甘泉涌，葉海輝

（1.襄陽職業(yè)技術(shù)學院 醫(yī)學院， 湖北 襄陽 441021；2.襄陽市中心醫(yī)院 檢驗部， 湖北 襄陽 441021）

近年來，新生兒溶血病（Hemolytic Disease of New-born，HDN）的診斷與防治不斷受到重視，成為臨床研究的一大熱點，建立一種能夠盡早為婦幼科提供HDN實驗室診斷依據(jù)的簡便快速而靈敏度高的檢測方法尤為重要。新生兒溶血三項試驗即紅細胞直接抗人球蛋白試驗（直抗試驗）、血清游離抗體試驗（游離試驗）和紅細胞致敏抗體放散試驗（放散試驗）。其中，提高直接抗人球蛋白（DAT）檢測靈敏度能夠相應(yīng)提高HDN的初次確診率。[1]本文探討了臨床疑似HDN患兒直接抗人球蛋白的三種檢測方法，對HDN的診斷有著較為重要的意義。

一、材料和方法

（一）標本來源

2011年7月至2013年7月在襄陽市中心醫(yī)院門診及住院的疑似ABO-HDN的高膽紅素血癥新生兒242例，均排除遺傳性溶血性疾病，年齡0.5 d～7 d，男134例，女108例。抽取患兒靜脈血5 ml，同時抽取母親血液，避免溶血，離心得血清，并制備紅細胞懸液備用。母親血型均為O型，Rh（+）；患兒血型均為Rh（+），A型110例，B例132例。

（二）主要儀器和試劑

微柱凝膠抗人球蛋白檢測卡（西班牙Grifols公司）、玻璃珠微柱抗人球蛋白檢測卡（美國強生Ortho公司）、抗人球蛋白試劑（上海血液生物醫(yī)藥有限公司）、ABO試劑紅細胞（上海血液生物醫(yī)藥有限公司）、卡式離心機ID-Centrifuge-12 SⅡ（瑞士Diamed公司）、微電腦控制離心機（臺灣貝索生物技術(shù)有限公司）。

（三）微柱凝膠卡式法

將微柱凝膠抗人球蛋白檢測卡第一孔設(shè)為測定孔，向內(nèi)加入50 uL 1%患兒紅細胞懸液；設(shè)第二孔為陰性對照，加入50 uL 1%標準紅細胞懸液，用專用離心機離心后，按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》判讀結(jié)果。[2]

（四）玻璃珠微柱卡式法

將玻璃珠微柱抗人球蛋白檢測卡第一孔設(shè)為測定孔，向內(nèi)加入50 uL 1%患兒紅細胞懸液；設(shè)第二孔為陰性對照，加入50 uL 1%標準紅細胞懸液，用專用離心機離心后，按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》判讀結(jié)果。[2]

（五）傳統(tǒng)試管法

向小試管中滴加50 uL生理鹽水，再加入50 uL抗人球蛋白血清，混勻，離心1 min后，觀察結(jié)果，凝集者為陽性，無凝集者為陰性。同時設(shè)生理鹽水為陰性對照。

（六）統(tǒng)計學處理

采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

二、結(jié)果

1.不同母嬰血型新生兒溶血DAT檢測陽性結(jié)果分布：242例疑似HDN患兒中，不同檢測方法，母嬰血型O-A和O-B的DAT陽性例數(shù)不同，見表1。

表1 不同母嬰血型、不同檢測方法DAT檢測結(jié)果

2.三種方法檢測242例DAT結(jié)果比較：見表2。

表2 三種方法檢測DAT結(jié)果比較

經(jīng)統(tǒng)計學分析，三種方法任何兩種比較，其差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

3.三種方法DAT不同凝集水平構(gòu)成分布：見表3。

表3 三種方法DAT不同凝集水平構(gòu)成分布（n）

三、討論

新生兒溶血病包括胎兒和新生兒溶血，主要是母親和胎兒血型不合時，胎兒紅細胞經(jīng)胎盤進入母體，刺激后者產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，而產(chǎn)生的IgG類抗體又能經(jīng)胎盤結(jié)合胎兒紅細胞，產(chǎn)生溶血，嚴重者可造成胎兒死亡。若胎兒存活出生，新生兒體內(nèi)的IgG抗體將繼續(xù)造成溶血，嚴重者可造成神經(jīng)系統(tǒng)不可逆損害甚至死亡。[3]目前對HDN的可靠診斷手段是新生兒溶血三項試驗（直抗試驗、游離試驗、放散試驗）。直抗試驗用于檢測紅細胞是否被IgG類抗體致敏，而游離試驗和放散試驗則檢測IgG類抗體的存在。[4]直抗試驗是免疫學方法的基礎(chǔ)，DAT檢測目前在臨床應(yīng)用最為廣泛，對新生兒溶血、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等免疫性疾病的診斷和鑒別診斷有著重要價值。

