達(dá)，觀察其表達(dá)產(chǎn)物的免疫效果。方法：首先針對(duì)SjCK2α基因的開放閱讀框設(shè)計(jì)特異性引物，以日本血吸蟲成蟲RNA逆轉(zhuǎn)錄后的cDNA為模板，擴(kuò)增目的基因；并使其帶上限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)，獲得SjCK2α的目的基因片段，回收后連入表達(dá)質(zhì)粒pET28a(+)。重組質(zhì)粒pET28a(+)-SjCK2α轉(zhuǎn)化入BL21細(xì)胞，構(gòu)建表達(dá)菌；并用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)菌的表達(dá)；用Ni-NTA樹脂純化后透析，收集重組目的蛋白。用重組蛋白免疫家兔制備多克隆血清。免疫組化法對(duì)皮膚型童蟲、肺型童蟲和常規(guī)培養(yǎng)肺型童蟲進(jìn)行組織學(xué)定位。將重組蛋白免疫小鼠，再用日本血吸蟲尾蚴攻擊感染，6周后剖殺，灌注法收集日本血吸蟲成蟲，計(jì)算減蟲率；摘取肝臟組織剪碎、KOH消化后收集蟲卵，計(jì)算減卵率；摘取眼球取血，收集血清，ELISA檢測(cè)細(xì)胞因子干擾素γ(IFN-γ)和白細(xì)胞介素4(IL-4)的含量。另設(shè)感染對(duì)照組和化工劑對(duì)照組進(jìn)行比較分析。結(jié)果：擴(kuò)增的目的基因SjCK2α基因片段長度為1047bp，構(gòu)建的重組質(zhì)粒pET28a(+)-SjCK2α轉(zhuǎn)化入BL21細(xì)胞后，構(gòu)建的表達(dá)菌在IPTG誘導(dǎo)下獲得大量重組蛋白，純化后免疫家兔獲得多克隆血清。免疫組化染色發(fā)現(xiàn)，SjCK2α主要定位于童蟲表面。將重組蛋白免疫小鼠后，攻擊感染6周后獲得15%的減蟲率和17%的減卵率，與對(duì)照組的減蟲率和減卵率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；此時(shí)，感染對(duì)照組的IFN-γ和IL-4含量分別為42.77±12.11和17.31±9.13，佐劑對(duì)照組的IFN-γ和IL-4的含量分別為30.99±16.55和18.65±7.52，重組蛋白免疫組的IFN-γ和IL-4的含量分別為36.19±14.56和9.90±5.20，三組間兩指標(biāo)比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)成功克隆和表達(dá)SjCK2α基因，其主要表達(dá)于童蟲表面；SjCK2α免疫小鼠后未能獲得免疫性保護(hù)。

日本血吸蟲；酪蛋白激酶2α；克隆表達(dá)；定位；免疫保護(hù)

國家自然科學(xué)基金(No.81273010)