本研究利用抗人球蛋白血清與患兒紅細胞發(fā)生凝集反應(yīng)來檢測患兒紅細胞是否被抗體致敏，在HDN診斷中具有重要意義。DAT檢測陽性提示患兒體內(nèi)紅細胞被抗體致敏，不同DAT陽性水平提示著不同程度的溶血，而DAT陽性水平與抗體類型、抗體效價水平及紅細胞被致敏的程度有關(guān)。[5]目前，對新生兒DAT檢測方法主要有微柱凝膠卡式法、玻璃珠微柱卡式法和傳統(tǒng)試管法。兩種卡式法的卡內(nèi)介質(zhì)分別為凝膠顆粒和細微玻璃珠，卡式法都具有操作條件簡單、時間較短、室間差異變化小、靈敏度較高的優(yōu)點。[6]

本文使用三種方法檢測疑似HDN患兒血液中的DAT，在對242例臨床標本的檢測中發(fā)現(xiàn)，微柱凝膠卡式法陽性檢出率為34.7%（84/242），玻璃珠微柱卡式法陽性檢出率為64.5%（156/242），傳統(tǒng)試管法陽性檢出率為27.3%（66/242）。結(jié)果顯示，玻璃珠微柱卡式法的陽性檢出率高于微柱凝膠卡式法和傳統(tǒng)試管法。三種方法兩兩比較，其差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。表3顯示，DAT陽性標本中，DAT凝集水平在1+～2+時，玻璃珠微柱卡式法檢出率最高；DAT凝集水平在3+～4+時，細胞結(jié)合較緊密，兩種卡式法差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；任意卡式法與試管法比較，其檢出率均高于后者，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。DAT陽性水平越高，不同檢測方法的陽性檢出率差異越小。因此，在對HDN的早期診斷方面，玻璃珠微柱卡式法比微柱凝膠卡式法和傳統(tǒng)試管法具有更大的優(yōu)勢，值得推廣。[7]

新生兒溶血的實驗室診斷是一個比較新穎且復(fù)雜的熱點問題，理想的診斷方法應(yīng)該達到快速、簡便、靈敏、特異性強的特點。為了作出早期準確的診斷，應(yīng)盡量采用微柱卡式法，進一步提高對新生兒溶血的診斷，為臨床診斷和及時治療提供可靠的實驗室依據(jù)。此外，本文僅研究了新生兒溶血三項試驗之一的直抗試驗，DAT陽性對HDN診斷極有幫助，但陰性也不能完全排除本病，臨床上需同時結(jié)合游離試驗和放散試驗結(jié)果來共同分析。

［1］黎海瀾，焦偉.ABO新生兒溶血病實驗室檢測方法及臨床應(yīng)用[J].檢驗醫(yī)學與臨床，2013（2）：200-201.

［2］葉應(yīng)嫵，王毓三.全國臨床檢驗操作規(guī)程（第3版）[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2010.

［3］夏琳.臨床輸血診療技術(shù)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2008.

［4］徐桂珍,費淑蘭.118例高膽紅素血癥新生兒的溶血病抗體檢測結(jié)果分析[J].中國社區(qū)醫(yī)師，2010（33）：51-52.

［5］裘曉樂，戴佩佩.應(yīng)用微柱凝膠技術(shù)篩查新生兒ABO溶血病及結(jié)果分析[J].臨床血液學雜志，2010（8）：451-453.

［6］唐任光，黃慶.微柱凝膠卡式法和傳統(tǒng)試管法檢測新生兒溶血癥3項結(jié)果的比較[J].中國輸血雜志，2009（11）：913-914.

［7］唐聰海，原敏.兩種微柱法直接抗人球測定結(jié)果比較[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新，2013（2）：110-111.